2022年微生物学实验教学大纲.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 课程编号：微生物学试验教学大纲学时数： 108 讲课： 108 学制：四年制本科 适合专业：生物科学相关专业一、本课程的性质和任务（一）课程的性质：微生物学试验主要任务是使同学把握讨论与应用微生物的主要方法与技术,包括经典的、 常规的、 以及现代的方法与技术, 使同学具有适应于从事相关学科的基础理论讨论与实际生产应用的微生物学试验技能；提高同学分析问题和解决问题的才能； 依据本学科的特点, 逐步使同学熟识微生物的基本特性,比较它们 与其它生物的相像和不同之处, 知道如何讨论微生物以及对讨论中所显现的问题 点样分析,并加以解决；（二）课程的任务：

2、微生物学试验是生物学重要的基础课之一,要求同学熟识微生物学方法与技术,把握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学试验中最重要的内容,重点掌 握最基本的无菌操作技能,如接种、纯培育、计数等；二、本课程与其他课程的联系：1. 通过老师示范、讲解与同学实际操作相结合方法,使同学坚固树立无菌 概念,把握显微镜的使用、生物染色技术、外形学观看的方法、微生物计数、培育基的配置和灭菌方法、微生物分别、纯化等基本操作技能,基本明白常用 的仪器设备的基本原理、构造、使用方法及使用中的留意事项,树立严谨求实 的科学态度,提高观看、分析问题和解决问题的才能,培育勤俭节省、爱惜公 物和相互协作的优良作风；2. 本试验课

3、内容包括验证性试验、综合性试验两个部分；验证性试验主要1 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 通过光学显微镜镜检观看方法进行教学,综合试验在老师指导下同学依据所掌 握的理论基础和试验技能,由同学自己动手完成；试验过程要求同学认真观看 试验现象,完整记录原始试验数据、结果,分析试验现象并认真填写试验报 告；三、教学内容（一）试验一 试验室安全训练与微生物学试验室常用的器皿目的要求 把握试验室安全规章, 明白微生物学试验所用的器皿, 因其大多要进行消毒、灭菌和用来培育微生物,因此明白其质量、洗涤和包装方法的要求；试验内容

4、 一、器皿的种类、要求与应用：1、试管 大试管 约 18mm 180mm : 可装倒平板用的培育基；可作制备斜面用；装液 体培育基用于微生物的振荡培育 中试管 13 15mm 100 150mm: 装液体培育基培育细菌或做斜面用；用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验；小试管 10 12mm 100mm:一般用于糖发酵或血清学试验, 和其它需要节 省材料的试验；2、容量瓶 主要用于精确配制肯定浓度的溶液,它是一种瘦长颈、梨形的平底玻璃瓶,配有磨口塞,瓶颈上刻有标线；3、量筒 用来量取液体体积的一种玻璃仪器, 外壁上有刻度； 常用量筒的规格有 5ml、10ml、25ml、50ml、100ml、

5、250ml 等；4、三角瓶 用来装无菌水、培育基和振荡培育微生物等；5、烧杯 呈圆柱形, 顶部的一侧开有一个槽口, 便于倾倒液体, 有些烧杯外壁标有刻 度,可以粗略地估量烧杯中液体的体积,这种烧杯叫印标烧杯,也叫刻度烧杯,其分度并不非常精确,答应误差一般在5%；2 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 6、烧瓶通常具有圆肚细颈的外观, 因瓶口很窄,不适用玻璃棒搅拌, 如需要搅拌时,可以手握瓶口稍微转动手腕即可顺当搅拌混匀；烧瓶随其外观的不同分为圆底烧瓶和平底烧瓶两种, 通常平底烧瓶用在室温下的反应,而圆底烧瓶就用在较高

6、温的反应,这是由于圆底烧瓶的玻璃厚薄较匀称,可承担较大的温度变化；7、三角烧瓶（锥形瓶）锥形瓶瓶体较长,底大而口小,盛入溶液后,重心靠下,极便于手持振荡,故常用于容量分析中作滴定容器； 也可以供加热、 煮沸、贮存、消毒各种液体用,常用容量有： 100ml、250ml、500ml、1000ml 等；8、烧杯 用来配制培育基与各种溶液等；9、离心管 常用的有 0.5ml 、1.5ml 、10ml、15ml、20ml 等规格,其上有刻度,专供离 心机使用；主要用于微生物分子生物学试验中,小量菌体的离心,DNA或 RNA的 检测和提取等；10、移液管和吸管 均用于吸取和转移少量液体； 移液管上刻有标线

7、, 在标明的温度下, 当吸取 溶液至弯月面与标线相切后, 让溶液自然放出, 此时所放出溶液的体积即等于管上所标的体积；常用的移液管有1mL、2mL、5mL、1OmL等；吸管常用的规格有两种：一种为无刻度的毛细管；另一种为有刻度吸管,管壁有精细的刻度；一般长 为 25cm,常用的容量为 0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL、1OmL；11、染色缸有方形和圆形两种,方形的较大,可放10 张载玻片,圆形的较小,可放5张载玻片,供细菌、血液及组织切片的标本染色用；12、漏斗 分短颈和长颈式两种； 漏斗直径大小不等, 有 60mm、100mm和 150mm等几种 不同规格,供分装溶液或者上垫滤

8、纸、纱布、棉花作过滤杂质用；13、滴瓶 有橡皮帽式和玻塞式, 分无色和棕色, 容量有 30mL和 60mL等,供储存试剂 或染色液用；14、下口瓶分为有龙头和无龙头两种；容量有 水或常用的消毒药液用；15、培育皿2500mL、5000mL两种规格；供存放蒸馏名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 由一底一盖组成一套,常用的培育皿皿底直径90 mm,高 15mm,皿底皿盖均为玻璃制成；在培育皿内倒入适量固体培育基制成平板,可用于分别、纯化、鉴 定菌种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等；16、载玻片及盖玻片 载玻片主要

9、用于微生物涂片、染色,做外形观看等；另有凹玻片,就是在一 块厚玻片当中有一圆形凹窝, 做悬滴观看活细菌及血清学试验用；盖玻片为极薄 的玻片,用于标本封闭及悬滴标本等；17、德汉氏小管观看细菌在糖发酵培育基内产气情形时,一般在小试管内再套一倒置的小套管（约 6mm 36mm）,此小管即为德汉氏小管,又称发酵小套管；18、双层瓶 由内外两个玻璃瓶组成, 内层小锥形瓶放香柏油, 供油镜观看微生物时使用,外层瓶放二甲苯,用以擦净油镜头；19、接种工具接种工具有接种环,接种针,接种钩,接种铲,玻璃涂布器等；为细菌学检验工作中接种、 分别细菌或挑取菌落制作涂片所必不行少的工具；接种环常装于铝质的握柄上,用

10、坏后可随时更换；二、玻璃器皿的洗涤方法 1、新玻璃器皿的洗涤 在 2%的盐酸溶液中浸泡数小时,用自来水冲洗洁净；2、旧玻璃器皿的洗涤（1）试管、培育皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷,自来水冲洗；A 装有固体培育基：刮掉,洗涤；B 带菌的器皿：2%来苏尔或 0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡 24 小时或煮沸 0.5 小时,然后洗涤；C 带病原菌培育物的器皿：先高压蒸汽灭菌,倒去培育物；（2）玻璃吸管：吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接,反复冲洗；A 吸过血液、 血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立刻投入盛有自来水的容器中浸泡,试验后集中冲洗；B 塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出,然后冲洗；C 吸过含

11、有微生物培育物的吸管：24 小时然后洗；2%来苏尔或 0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡D 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时,再冲洗；洗净后的试管倒置于试管筐内, 三角瓶倒置于洗涤架上, 培育皿的皿底和皿4 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 盖分开,依次压着皿边排列倒扣在桌上 , 晾干；洗涤后,如内壁的水匀称分布成一薄层,表示完全洗净,如仍挂有水珠,就 需用洗涤液浸泡数小时,然后再用自来水冲洗；三、各种器皿的包扎 1、培育皿的包扎：培育皿常用旧报纸紧紧包裹（也可用金属筒包装）干热或湿热灭菌； 2、吸管的包扎：,一包

12、710 套,包好后在上端约 0.5cm 处,塞入一小段 1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉）,目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内,纸条包扎；或不慎将菌液吸出管外； 然后用 45 cm宽的长3、试管和三角瓶等的包扎：试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞；用二层报纸包扎好（如有牛皮纸,成效更好）,进行干热或湿热灭菌；试管较多时,一般 层报纸包扎；附：棉塞的制作：7 个或 10 个一组,再用双棉塞可过滤空气, 防止杂菌侵入并可减缓培育基水份的蒸发,故在微生物工 作中始终普遍使用着；做棉塞的要求：松紧适中,不能太松也不能太紧,太松达不到滤菌的目的,并且易脱落,太紧通气不好,操作不便,做到手拿不掉,又易转动

13、；深浅适度,棉塞总长 1.5 寸左右,约有 1/3 在试管外, 2/3 在试管内,顺时针方向塞入；棉 花要求采纳一般棉花,它能防潮不易吸水,不要用脱脂药棉,它易吸水又昂贵；（由老师示范）试验材料和用品 以上全部器皿；（二）试验二 环境微生物的检查目的要求 1、证明试验室环境与体表存在微生物；2、比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型；3、观看不同类群微生物的菌落外形特点；4、体会无菌操作的重要性；试验原理平板培育基含有细菌生长所需要的养分成分,当取自不同来源的样品接种于名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基

14、上,在合宜温度下培育,1-2d 内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁衍,形成一个可见的细胞群体的集落,称为菌落； 每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点,例如菌落的大小,表面干燥或潮湿、隆起或扁平、粗糙或光滑,边缘整齐或不整齐, 菌落透亮或半透亮或不透亮,颜色以及质地疏松或紧密等；因此,可通过平板培育来检查环境中细菌的数量和类型；试验内容 1、环境微生物的检测：倒平板、接种环境微生物；2、灭菌器皿的预备：学习包扎平皿、移液管；试验材料和用品 1、材料：环境中各种微生物；2、用品：牛肉膏蛋白胨培育基、无菌平皿、移液管、平皿、酒精灯、牛皮 纸、记号笔；（三）试验三 显微镜的构造、性能和使用方法

15、目的要求1、学习把握油镜的规范使用方法；2、复习把握光学显微镜的基本结构及使用方法；试验原理 油镜工作原理：1、增加照光明度；2、显微镜的辨论力：指显微镜能够辨别两点之间最小距离的才能；它与接 物镜的数值孔径成正比,与光的波长成反比；辨论力 =（1/2 光波长度） / 数值孔径 试验内容 1、复习显微镜的使用方法；2、油镜的使用原理、操作要点（包括清洁方法）；3、当堂考核油镜使用方法,合格方能通过；试验材料和用品同学显微镜、细菌三型装片；双层瓶 内装香柏油和乙醚酒精擦拭液 、擦镜纸；（四）试验四 细菌的简洁染色与显微观看目的要求6 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 18

16、页精选学习资料 - - - - - - - - - 1、学习微生物涂片、染色的基本技术,把握细菌的简洁染色法；2、初步熟识细菌的个体外形、菌落外形特点；3、巩固显微镜 油镜 的使用方法和无菌操作技术；试验原理简洁染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法；此法操作简便, 适用于菌体一般外形和细菌排列的观看；常用碱性染料进行简洁染色,这是由于：在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷 酸性染料电离时, 其分子的染色部分带正电荷 ,因此碱性染料的染色部分很简洁与细菌结合使细菌着色；染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别；常

17、用作简洁染色的染料有：美蓝、结 晶紫、碱性复红等；当细菌分解糖类产酸使培育基pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色；试验内容 1、微生物菌落外形的观看： 几种代表类型微生物菌落外形特点明白、辨识；2、细菌简洁染色及个体外形的观看：无菌接种操作；涂片、干燥、固定、染色、水洗、干燥、镜检；试验材料和用品 1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、环境微生物检测平板；2、用品：同学显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶 内装香柏油和乙醚酒精擦拭液 、擦镜纸；吕氏碱性美蓝染液（五）试验五 革兰氏染色 目的要求1、学习并初步把握革兰氏染色法； 或草酸铵结晶紫染液 ；2、明

18、白革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性；试验原理革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法,是1884 年由丹麦病理学家Christain Gram氏创立的,而后一些学者在此基础上作了某些改进；该染色法能将细菌分为 G菌和 G菌,是基于这两类细菌的细胞壁结构和成分不同；G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性, 使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色；G菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少, 经脱色剂处理后反而使肽聚糖名师归纳总结 - - - - - -

19、-第 7 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色；试验内容 1、革兰氏染色法基本步骤：制片初染媒染脱色复染镜检；2、染色成败缘由分析；3、试验操作考核一；试验材料和用品 1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌； 内装香柏油和乙 2、用品：同学显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶 醚酒精擦拭液 、擦镜纸；革兰氏染色液 结晶紫染液、卢戈氏碘液、 95乙 醇、番红液 ；（六）试验六 细菌的芽孢染色法目的要求 1、学习并把握芽孢染色法；2、观看芽孢的外形特点：外形、大小及着生位置；试验原理 芽孢染色法是利用芽孢和菌体对染色体

20、的亲合力的不同的原理,用不同的染 色体进行着色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区分；芽孢壁厚,透性低,着 5%）进 色、脱色均较困难,所以我们必需实行着色力强、浓度高的孔雀绿染液（行染色：染色过程中延长染色时间,10 分钟（一般为 23 分钟）并且在加热条件下进行染色；进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料就难以透出,如再利用复染液进行复染, 此时菌体就被染成红色, 而芽孢难以着色,仍呈绿色；试验内容 1、涂片：将培育 24 小时枯草杆菌作涂片、干燥、固定； 2、染色：涂片上盖上一张 2.5 2cm滤纸片,在上面滴加 56 滴孔雀绿（不 易过多,以铺满滤纸为宜） ,用镊子加在载玻片在火焰

21、上渐渐加热,使燃料冒蒸汽（但不沸腾）,切勿使燃料蒸干,随时添加染色液,保持 开头计时）；10 分钟（从冒蒸汽时 3、冲洗：取下冷却,取掉滤纸,冲洗至孔雀绿不再退色为止； 4、复染：用番红液复染 12 分钟,水洗,气干； 5、镜检：待干燥后,置油镜观看,芽孢呈绿色,菌体呈红色；试验材料和用品1、材料：枯草芽孢杆菌 1-2d 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培育物、梭状芽胞杆菌1-2d 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培育物；8 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2、用品： 5孔雀绿水溶液、 0.5%番红水溶液、无菌水、香柏油、二甲苯；一般光

22、学显微镜、 擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培育皿、双层瓶（内 装香柏油和二甲苯）、试管夹等；（七）试验七 细菌鞭毛染色及运动性观看目的要求 1、学习并初步把握鞭毛染色法,观看细菌鞭毛的外形特点；2、学习用压滴法观看细菌的运动性；试验原理鞭毛是细菌的运动“ 器官”,细菌是否具有鞭毛,以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要外形特点；细菌的鞭毛很纤细,其直径通常为 0.01 0.02微米,所以,除了很少数能形成鞭毛束 由很多根鞭毛构成 的细菌可以用相差显微镜直接观看到鞭毛束的存在外, 一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观看 到,而只能用电子显微镜观看； 要用一般光学显微镜观看细菌的鞭毛,

23、必需用鞭 毛染色法；试验内容 1、硝酸银染色法染色；2、压滴法观看细菌的运动性；试验材料和用品 1、材料：变形杆菌；2、用品：同学显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶 内装香柏油和乙 醚酒精擦拭液 、擦镜纸；鞭毛染色液 鞭毛染色液 A、鞭毛染色液 B；（八）试验八 酵母菌的外形观看及死活细胞的鉴别目的要求 1、观看酵母菌的外形及出芽生殖方式,学习区分酵母菌死活细胞的试验方 法；2、把握酵母菌的一般外形特点及其与细菌的区分；试验原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍；美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,仍原型无色；用美蓝对酵 母的活细胞进行染色时, 由

24、于细胞的新陈代谢作用, 细胞内具有较强的仍原才能,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的仍原型,因此,具有仍原才能的酵母活细胞名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 是无色的、 而死细胞或代谢作用柔弱的衰老细胞就呈蓝色或淡蓝色,借此即可对 酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别；试验内容 酵母菌的外形观看及死活细胞的鉴别；试验材料和用品 1、材料：酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae；2、用品：同学显微镜、酒精灯、载玻片、接种环；美蓝染色液；（九）试验九 霉菌的外形观看目的要求 1、学习并把握观看霉菌外形的基本方

25、法；2、初步明白霉菌的外形特点；试验原理0.05 和 O.1吕氏碱性霉菌的外形结构观看： 霉菌可产生复杂分枝的菌丝体, 分为基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到肯定阶段分化产生繁衍菌丝,由繁衍菌丝产生孢子； 霉菌菌丝体 特殊是繁衍菌丝 及孢子的外形特点是识别不同种类霉菌的重要依据；霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多 约为 310 微米 ,常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观看；试验内容 霉菌的观看（试管直接观看法） ；试验材料和用品 1、材料：细黄链霉菌或青色链霉菌、黑曲霉、根霉；2、用品：同学显微镜、体视镜、酒精灯、载玻片、镊子等；（十）试验十 培育基的配制与灭菌

26、目的要求 1、明白培育基的配制原理；2、通过对基础培育基的配制,把握配制培育基的一般方法和步骤；3、明白常见灭菌、清毒基本原理及方法；把握干热天菌、高压蒸汽灭菌及 过滤除菌的操作方法；试验原理 培育基是人工按肯定比例配制的供微生物生长繁衍和合成代谢产物所需要10 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 的养分物质的混合物；培育基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和 水；依据微生物的种类和试验目的不同,培育基也有不同的种类和配制方法；牛肉膏蛋白胨培育基是一种应用最广泛和最一般的细菌基础培育基,有时又 称为一般培育

27、基； 由于这种培育基中含有一般细胞生长繁衍所需要的最基本的营 养物质,所以可供微生物生长繁衍之用； 基础培育基含有牛肉膏, 蛋白胨和 NaCl；其中牛肉膏为微生物供应碳源、能源、磷酸盐和维生素, 蛋白胨主要供应氮源和维生素,而 NaCl 供应无机盐；由于这种培育基多用于培育细菌,因此要用稀酸 或稀碱将其 pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁衍；干热灭菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的成效；干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的；细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关,在菌体受热时, 当环境和细胞内含水量越大,就蛋白质凝固就越快,反

28、之含水量越小,凝固缓慢；高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,隔套间的水沸腾而产生蒸汽；从而使沸点增高,得到高于 体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的；试验内容 1、配制牛肉膏蛋白胨等培育基；2、高压蒸汽灭菌方法灭菌；试验材料和用品 NaCl、琼脂粉；1、试剂：牛肉膏、蛋白胨、通过加热,使灭菌锅 100的温度；导致菌2、用品：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培育基、分装器、天平、牛 角匙、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、移液管、高压蒸汽灭菌锅 等；（十一）试验十一 目的要求微生物的分别与纯化把握倒平板的方法和几种常用的分别纯化微生物的基本操作技术；试验原理 从混杂的

29、微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分别与纯化； 微生物在自然界中呈混杂状态存在,中进行分别；在保藏菌种时不慎污染时也需予以分别；要获得所需菌种, 必需从分别纯化方法很多, 基本原理相像, 即将待分别样品进行肯定的稀释,并使 微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在, 然后使其长成一个个纯种单菌落；分别纯化常用的方法有：11 名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1、简易单细胞挑取法 它需要特制的显微操纵器或其他显微技术,因而其使用受到限制；2、平板分别法：挑选适合于待分别微生物的生长条件,如

30、养分成分、 酸碱度、 温度和氧等要求, 或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从而剔除一些不需要的微生物微生物在固体培育基上生长形成的单个菌落,集合体；因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培育；稀释涂布平板或平板划线等技术完成；试验内容 1、土样样品的采集；2、倒平板；3、平板涂布法；4、制备土壤稀释液；5、稀释倾注法；试验材料和用品通常是由一个细胞繁衍而成的 猎取单个菌落的方法可通过1、材料：校内土、牛肉膏蛋白胨培育基（12ml）；2、用品：无菌培育皿、 无菌刮铲、1ml 无菌吸管、盛 9ml 无菌水试管 6 支、盛 90ml 无菌水三角瓶一个、酒精灯等；（十二）试

31、验十二 微生物的培育特点目的要求 1、明白不同的微生物在琼脂平板、斜面上、和液体培育基中的生长特点；2、懂得微生物接种技术的重要性与应用面；3、能描述微生物在琼脂平板、斜面上、和液体培育基中的培育特点；试验原理微生物的培育特点是指微生物在固体、半固体和液体培育基中生长后所表现出的群体外形特点；不同的微生物有其固有的培育特点,这些特点一般用固体、半固体和液体培育基来进行检测；试验内容 1、斜面接种；2、穿刺接种；3、液体培育基接种；4、培育；12 名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 5、细菌在固体斜面培育特点的观看与

32、描述；6、细菌在半固体培育基培育特点的观看与描述；7、细菌在液体培育基中培育特点的观看与描述；试验材料和用品 1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；2、用品：牛肉膏蛋白胨培育基、接种环、接种针、无菌吸管、酒精灯等；（十三）试验十三 菌种保藏目的要求 学习并把握菌种保藏的基本原理,比较几种不同的保藏方法；试验原理 微生物具有简洁变异的特性, 因此,在保藏过程中, 必需使微生物的代谢处 于最不活跃或相对静止的状态, 才能在肯定的时间内使其不发生变异而又保持生 活才能；低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢才能降低的重要因素,所以,菌种保 藏方法虽多,但都是依据这三个因素而设计的；1、传代培育保藏法 又有

33、斜面培育、穿刺培育、疱肉培育基培育等（后者作保藏厌氧细菌用）,培育后于 46冰箱内储存；2、液体石蜡掩盖保藏法 是传代培育的变相方法, 能够适当延长保藏时间, 它是在斜面培育物和穿刺 培育物上面掩盖灭菌的液体石蜡, 一方面可防止因培育基水分蒸发而引起菌种死 亡,另一方面可阻挡氧气进入,以减弱代谢作用；3、冷冻保藏法 可分低温冰箱（ -20 -30 , -50 -80 ）、干冰酒精快速冻结（约-70 ）和液氮（ -196）等保藏法；4、冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（ -70 左右）下快速冷冻,然后在减压下利用升华 现象除去水分（真空干燥） ；有些方法如滤纸保藏法、 液氮保藏法和冷冻干燥保

34、藏法等均需使用爱护剂来 制备细胞悬液, 以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害；爱护性溶质可通过 氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳固细胞成分的构型；爱护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等；试验内容13 名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1、斜面低温保藏法；2、液体石蜡保藏法；3、液氮冷冻保藏法；4、冷冻干燥保藏法；试验材料和用品 1、材料：大肠杆菌、酵母菌,放线菌和霉菌；2、用品：肉膏蛋白胨斜面培育基,灭菌脱脂牛乳,灭菌水,化学纯的液体 石蜡,甘油,五氧化二磷, 河沙,瘦黄土或红土, 冰块、食盐,干冰,

35、95酒精,10盐酸,无水氯化钙；灭菌吸管,灭菌滴管,灭菌培育皿,管形安瓿管,泪滴 形安瓿管（长颈球形底） ,40 目与 100 目筛子,油纸,滤纸条（ 0.5 1.2cm）,干燥器,真空泵,真空压力表,喷灯,氮冷冻保藏器；L 形五通管 , 冰箱,低温冰箱（ -30 ）,液（十四）试验十四 微生物数量的测定目的要求1、学习平板菌落计数的基本原理和方法；2、明白光电比浊计数法的原理,学习、把握光电比浊计数法的操作方法；3、明白血细胞计数板计数的原理,把握使用血细胞计数板进行微生物计数 的方法；试验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取肯定量的稀释样液接种到

36、平板上,经过培育, 由每个单细胞生长繁衍而形成肉眼可见的菌落； 为了清晰地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位 colony -forming 菌含量；units ,cfu 而不以肯定菌落数来表示样品的活当光线通过微生物菌悬液时, 由于菌体的散射及吸取作用使光线的透过量降 低；在肯定的范畴内,微生物细胞浓度与透光度成反比,与光密度成正比,而光密度或透光度可以由光电池精确测出；因此,可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度,作出光密度 - 菌数标准曲线； 因此,对于不同微生物的菌悬液进行光电 比浊计数应采纳相同的菌株和培育条件制作标准曲线；显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一

37、种特殊的具有确定面 积和容积的载玻片上 又称计菌器 ,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直 观的方法；试验内容14 名师归纳总结 - - - - - - -第 14 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1、平板计数法；2、光电计数法；3、直接计数法 显微镜 ；4、试验操作考核二；试验材料和用品 1、材料：大肠杆菌；2、用品：同学显微镜、血细胞计数板、计数器、分光光度计、盖玻片、无 菌毛细滴管、无菌平皿、无菌试管、无菌移液管、酒精灯、涂棒、镊子、记号笔等；牛肉膏蛋白胨培育基、无菌生理盐水；（十五）试验十五 目的要求理化因素对微生物的影响1、明白常用化学消毒剂对微生

38、物的作用；2、明白紫外线对微生物的作用；试验原理 常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机溶剂、卤族元素 及其化合物、 染料和表面活性剂等； 重金属离子可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性,也可破坏细胞膜透性使内含物外溢； 碘可与蛋白质酪氨酸残基不行逆结合而使蛋白 质失活,氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件 下可抑制细菌生长；紫外线灭菌是用紫外线灯进行的；波长为200-300nm 的紫外线都有杀菌能力,其中以 260nm的杀菌力最强； 在波长肯定的条件下, 紫外线的杀菌效率与强 度和时间的乘积成正

39、比； 紫外线杀菌机制主要是由于它诱导了胸腺嘧啶二聚体的 形成和 DNA链的交联, 从而抑制了 DNA的复制； 另一方面, 由于辐射能使空气中 的氧电离成 O,再使 O2 氧化生成自臭氧 O3 或使水 H2O氧化生成过氧化氢 H2O2；O3和 H2O2均有杀菌作用；试验内容 1、化学因素对微生物的影响；2、物理因素对微生物的影响；试验材料和用品1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；2、用品：酒精灯、接种环、记号笔、紫外灯等；牛肉膏蛋白胨平板；0.1% 升汞、 10%石炭酸、 75%酒精、 1%来苏尔、 0.05%龙胆紫；15 名师归纳总结 - - - - - - -第 15 页,共

40、18 页精选学习资料 - - - - - - - - - （十六）试验十六 目的要求生物因素对微生物的影响明白抗生素对微生物的作用原理,学习抗菌谱试验的基本方法；试验原理 生物之间的关系从总体上可分为互生、共生、寄生、拮抗等,微生物之间的 拮抗现象是普遍存在于自然界的, 很多微生物在其生命活动过程中能产生某种特 殊代谢产物如抗生素, 具有挑选性地抑制或杀死其它微生物的作用,不同抗生素 的抗菌谱是不同的,某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用；试验内容 1、生物因素对微生物的影响；2、试验操作考核三；试验材料和用品 1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；2、用品：酒精灯、接种环、记号笔、紫

41、外灯等；牛肉膏蛋白胨平板；氨苄 青霉素；四、作业（略）16 名师归纳总结 - - - - - - -第 16 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物学试验教学大纲说明一、本课程的重难点和广度（一）课程的重点：微生物学试验课程要求同学熟识微生物学方法与技术,把握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学试验中最重要的内容,重点把握最基本的无菌操作技能,如接种、纯培育、计数等；（二）课程的难点：微生物学试验课程的难点是与微生物学基础理论课紧密结合,使同学将理性学问与感性熟识有机地结合, 将书本学问用于试验, 在试验中更深地懂得基础理论,提高同学的综合才能与创新意识； ；

42、（三）课程的广度：微生物学试验是生物学重要的基础课之一,特殊是随着分子生物学的进展与拓宽,微生物学方法与技术显得尤为重要；此外,医学、农学、林学等学科,甚 至地质学、太空学等也需微生物的方法与技术；二、考核方法：考试占 30,平常占 70；三、学时安排：总学时： 108 讲课： 96 课程 内容课时安排讲6课试验一 试验室安全训练与微生物学试验617 名师归纳总结 - - - - - - -第 17 页,共 18 页精选学习资料 - - - - - - - - - 室常用的器皿试验二 环境微生物的检查66试验三 显微镜的构造、性能和使用方法66试验四 细菌的简洁染色与显微观看66试验五 革兰氏染色66试验六 细菌的芽孢染色法66试验七 细菌鞭毛染色及运动性观看66试验八 酵母菌的外形观看及死活细胞的66鉴别试验九 霉菌的外形观看66试验十 培育基的配制与灭菌66试验十一微生物的分别与纯化66试验十二微生物的培育特点66试验十三菌种保藏66试验十四微生物数量的测定66试验十五理化因素对微生物的影响66试验十六生物因素对微生物的影响66机动66考试66总学时108108四、参考书目：微生物学试验第 4 版、沈萍主编、高等训练出版社、2007 年