洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程.doc

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1、贵州西创制药有限公司操作标准文件标题洁净区(室)沉降菌监测标准操作规程文件编号S0P-ZL-082-00正文页数共 4 页起草/日期部门审核/日期QA审核/日期批准/日期执行日期分发号发放部门质保部、QC警告：相关责任部门和责任人务必于文件执行之日前完成培训变 更 记 载文件编号变 更 内 容执行日期S0P-ZL-082-00企业名称变更；启用新的文件格式和文件编号目 的：建立洁净区(室)中沉降菌的监测规程，使药品生产能在规定洁净级别中进行，确保产品质量。范 围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。责任人：QC人员、QC主管。内 容：1定义：11 洁净室：对尘粒及微生物污染需进行控制的房间

2、或区域。12 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台等。13 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子和微生物的允许统计数。14 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。15 沉降菌：用GB/T 16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。16 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。2测试方法

3、：21 方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。22 人员的职责及培训：使用的仪器和设备：221 高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。222 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。223 培养皿：2231 一般采用90mm15mm硼硅酸玻璃培养皿。2232 使用前将培养皿置于121湿热灭菌20min。23 培养基：普通营养琼脂培养基。231 将培养基加热熔化，冷却至约45在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，

4、每皿约15ml。232 待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入3035恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在28的环境中存放。24 测试步骤：241 采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。242 培养：2421 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。2422 在3035培养，时间不少于3天。2423 每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。243 菌落计数：2431 用肉眼直接计数，然后用510倍放大镜检查，是否有遗漏。2

5、432 若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。25 注意事项：251 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。252 采取一切措施防止人为对样本的污染。253 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。254 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。255 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。3. 测试规则：31 测试状态：311 沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。312 沉降菌测试前，被测试

6、洁净区已经过消毒。313 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。32 测试人员：321 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。322 静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。33 测试时间：331 对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。332 对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。34 沉降菌计数：341 采样点数目及其布置：3411 最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2。34

7、12 采样点的布置：34121 工作区测试点位置离地0.81.5m左右（略高于工作面）。34122 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。35 记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。表1 最少采样点数目面积（）洁净度级别A 、B级C级D级102-32210-2042220-4082240-1001642100-20040103注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。洁净度级别所需90mm培养皿数（以沉降0.5h计）A级14B、C级2D级2表

8、2 最少培养皿数36 结果计算：361 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。362 平均菌落数的计算见下式： m1 + m2 + mn平均菌数= n 式中：为平均菌落数；m1为1号培养皿菌落数；m2为2号培养皿菌落数；mn为n号培养皿菌落数；n为培养皿总数。37 结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。371 洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。见表3。372 若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。 表3级别状态A级B级C级D级标准（静态）1个/皿1个/皿3个/皿10个/皿标准（动态）1个/皿5个/皿50个/皿100个/皿