湿热灭菌讲稿..ppt

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1、湿热灭菌工艺的验证湿热灭菌工艺的验证标准与方法标准与方法GMP的新增内容63条：任何灭菌工艺在投入运用前，都必需通过物条：任何灭菌工艺在投入运用前，都必需通过物理检测手段验证其对产品的适用性及灭菌效果，即理检测手段验证其对产品的适用性及灭菌效果，即每种被灭菌产品和物品的全部部位都达到了设定的每种被灭菌产品和物品的全部部位都达到了设定的灭菌要求，必要时还应进行生物指示剂试验，作为灭菌要求，必要时还应进行生物指示剂试验，作为灭菌监控的补充手段。灭菌监控的补充手段。64条：应对灭菌工艺的有效性定期进行再验证（每条：应对灭菌工艺的有效性定期进行再验证（每年至少一次）。设备有重大变更后，应进行再验证。年

2、至少一次）。设备有重大变更后，应进行再验证。应保存再验证的结果和记录。应保存再验证的结果和记录。65条：全部的待灭菌物品均须按规定的要求处理，条：全部的待灭菌物品均须按规定的要求处理，以获得良好的灭菌效果，灭菌工艺的设计应确保灭以获得良好的灭菌效果，灭菌工艺的设计应确保灭菌完全。菌完全。GMP的新增内容66条：应通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产品条：应通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产品和物品的装载方式。和物品的装载方式。67条：应按供应商的要求保存和运用生物指示剂，条：应按供应商的要求保存和运用生物指示剂，并通过阳性比照来确认其质量。运用生物指示剂时，并通过阳性比照来确认其质量。运用生物指

3、示剂时，应实行严格措施，防止由其所致的微生物污染。应实行严格措施，防止由其所致的微生物污染。68条：应有明确区分已灭菌产品和待灭菌产品的方条：应有明确区分已灭菌产品和待灭菌产品的方法。每一车（盘或其它装载设备）产品或物料均应法。每一车（盘或其它装载设备）产品或物料均应贴签，清晰地注明品名、批号并标明是否已经灭菌。贴签，清晰地注明品名、批号并标明是否已经灭菌。必要时，可用湿热灭菌指示带加以区分。必要时，可用湿热灭菌指示带加以区分。69条：每一个灭菌批次都应有灭菌记录。应把灭菌条：每一个灭菌批次都应有灭菌记录。应把灭菌记录作为该批产品放行的依据。记录作为该批产品放行的依据。新版GMP（欧盟GMP）

4、：第一条第一条 无菌无菌药药品是指法定品是指法定药药品品标标准中列有无菌准中列有无菌检查项检查项目目的制的制剂剂和原料和原料药药，包括非，包括非经肠经肠道制道制剂剂、无菌的、无菌的软软膏膏剂剂、眼、眼膏膏剂剂、混、混悬剂悬剂、乳、乳剂剂及滴眼及滴眼剂剂等。等。其次章其次章 原原则则 第四条第四条 无菌无菌药药品的生品的生产产必需必需满满足其足其质质量和量和预预定用途的定用途的要求，最大限度降低微生物、各种微粒和要求，最大限度降低微生物、各种微粒和热热原的原的污污染。生染。生产产人人员员的技能、所接受的培的技能、所接受的培训训及其工作看法是达到上述目及其工作看法是达到上述目标标的关的关键键因素，

5、无菌因素，无菌药药品的生品的生产产必需必需严严格依据格依据细细心心设计设计并并阅历证阅历证的方法及的方法及规规程程进进行，行，产产品的无菌或其他品的无菌或其他质质量特性量特性绝绝不能只依靠于任何形式的最不能只依靠于任何形式的最终处终处理或成品理或成品检验检验。第五条第五条 无菌无菌药药品按生品按生产产工工艺艺可分可分为为两两类类：接受最：接受最终灭终灭菌工菌工艺艺的的为为最最终灭终灭菌菌产产品；部分或全部工序接受无菌生品；部分或全部工序接受无菌生产产工工艺艺的的为为非最非最终灭终灭菌菌产产品。品。新版GMP（欧盟GMP）：第十二章第十二章 最最终灭终灭菌菌热热力力灭灭菌菌热热力力灭灭菌通常有湿

6、菌通常有湿热灭热灭菌和干菌和干热灭热灭菌。菌。第七十三条第七十三条 在在验证验证和生和生产过产过程中，用于程中，用于监测监测或或记记录录的温度探的温度探头头与用于限制的温度探与用于限制的温度探头应头应分分别设别设置，置，设设置的位置置的位置应应通通过验证过验证确定，每次确定，每次灭灭菌均菌均应记录应记录灭灭菌菌过过程的程的时间时间/温度曲温度曲线线。如接受自控和如接受自控和监测监测系系统统，该该系系统应经过验证统应经过验证，以，以确保符合关确保符合关键键工工艺艺的要求。的要求。该该系系统应统应能能记录记录系系统统本身以及工本身以及工艺艺运行运行过过程中出程中出现现的故障，操作人的故障，操作人员

7、员应监应监控控这类这类故障的故障的发发生。生。应应定期将独立的温度定期将独立的温度显显示器的示器的读读数与数与灭灭菌菌过过程中程中记录获记录获得的得的图谱图谱比照比照新版GMP（欧盟GMP）：第七十四条第七十四条 可运用化学或生物指示可运用化学或生物指示剂监剂监控控灭灭菌工菌工艺艺，但，但他他们们不得替代物理不得替代物理测试测试。第七十五条第七十五条 灭灭菌菌时间应时间应从能保从能保证证全部被全部被灭灭菌品都达到菌品都达到设设定的定的灭灭菌温度后才起先菌温度后才起先计计算。每种装算。每种装载载方式所需升温方式所需升温时间时间均均须测须测定并定并记录记录。第七十六条第七十六条 应应有措施防止有措

8、施防止灭灭菌冷却菌冷却过过程中已程中已灭灭菌物品遭菌物品遭遇遇污污染，任何与染，任何与产产品相接触的冷却用介品相接触的冷却用介质质（液体或气体）（液体或气体）应经过灭应经过灭菌或除菌菌或除菌处处理，除非能理，除非能证证明生明生产过产过程中可剔除任程中可剔除任何渗漏的何渗漏的产产品。品。新版GMP（欧盟GMP）：湿湿热灭热灭菌菌 第七十七条第七十七条 湿湿热灭热灭菌工菌工艺监艺监控的参数控的参数应应包括包括灭灭菌温度、菌温度、时间时间和和压压力。力。对对腔室底部装有排水口的腔室底部装有排水口的灭灭菌柜而言，可能菌柜而言，可能须须要要测测定并定并记记录该录该点在点在灭灭菌全菌全过过程中的温度数据。

9、如程中的温度数据。如灭灭菌工菌工艺艺中包括抽中包括抽真空操作，真空操作，则应则应常常常常对对腔室作腔室作检检漏漏测试测试。第七十八条第七十八条 被被灭灭菌物品如不密封容器中的菌物品如不密封容器中的产产品，品，则应则应用用合适的材料将其适当包扎，所用材料及包扎方式合适的材料将其适当包扎，所用材料及包扎方式应应有利于有利于空气排放，蒸汽穿透并在空气排放，蒸汽穿透并在灭灭菌后能防止菌后能防止污污染。在染。在规规定的温定的温度和度和时间时间内，被内，被灭灭菌物品全部部位均菌物品全部部位均应应与与灭灭菌介菌介质质充分接充分接触。触。GMP的新增内容湿热灭菌湿热灭菌参数应包括灭菌时间、温度或压力参数应包括

10、灭菌时间、温度或压力 应常常对腔室作检漏测试应常常对腔室作检漏测试 被灭菌物品应用合适的材料适当包扎被灭菌物品应用合适的材料适当包扎 干脆接触产品的包装容器、灌装设备、胶塞及可能与干脆接触产品的包装容器、灌装设备、胶塞及可能与产品接触的工器具等的湿热灭菌应接受纯蒸汽产品接触的工器具等的湿热灭菌应接受纯蒸汽 国际法规和标准ISO 11135ISO 17665PDA No.1 技术文件技术文件Validation of Moist Heat Sterilization Processes:Cycle Design,Development Qualification and Ongoing Cont

11、rol Technical Report No.1(2007 Revision)British Standard BS EN 285:2008 Sterilization-Steam sterilizers-Large sterilizersEN 554FDA CGMP（2004）EU CGMP（2008）灭菌技术和验证指南日本灭菌技术和验证指南日本其它其它目的获得有效合理的灭菌参数获得有效合理的灭菌参数证明湿热灭菌设备对被灭菌品的适用性证明湿热灭菌设备对被灭菌品的适用性不同灭菌程序的牢靠性和重现性不同灭菌程序的牢靠性和重现性湿热灭菌法特点蒸汽蒸汽热热穿透性穿透性强强 灭灭菌效率高菌效率高温度

12、相温度相对较对较低低灭灭菌菌时间时间相相对对短短灭灭菌菌过过程不程不产产生任何化学物理生任何化学物理污污染染灭灭菌菌设备设备限制参数少，运行限制参数少，运行稳稳定，便利管理定，便利管理药药物物制制剂剂生生产过产过程中最常用的方法程中最常用的方法术语湿热灭菌介质：湿热灭菌介质：饱和蒸汽饱和蒸汽:是指饱和状态下的蒸汽，是由气体分子之间的热运动现是指饱和状态下的蒸汽，是由气体分子之间的热运动现象造成的象造成的过热水过热水:指水达沸点（指水达沸点（100）却没有沸腾的水）却没有沸腾的水,假如加入其他物质假如加入其他物质会突然暴沸会突然暴沸D值值(Decimal reduction time)：就是在确

13、定的处理环境中和在确：就是在确定的处理环境中和在确定的热力致死温度条件下某细菌数群中每杀死定的热力致死温度条件下某细菌数群中每杀死90%原有残存活菌原有残存活菌数时所须要的时间。数时所须要的时间。Z值是指灭菌时间削减到原来的值是指灭菌时间削减到原来的1/10所需上升的温度或在相同灭所需上升的温度或在相同灭菌时间内，杀灭菌时间内，杀灭99%的微生物所需提高的温度。的微生物所需提高的温度。F值（值（F0值）在确定温度下杀灭确定浓度微生物所需加热的时间值）在确定温度下杀灭确定浓度微生物所需加热的时间（min）。通常指在）。通常指在120加热致死状态。是加热杀菌的致死值，加热致死状态。是加热杀菌的致死

14、值，可用来衡量杀菌强度。可用来衡量杀菌强度。术语蒸汽的质量蒸汽的质量干燥值（干燥值（Dryness value）不冷凝气体（不冷凝气体（Noncondesable Gases）饱和蒸汽饱和蒸汽（Saturated Steam）过度杀灭程序过度杀灭程序（Overkill Approach）预真空程序预真空程序（Prevacuum Process）蒸汽空气混合气体蒸汽空气混合气体（Steam-Air Mixture）灭菌）灭菌 过热水程序过热水程序（Superheated Water Process）无菌保证水平无菌保证水平（Sterility Assurance Level,SAL）灭菌法选择的

15、基本原则灭菌法选择的基本原则过度杀灭法。过度杀灭法。假设：假设：N0106D1211分钟分钟Z10将数据代入公式，得将数据代入公式，得L=1，再按计算，达到微生物，再按计算，达到微生物残存概率为一百万分之一所需的物理及生物杀灭力残存概率为一百万分之一所需的物理及生物杀灭力如下：如下：物理杀灭力物理杀灭力FPHY为为12分钟，分钟，生物杀灭力生物杀灭力 FBIO D121（LogN0Log NF）12分钟分钟灭菌法选择的基本原则 残存概率法残存概率法假设产品的生物负荷测试中：假设产品的生物负荷测试中：N0102D1211分钟分钟Z10经灭菌后，微生物残存概率经灭菌后，微生物残存概率NF小于小于1

16、0-6利用上面的数值，可以计算出微生物残存概率小于利用上面的数值，可以计算出微生物残存概率小于10-6所需的所需的FPHY和和FBIO如下：如下：F0FPHYFBIOD121（LogN0Log NF）8分分钟钟灭菌法选择的基本原则装载类型的界定装载类型的界定考虑到装载的特性及特定装载的方式。例如，多孔考虑到装载的特性及特定装载的方式。例如，多孔/固体物品通常包括但不局限于以下物品：固体物品通常包括但不局限于以下物品：过滤器（薄膜式过滤器、筒式过滤器、预过滤器等）过滤器（薄膜式过滤器、筒式过滤器、预过滤器等）胶塞和其它聚合物密封件胶塞和其它聚合物密封件管道和软管管道和软管工作服、口罩工作服、口罩

17、清洁用具清洁用具设备更换部件，如药液灌装设备更换部件，如药液灌装液体装载通常包括但不局限于以下物品：液体装载通常包括但不局限于以下物品：已灌装入最终容器（如小瓶、软包装、玻瓶或安瓿）的产已灌装入最终容器（如小瓶、软包装、玻瓶或安瓿）的产品（溶液、混悬剂或乳剂）品（溶液、混悬剂或乳剂）已检验或加工后剩下的可能含有致病菌的废液。已检验或加工后剩下的可能含有致病菌的废液。微生物的种微生物的种类类和数量和数量:微生物的种微生物的种类类、发发育育阶阶段、微生物的数段、微生物的数量等。量等。蒸汽性蒸汽性质质：蒸汽有：蒸汽有饱饱和蒸汽、湿和蒸汽、湿饱饱和蒸汽和和蒸汽和过热过热蒸汽。蒸汽。热压热压灭灭菌菌应应

18、接受接受饱饱和蒸汽。和蒸汽。药药品性品性质质和和灭灭菌菌时间时间:一般而言，一般而言，灭灭菌温度愈高，菌温度愈高，时间时间愈愈长长，药药品被破坏的可能性愈大。因此，在品被破坏的可能性愈大。因此，在设计灭设计灭菌温度和菌温度和时间时间时时必需考必需考虑药虑药品的品的稳稳定性。定性。其他：介其他：介质质PH等等影响湿热灭菌的因素湿湿热灭热灭菌工菌工艺艺之一之一美国美国FDA规规定的残存概率法定的残存概率法灭灭菌菌过过程程8 F012分分钟钟适用于适用于热稳热稳定性不很好的定性不很好的产产品品通通过过限制工限制工艺过艺过程的微生物程的微生物污污染和染和灭灭菌菌工工艺艺参数使参数使产产品无菌品无菌无菌

19、保无菌保证值证值不小于不小于6湿湿热灭热灭菌工菌工艺艺之二之二过过度度杀灭杀灭法法F0不低于不低于12热稳热稳定性好的定性好的产产品品以以彻彻底底杀灭杀灭任何任何污污染的微生物染的微生物为实现为实现无菌的手段无菌的手段无菌保无菌保证值证值不小于不小于6其它湿其它湿热灭热灭菌工菌工艺艺F0值值低于低于8的的灭灭菌工菌工艺艺热稳热稳定性很差的定性很差的产产品品以无菌生以无菌生产产工工艺为艺为基基础础，灭灭菌是提高无菌保菌是提高无菌保证证水平水平的的协协助手段助手段不不计计算算F0值值，污污染概率不大于染概率不大于0.1%除血液制品外，除血液制品外，发发达国家达国家这类这类大容量注射大容量注射剂剂几

20、乎没几乎没有有小容量注射小容量注射剂剂也少也少见见几种常用的湿热灭菌法液体注射剂产品的灭菌液体注射剂产品的灭菌空气蒸汽混合物（空气蒸汽混合物（SAM）过热水喷淋法过热水喷淋法重力置换法（不举荐）重力置换法（不举荐）下排式蒸汽灭菌柜下排式蒸汽灭菌柜（重力置换法）（重力置换法）下排式蒸汽灭菌柜下排式蒸汽灭菌柜工作原理图工作原理图1、蒸汽进入、蒸汽进入2、高温度蒸汽比重、高温度蒸汽比重小，在上部小，在上部3、蒸汽不断进入蒸汽不断进入4、冷凝水及低温度冷凝水及低温度空气在底部被挤走空气在底部被挤走Gravity Displacement Autoclave在相同的温度和压力，空气是事实上比蒸汽密度的平

21、均值的在相同的温度和压力，空气是事实上比蒸汽密度的平均值的1.5倍。倍。过热水喷淋灭菌柜过热水喷淋灭菌柜-外形外形热交换器由不锈钢制造、卫生级、双功能（加热及冷却），有效，平安。湍流、速度、热交换器由不锈钢制造、卫生级、双功能（加热及冷却），有效，平安。湍流、速度、液体循环交换（蒸汽和冷却水）自动实现热交换器内部的清洁。液体循环交换（蒸汽和冷却水）自动实现热交换器内部的清洁。控控制制柜柜卫生离心泵：保持水的高速循环，这对实现温度的均一性至关重要。卫生离心泵：保持水的高速循环，这对实现温度的均一性至关重要。CA除菌除菌过滤器过滤器过热水喷淋过热水喷淋/温度温度-压力曲线压力曲线Temperatu

22、re/Pressure Chart 温度温度/压力表压力表Hot Water Shower Process 热水淋浴的过程热水淋浴的过程Temperature(C)Pressure(bar)Time(min)02040601208010000.51.01.52.02.5140120100 80 60 40 20 0排气排气Fo热水喷雾消毒器热水喷雾消毒器本图为旋转式喷淋灭菌柜本图为旋转式喷淋灭菌柜水喷淋水喷淋-高效热交换，程序短高效热交换，程序短可用于乳剂、氨基酸等可用于乳剂、氨基酸等配外部双管板热交换器配外部双管板热交换器过程：进过程：进PW蒸汽加热循环蒸汽加热循环水水 在过压爱护条件下在过

23、压爱护条件下 水水喷淋产品喷淋产品 达到灭菌温度达到灭菌温度-保保温温冷却冷却平衡压力平衡压力-出料出料转速：转速：1-5转转/分分产品温差可控产品温差可控 0.5被灭菌品被灭菌品纯化水纯化水门门密密封封条条喷淋管喷淋管固定架固定架传动传动装置装置用脂肪乳剂等转笼热水喷雾消毒器用脂肪乳剂等转笼热水喷雾消毒器过热水旋转喷淋灭菌程序过热水旋转喷淋灭菌程序Initialization 程程 序序 开开 始始Filling PW 进进PW到到设定液位设定液位Heating 逐步加热逐步加热加压缩空气加压缩空气Sterilizing 灭菌灭菌压缩空气压缩空气Draining 排放气排放气/水水Safet

24、y exhaust check 0.1 bar 安全压力检查安全压力检查Safety cooling Check -0.07MPa进蒸汽：进蒸汽：运行运行3次次121保温至保温至设定的时间设定的时间排气排气抽真空干燥抽真空干燥约约15分钟分钟至设定的至设定的灭菌温度灭菌温度进过滤气体进过滤气体平衡压力平衡压力程序结束程序结束脉动真空蒸汽灭菌程序脉动真空蒸汽灭菌程序温度温度脉动真空：抽真空脉动真空：抽真空-进蒸汽进蒸汽-抽真空抽真空-进蒸汽进蒸汽 预真空预真空升温升温保温保温干燥干燥降温降温排气排气结束结束123真空真空蒸汽脉动灭菌器蒸汽脉动灭菌器100121灭菌工艺的验证及其验证文件DQ在选用

25、蒸汽灭菌器时，首先应依据产品的工艺来考虑在选用蒸汽灭菌器时，首先应依据产品的工艺来考虑蒸汽灭菌器的选型，主要是装量的大小、灭菌温度与蒸汽灭菌器的选型，主要是装量的大小、灭菌温度与时间的可限制性、灭菌程序的可选择性、灭菌时腔室时间的可限制性、灭菌程序的可选择性、灭菌时腔室内温度的一样性、升温与降温速率的稳定性、限制及内温度的一样性、升温与降温速率的稳定性、限制及记录系统的牢靠性等。记录系统的牢靠性等。首先对所选灭菌器进行确认（首先对所选灭菌器进行确认（IQ/OQ）例如：例如：空气过滤器的泄漏测试空气过滤器的泄漏测试容积、真空度、压力以及泄漏率测试容积、真空度、压力以及泄漏率测试如有夹层，必需消退

26、运行风险如有夹层，必需消退运行风险蒸汽质量测试蒸汽质量测试传感器的测试传感器的测试验证设备的校准验证设备的校准其他其他灭菌工艺的验证及其验证文件PQ空载热分布试验空载热分布试验满载热分布试验满载热分布试验热穿透和生物挑战试验热穿透和生物挑战试验升温、降温速度对生产工艺、产品的影响；升温、降温速度对生产工艺、产品的影响；喷淋冷却速度对被灭菌产品的影响；冷却用水喷淋冷却速度对被灭菌产品的影响；冷却用水是否能有效地限制微生物是否能有效地限制微生物温度测量系统（包含灭菌器的温度传感器和验温度测量系统（包含灭菌器的温度传感器和验证用多点温度测试仪）是否供应每一个测点的证用多点温度测试仪）是否供应每一个测

27、点的打印数据；温度测量系统是否都进行校准；温打印数据；温度测量系统是否都进行校准；温度测量系统的校准是否符合相关法规和标准的度测量系统的校准是否符合相关法规和标准的规定规定灭菌工艺的验证及其验证文件PQ生物指示剂的运用生物指示剂的运用对过度杀灭的风险分析及管理；对过度杀灭的风险分析及管理；灭菌后的干燥程序对灭菌效果的影响灭菌后的干燥程序对灭菌效果的影响探讨产品耐受性变更导致的灭菌工艺变探讨产品耐受性变更导致的灭菌工艺变更更总体评价并指导最佳灭菌效果的装载量总体评价并指导最佳灭菌效果的装载量验证及其相关项目的培训等验证及其相关项目的培训等灭菌工艺的验证及其验证文件灭菌工艺的验证灭菌工艺的验证温度

28、的变更以及变更量温度的变更以及变更量装载装载空气移除速度空气移除速度生物指示剂的选择及位置确认生物指示剂的选择及位置确认程序限制的确定（包括冷点）程序限制的确定（包括冷点）其他其他灭菌工艺的验证及其验证文件验证文件验证文件除常规程序、步骤及文件外，还应留意：除常规程序、步骤及文件外，还应留意：有必要绘制灭菌器的相关管线及限制点示意图有必要绘制灭菌器的相关管线及限制点示意图灭菌器制造商及信息灭菌器制造商及信息灭菌器的灭菌器的OQ文件文件首次灭菌的完整信息及文件首次灭菌的完整信息及文件产品的平安耐受性报告产品的平安耐受性报告蒸汽、水、压缩空气系统的质量测试报告蒸汽、水、压缩空气系统的质量测试报告完整的操作记录完整的操作记录任何变更、任何故障的处理报告任何变更、任何故障的处理报告培训记录以及效果评价报告培训记录以及效果评价报告再验证周期的确定再验证周期的确定其他其他感谢大家！感谢大家！不妥之处，务请不吝不妥之处，务请不吝指正！指正！