《离子交换色谱》PPT课件.ppt

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1、离子交换色谱离子交换色谱运用与分析运用与分析 主讲主讲主讲主讲：许先融：许先融 编辑编辑编辑编辑：谢晓敏谢晓敏 资料搜集资料搜集资料搜集资料搜集：刘佳娜：刘佳娜 李春凤李春凤 甘权贤甘权贤 资料整理资料整理资料整理资料整理：李扬帆：李扬帆 刘雁刘雁0808中药分析与鉴定（中药分析与鉴定（1 1）班）班基本原理：基本原理：离子交换色谱离子交换色谱（ion exchange chromatographyion exchange chromatographyion exchange chromatographyion exchange chromatography，IECIECIECIEC）以离子交

2、换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。主要用于分离离子或可离解的化合物，包括氨基酸氨基酸，多肽多肽，核酸核酸，核苷核苷等各种生物大分子生物大分子。离子交换色谱的运用：离子交换色谱的运用：分离纯化生物大分子分离纯化生物大分子Po+ZDo=Pb+ZDbPo:Po:流动相中溶质的浓度；流动相中溶质的浓度；流动相中溶质的浓度；流动相中溶质的浓度；Pb:Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度填料表面上被吸附的溶质浓度填料表面上被吸附的溶质浓度填料表面上被吸附的

3、溶质浓度;Do:Do:流动相中洗脱剂的浓度；流动相中洗脱剂的浓度；流动相中洗脱剂的浓度；流动相中洗脱剂的浓度；Db:Db:填料表面上洗脱剂的浓度；填料表面上洗脱剂的浓度；填料表面上洗脱剂的浓度；填料表面上洗脱剂的浓度；Z:Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上蛋白质在吸附过程中从填料表面上蛋白质在吸附过程中从填料表面上蛋白质在吸附过程中从填料表面上 被置换的洗脱剂的数目；被置换的洗脱剂的数目；被置换的洗脱剂的数目；被置换的洗脱剂的数目；研究探讨离子交换色谱研究探讨离子交换色谱本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分离了a-淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%,比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高3

4、0倍。此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a-淀粉酶提供了一个新工艺路线。高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂,研究生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反应的平衡常数。1.0 1.0 摘要：摘要：实验部分实验部分 标准酶液配制标准酶液配制 用微量天平准确称取5mg高纯度的 a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加水,溶解后,在1300r/min的高速离心机上离心5min,小心转移上部清液于另一离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.结果与讨论结果与讨论 洗脱剂洗脱剂 为获得高的洗脱效率,本实验选用0.02mol/L Tris-2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱剂.（Tris-指

5、三羟甲基氨基甲烷）由图2可知,在 以下,随盐浓度的增随盐浓度的增随盐浓度的增随盐浓度的增加加加加 ,洗脱能力增大洗脱能力增大洗脱能力增大洗脱能力增大,活性回收率提高活性回收率提高活性回收率提高活性回收率提高。洗脱液中离子强度对洗脱效率的影 响可归结为离子交换平衡的移动,这种色谱行为表明该固定相具有典型的阴离子交换特性,符合离子交换色谱的洗脱规律。但在以上,随盐随盐随盐随盐浓浓浓浓 度增度增度增度增 加洗脱加洗脱加洗脱加洗脱 能力下降能力下降能力下降能力下降。这种反常现象,可能是由于离子交换柱的多离子交换柱的多离子交换柱的多离子交换柱的多功能特性功能特性功能特性功能特性引起。实验证明,离子交换柱

6、不仅有离子交换的作用,而且还表现一定的疏水作用的。并且这种疏水作用,随溶液离子强度发生变化。当洗脱剂 浓度大于 时,由于溶液的表面张力过大,离子交换剂的疏水作用变得明显,对蛋白质疏水缔合作用增强,故被吸附 的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。所以选择抓Nacl浓度为3.3 PH3.3 PH对活性回收率的影响对活性回收率的影响总结总结 凡在溶液中能够电凡在溶液中能够电离的物质通常都可以用离子离的物质通常都可以用离子交换色谱法进行分离。它不仅适交换色谱法进行分离。它不仅适用于无机离子混合物的分离，亦可用用于无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范围较广。不过它容易受于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范围较广。不过它容易受柱长，流速，柱长，流速，PH，离子强度等的影响。，离子强度等的影响。0808中鉴中鉴1 1班班离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱 谢谢谢谢