《大肠菌群检验》PPT课件.ppt

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1、大肠菌群检测检检验验程程序序检检 样样25g(mL)样品样品+225mL稀释液，均质稀释液，均质10倍系列稀释倍系列稀释选择适宜选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至个连续稀释度的样品匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨（月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管）肉汤管不产气不产气产气产气煌绿乳糖胆盐煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤肉汤不产气不产气产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阳性查查MPN表表报告结果报告结果36148h2h36148h2h检检样样初初发发酵酵复复发发酵酵报报告告检检 样样固体样品：在电子天平上称取固体样品：在电子天平上称取25g +225mL0.85%灭菌生理灭

2、菌生理 盐水盐水液体样品：直接取用液体样品：直接取用固体样品存放罐固体样品存放罐固体样品称量l l用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；l l打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按按按按“去皮去皮去皮去皮”键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为“0”“0”时，可开始称量。时，可开

3、始称量。时，可开始称量。时，可开始称量。去去皮皮键键初初 发发 酵酵取（带上试管架）：取（带上试管架）：l l单料管单料管9支支l l装有装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灭菌生理盐水的生理盐水灌灌1个个l l装有装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管3支支操操 作作 步步 骤骤1.1.用酒精棉消毒操作台用酒精棉消毒操作台用酒精棉消毒操作台用酒精棉消毒操作台操操 作作 步步 骤骤2.2.用酒精棉消毒双手用酒精棉消毒双手用酒精棉消毒双手用酒精棉消毒双手 操操 作作 步步 骤骤3.3.点燃酒精灯点燃酒精灯点燃酒精灯点燃酒精灯操操 作作 步步 骤骤4.4.为装有培养基的试管编号

4、为装有培养基的试管编号为装有培养基的试管编号为装有培养基的试管编号为试管编号为试管编号编号原则：编号原则：编号原则：编号原则：l l固体样品：固体样品：固体样品：固体样品：1 1、（表示加入的固体样品为、（表示加入的固体样品为、（表示加入的固体样品为、（表示加入的固体样品为1g1g、）、）、）、）l l液体样品：液体样品：液体样品：液体样品：1010、1 1、（表示加入的液体样品为、（表示加入的液体样品为、（表示加入的液体样品为、（表示加入的液体样品为10mL10mL、1mL1mL、）、）、）、）双双 料料单单 料料1111010101110.10.1 0.1l l用量筒量取用量筒量取用量筒量

5、取用量筒量取225mL0.85%225mL0.85%灭灭灭灭菌生理盐水至稀释瓶中。菌生理盐水至稀释瓶中。菌生理盐水至稀释瓶中。菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞锥形（注意：稀释瓶、带塞锥形（注意：稀释瓶、带塞锥形（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装瓶开盖前要过火，量筒、装瓶开盖前要过火，量筒、装瓶开盖前要过火，量筒、装有有有有0.85%0.85%灭菌生理盐水的锥灭菌生理盐水的锥灭菌生理盐水的锥灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯形瓶及其塞子应放在酒精灯形瓶及其塞子应放在酒精灯形瓶及其塞子应放在酒精灯周围周围周围周围15cm15cm的范围内）的范围内）的范围内）的范围内）

6、固体样品称量后处理固体样品称量后处理液液 体体样样 品品液体样品：直接吸取液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中样液至单料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意：注意：加样加样液后不能液后不能振摇试管。振摇试管。液体样品：液体样品：液体样品：液体样品：吸取吸取吸取吸取25mL25mL液体样品至稀释瓶中，加入液体样品至稀释瓶中，加入液体样品至稀释瓶中，加入液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%225mL0.85%灭菌灭菌灭菌灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀；生理盐水，盖上盖子，混匀；生理盐水，盖上盖子，混匀；生理盐水，盖上盖子，混匀；从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分

7、别吸取从稀释瓶中分别吸取1mL1mL被稀释被稀释被稀释被稀释1010倍的饮用水至最后三倍的饮用水至最后三倍的饮用水至最后三倍的饮用水至最后三支单料管中。支单料管中。支单料管中。支单料管中。液液 体体样样 品品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意：注意：加样液后不能振摇试管。加样液后不能振摇试管。固体样品：固体样品：固体样品：固体样品：从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取1mL1mL样液至装有样液至装有样液至装有样液至装有9mL0.85%9mL0.85%灭菌生理灭菌生理灭菌生理灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；盐水的试管中，盖上盖子，混匀；盐水的试管中，盖上盖

8、子，混匀；盐水的试管中，盖上盖子，混匀；从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取1mL1mL样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意：注意：将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。管，混匀。样液加入培养基后不能振摇试管。样液加入培养基后不能振摇试管。观察初发酵结果l l取回初发酵结果，观察。确定有几支初发取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。酵管内的小倒管中有气泡产生。l l根据对初发酵结

9、果的观察，有根据对初发酵结果的观察，有几支几支小倒管小倒管中有气泡，则取中有气泡，则取几支几支煌绿乳糖胆盐复发酵煌绿乳糖胆盐复发酵管。管。内有小倒管内有小倒管复复 发发 酵酵在有气泡的初发酵管后的在有气泡的初发酵管后的相应位置相应位置放上复发酵管放上复发酵管 用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）对应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）l l将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。培养箱。l l注意选择设置为注意选择设置为361的培养箱。的培养箱。361 48h 2

10、h l l观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性（+），无气泡为阴性（），无气泡为阴性（-）。）。+-+-+-注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产气。不产气。查查MPN表表 1 1 1 11检验结果记录检验结果记录检验结果记录检验结果记录检样量检样量检样量检样量初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数阳性管数阳性管数阳性管数10mL10mL1g1g（或（或（或（或mLmL）+-+-1 10.1g0.1g（或（或

11、（或（或mLmL）+-+-1 10.01g 0.01g（或（或（或（或mLmL）-+-+-1 10.001g 0.001g（或（或（或（或mLmL）培养条件培养条件培养条件培养条件温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：检验结果检验结果检验结果检验结果 MPN/g=1.1 MPN/g=1.1备注备注备注备注标准值：标准值：标准值：标准值：单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）检验人：检验人：检验日期：检验日期：固体样品固体样品检验结果记录检验结果记录检验结果记录检验

12、结果记录检样量检样量检样量检样量初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数阳性管数阳性管数阳性管数10mL10mL+-+-1 11g1g（或（或（或（或mLmL）+-+-1 10.1g0.1g（或（或（或（或mLmL）-+-+-1 10.01g 0.01g（或（或（或（或mLmL）0.001g 0.001g（或（或（或（或mLmL）培养条件培养条件培养条件培养条件温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：检验结果检验结果检验结果检验结果 MPN/m

13、L=0.11 MPN/mL=0.11备注备注备注备注标准值：标准值：标准值：标准值：单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）检验人：检验人：检验日期：检验日期：液体样品液体样品小 结本次检验操作共取：本次检验操作共取：双料管双料管3 3支，单料管支，单料管6 6支，装有灭菌生理盐水的锥支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶形瓶1 1个，装有个，装有9mL9mL灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管1 1支（固体样支（固体样品），复发酵管若干支（根据初发酵结果）品），复发酵管若干支（根据初发酵结果）本次检验操作共用：本次检验操作共用：固体样品：固体样品：10mL10mL吸量管吸量管1 1支，支，1mL1mL吸量管吸量管2 2支，支，接种环接种环 液体样品：液体样品：25mL25mL移液管移液管1 1支，支，10mL10mL吸量管吸量管1 1支，支，1mL1mL吸量管吸量管2 2支，接种环支，接种环