血清丙氨酸氨基转移酶谷.ppt

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1、实验十五实验十五 血清丙氨酸氨基转血清丙氨酸氨基转移酶移酶(谷丙转氨酶谷丙转氨酶)活性测定活性测定 改良Reiman-frankel法（改良赖氏法）目的目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的原理并熟悉操作方法测定的原理并熟悉操作方法了解测定血清丙氨酸氨基转移酶了解测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的临床意义活性的临床意义 相关理论相关理论氨基酸代谢氨基酸代谢体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡衡食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，分织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，

2、分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库 氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用肝脏的脱氨基方式有肝脏的脱氨基方式有:氧化脱氨基氧化脱氨基,氨基转氨基转换作用及联合脱氨基换作用及联合脱氨基 催化转氨基反应的酶称为转氨酶催化转氨基反应的酶称为转氨酶(transaminase)(transaminase)肝脏中含此种酶较为丰富肝脏中含此种酶较为丰富谷氨酸谷氨酸-丙酮酸转氨酶丙酮酸转氨酶(简称谷简称谷-丙转氨酶丙转氨酶 GPTGPT，ALT)ALT)谷氨酸谷氨酸-草酰乙酸转氨酶草酰乙酸转氨酶(简称谷简称谷-草转氨酶草转氨酶 GOTG

3、OT，AST)AST)原原 理理 血清中谷丙转氨酶作用于丙氨酸及-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2，4二硝基苯肼反应，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙丙酮酸2，4二硝基苯腙在酸性溶液中呈黄色，加碱后呈棕红色，与标准液进行比色，以计算酶活性单位。在一定的条件下，在一定的条件下，GPTGPT越多，则反应速越多，则反应速度越快，在一定的时间内产生的丙酮度越快，在一定的时间内产生的丙酮酸也就越多酸也就越多以丙酮酸的产量来代表以丙酮酸的产量来代表GPTGPT活性的大小活性的大小丙酮酸的生成量与溶液颜色的深浅，丙酮酸的生成量与溶液颜色的深浅，即与即与GPTGPT活性的高低成正比关系活性的高低成正比关系

4、通过与标准液进行比色，以计算酶活通过与标准液进行比色，以计算酶活性单位性单位 操作操作 制作标准曲线制作标准曲线血清血清GPT活性测定活性测定 混匀，10分钟后将试管从恒温水浴中取出，冷却至室温。用520nm（或者505nm)波长进行比色，以空白管校正光密度到零点，读取各管光密度，将各测定管OD值(A值）与其对应的酶活性单位数作图，连接各点成平滑曲线，即成标准曲线。其中以A为Y轴，丙酮酸含量（或者相应酶单位）为X轴测 定 混匀，10分钟后将试管从水浴中取出，冷却至室温。用520nm波长进行比色，以空白管校正到零点，读取试剂及测定管光密度。用测定管光密度查标准曲线，取得血清标本的丙酮酸含量或者酶

5、单位数。正常值或者0-25单位 校正校正以空白管校正光密度到零点，读取各管光以空白管校正光密度到零点，读取各管光密度，将各测定管密度，将各测定管ODOD值与其对应的酶活性值与其对应的酶活性单位数作图，连接各点成平滑曲线，即成单位数作图，连接各点成平滑曲线，即成标准曲线。标准曲线。以空白管校正光密度到零点，读取各管光以空白管校正光密度到零点，读取各管光密度。查标准曲线，取得血清标本的酶单密度。查标准曲线，取得血清标本的酶单位数。位数。临床意义临床意义 人血清人血清GPTGPT的正常值为的正常值为0-250-25卡门氏单位卡门氏单位 GPT GPT在肝细胞内活性最高，比血清高在肝细胞内活性最高，比

6、血清高100100倍，倍，当有当有1 1的肝细胞坏死时，可使血清内酶活的肝细胞坏死时，可使血清内酶活性升高性升高1 1倍。倍。GPTGPT是肝细胞受损最敏感的指标之一是肝细胞受损最敏感的指标之一肝炎肝炎病毒性肝炎的潜伏期、急性发病期，病毒性肝炎的潜伏期、急性发病期，以及隐性感染者均可有血清谷丙转以及隐性感染者均可有血清谷丙转氨酶升高，且往往是谷丙转氨酶单氨酶升高，且往往是谷丙转氨酶单项升高项升高 其他疾病其他疾病药物性肝炎、脂肪肝、各种内外毒素所致药物性肝炎、脂肪肝、各种内外毒素所致肝损、肝内胆汁淤积肝损、肝内胆汁淤积 胆道梗阻、胰腺疾病、甲状腺功能亢进症、胆道梗阻、胰腺疾病、甲状腺功能亢进症、急性心肌梗塞、心力衰竭、多发性肌炎、急性心肌梗塞、心力衰竭、多发性肌炎、休克等休克等往往伴有各种疾病的临床症状和实验室检往往伴有各种疾病的临床症状和实验室检查异常，很少是血清谷丙转氨酶单项升高查异常，很少是血清谷丙转氨酶单项升高 空白管标准管样品管基质液（ul）250250250标准液（ul）50血清（ul）50蒸馏水（ul）50混合均匀后，37水浴，30分钟，然后各加显色剂250ul。继续水浴20分钟，取出，各管加稀释的2.5ml。室温放置3分钟后，510nm比色。