《真菌培育技术》PPT课件.ppt

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1、一、概述一、概述u自然界中的真菌种类繁多，按自然界中的真菌种类繁多，按经典分类经典分类属属植物界植物界；u通常所说的药用真菌，多限于生长发育到一定阶段通常所说的药用真菌，多限于生长发育到一定阶段能够能够形成个体较大的子实体或菌核形成个体较大的子实体或菌核的高等真菌；的高等真菌；u已知的药用真菌分布于已知的药用真菌分布于4040多个科中，它们在生长发多个科中，它们在生长发育代谢活动中，能够产生育代谢活动中，能够产生氨基酸氨基酸、多糖、生物碱、多糖、生物碱、甾醇、萜类、苷类以及维生素甾醇、萜类、苷类以及维生素等对人体疾病有抑制等对人体疾病有抑制或治疗作用的物质。或治疗作用的物质。第一节药用真菌培育

2、研究概况第一节药用真菌培育研究概况药用真菌，如：僵蚕、麦角、马勃、冬虫药用真菌，如：僵蚕、麦角、马勃、冬虫夏草（夏草（寄生在幼虫蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体寄生在幼虫蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体的复合体）、猪苓、雷丸等；、猪苓、雷丸等；食药兼用菌，如：黑木耳、银耳、香菇、食药兼用菌，如：黑木耳、银耳、香菇、松江蘑（松茸）、亮菌（假蜜环菌的菌丝松江蘑（松茸）、亮菌（假蜜环菌的菌丝体）等体）等.冬虫夏草猪苓猪苓松茸松茸直接利用子实体、菌丝体或菌核入药直接利用子实体、菌丝体或菌核入药 茯苓（菌核，茯苓（菌核，多寄生于马尾松或赤松的根部多寄生于马尾松或赤松的根部）麦角麦角（为麦角科真菌麦角

3、菌寄生在禾本科植物黑麦等子（为麦角科真菌麦角菌寄生在禾本科植物黑麦等子房中所形成的菌核）房中所形成的菌核）；利用所产生的菌素物质入药，如猴头菌素、利用所产生的菌素物质入药，如猴头菌素、亮菌素等亮菌素等。主要入药部位：菌索、菌核和子实体主要入药部位：菌索、菌核和子实体菌索：菌丝平行结合成绳索状；菌索：菌丝平行结合成绳索状；菌核：菌丝组成坚硬的休眠体菌核：菌丝组成坚硬的休眠体子实体：高等真菌在生殖时期形成的有子实体：高等真菌在生殖时期形成的有一定形状和结构一定形状和结构,能产生孢子的菌丝能产生孢子的菌丝体。体。茯苓茯苓随着从平菇、草菇、金针菇中发现抗癌成随着从平菇、草菇、金针菇中发现抗癌成分，从真

4、菌中寻找分，从真菌中寻找抗癌药抗癌药为业界所瞩目。为业界所瞩目。从银耳、茯苓、猪苓、云芝和香菇等担子从银耳、茯苓、猪苓、云芝和香菇等担子菌中所提取的菌中所提取的真菌多糖真菌多糖，具有对肿瘤有较，具有对肿瘤有较强的抑制作用且毒性极小，不同于其他毒强的抑制作用且毒性极小，不同于其他毒性类药物直接杀伤细胞，从而为抗癌药物性类药物直接杀伤细胞，从而为抗癌药物的研究与应用开辟了新途径，引起国内外的研究与应用开辟了新途径，引起国内外高度重视。高度重视。二、药用真菌培育发展概况二、药用真菌培育发展概况东汉东汉 紫芝的栽培方法紫芝的栽培方法唐代唐代 木耳的栽培方法木耳的栽培方法宋代和元代宋代和元代 香菇的栽培

5、方法香菇的栽培方法我我国国银银耳耳栽栽培培始始于于近近代代的的光光绪绪20年年（1894 年年），100多多年年来来除除我我国国能能大大规规模模生生产产外外，世世界界上上只只有少数国家和地区能小批量栽培。有少数国家和地区能小批量栽培。新新中中国国成成立立后后，对对灵灵芝芝、蜜蜜环环菌菌、亮亮菌菌、猴猴头头、猪猪苓苓、茯茯苓苓等等进进行行了了发发酵酵、药药化化、药药理理及及临临床床等等方方面面的的综综合合研研究究，新新工工艺艺的的形形成成使使麦麦角角新新碱碱、密密环菌片、亮菌片环菌片、亮菌片等的生产周期大大缩短。等的生产周期大大缩短。现现在在药药用用真真菌菌的的来来源源已已有有野野生生采采集集、

6、人人工工栽栽培培和和工业化生产工业化生产3个途径。个途径。随随着着现现代代生生物物技技术术的的广广泛泛应应用用，药药用用真真菌菌的的开开发发与利用将显现出广阔的前景。与利用将显现出广阔的前景。第二节药用真菌的生活习性第二节药用真菌的生活习性一、一、药用真菌的生活方式药用真菌的生活方式 异养异养共生共生 从活的有机体吸取养分，同时又提从活的有机体吸取养分，同时又提供该活体有利的生活条件。供该活体有利的生活条件。猪苓与密环菌猪苓与密环菌 菌根真菌菌根真菌 伴生伴生 松散联合，可以是一方得利，也可松散联合，可以是一方得利，也可双方互利。双方互利。银耳与香灰菌银耳与香灰菌 银耳分解纤维素和半纤维素的能

7、力弱，也不银耳分解纤维素和半纤维素的能力弱，也不能充分利用淀粉，只有与香灰菌丝混合接能充分利用淀粉，只有与香灰菌丝混合接种在一起时，才能较好地利用香灰菌丝分种在一起时，才能较好地利用香灰菌丝分解木屑的产物繁殖结耳。解木屑的产物繁殖结耳。腐生腐生 从死亡的动植物体或其他无生命从死亡的动植物体或其他无生命的有机物中吸取养分的有机物中吸取养分1专性腐生菌专性腐生菌木腐生菌：香菇、银耳木腐生菌：香菇、银耳草腐生菌：草菇、双孢蘑菇草腐生菌：草菇、双孢蘑菇 2兼性腐生菌兼性腐生菌 以寄生为主但也具有一定以寄生为主但也具有一定腐生能力的真菌，如安络小皮伞类。腐生能力的真菌，如安络小皮伞类。寄生寄生 从从活的

8、动植物体上吸收养分活的动植物体上吸收养分 1专性寄生菌专性寄生菌 冬虫夏草、麦角菌冬虫夏草、麦角菌 2兼性寄生菌兼性寄生菌 兼有腐生菌和共生菌的特征兼有腐生菌和共生菌的特征 密环菌类密环菌类 在枯木上腐生，也和兰科植物天麻共生在枯木上腐生，也和兰科植物天麻共生 黑木耳黑木耳 二、药用真菌生长发育的环境条件二、药用真菌生长发育的环境条件（一）药用真菌的生长（一）药用真菌的生长 1菌丝体的生长菌丝体的生长 菌丝体以顶端为生长点，菌丝体以顶端为生长点，不断向四周呈辐射状伸展，形成菌落。不断向四周呈辐射状伸展，形成菌落。2子实体的分化发育子实体的分化发育 菌丝聚集、子实体分化、菌丝聚集、子实体分化、发

9、育及成熟发育及成熟 人工虫草菌丝体人工虫草菌丝体灵芝孢子粉灵芝孢子粉（二）药用真菌生长发育的环境条件（二）药用真菌生长发育的环境条件1温度温度 一一般般菌菌丝丝体体较较耐耐低低温温，在在0左左右右只只停停止止生生长长，并不死亡，最适生长温度为并不死亡，最适生长温度为1828；子子实实体体发发育育温温度度较较一一般般植植物物为为高高，且且因因菌菌种种类类而而异异 低温型低温型：适温在：适温在20以下以下,如香菇。如香菇。中温型中温型：适温在：适温在2024之间之间,如银耳。如银耳。高温型高温型：适温超过：适温超过24,如灵芝。如灵芝。2水分和空气相对湿度水分和空气相对湿度 菌菌丝丝体体和和新新鲜

10、鲜子子实实体体中中约约有有90%的的水水分分，它它们们绝绝大大部部分分来来自自培培养养基基，所所以以培培养养基基最最适含水量一般在适含水量一般在60左右左右；大大多多数数菌菌丝丝体体生生长长要要求求空空气气相相对对湿湿度度为为65%75%；子实体发育阶段为子实体发育阶段为80%95。3空气空气 大多是大多是好气性菌好气性菌类类 CO2浓度浓度 子子实实体体形形成成前前期期 （0.034%）是是必必要要的的，后后期以上期以上 对子实体有毒害对子实体有毒害 大于时，大于时，双孢菇往往出现菌柄长、开伞早；双孢菇往往出现菌柄长、开伞早；超过时，超过时，菌盖出现畸形；菌盖出现畸形；灵灵芝芝在在CO2浓浓

11、度度为为时时，一一般般不不形形成成菌菌盖盖，菌菌柄柄分枝呈鹿角状。分枝呈鹿角状。4光照光照 菌菌丝丝生生长长时时一一般般不不需需要要光光，但但子子实实体体分分化化发发育育时时大大部部分分需需要要一一定定的的散散射射光光，而而直直射射光不利于生长。光不利于生长。喜光型真菌喜光型真菌 香菇、草菇、灵芝、金针菇香菇、草菇、灵芝、金针菇厌光型真菌厌光型真菌 双孢蘑菇、茯苓等双孢蘑菇、茯苓等中间型药用菌中间型药用菌 黄伞黄伞 5酸碱度酸碱度 大大多多数数药药用用菌菌喜喜pH值值3的的偏偏酸酸性性环环境境，最最适为适为；大于时生长受阻，大于时生长停止。大于时生长受阻，大于时生长停止。草菇喜中性偏碱草菇喜中

12、性偏碱的环境。的环境。在在配配制制培培养养基基时时应应将将pH值值适适当当调调高高，或或添添加磷酸二氢钾作为缓冲剂。加磷酸二氢钾作为缓冲剂。一、一、药用真菌的营养与培养基的制备药用真菌的营养与培养基的制备（一）药用真菌的营养（一）药用真菌的营养1碳源碳源纤维素、木质素、单糖、有机酸等纤维素、木质素、单糖、有机酸等2氮源氮源马铃薯汁、麦麸、马粪等马铃薯汁、麦麸、马粪等 在子实体形成期培养料中氮素的含量须低于菌在子实体形成期培养料中氮素的含量须低于菌丝生长期，一般菌丝生长期碳氮比为丝生长期，一般菌丝生长期碳氮比为1520 1，出，出菇期为菇期为3040 1。不同的菌类对碳氮比的要求会有。不同的菌类

13、对碳氮比的要求会有一定差异。一定差异。3水分水分在真菌有机体中含量最大。在真菌有机体中含量最大。4无机盐类无机盐类钾、钠、钙等。钾、钠、钙等。磷磷、硫硫、钾钾等等元元素素在在培培养养基基中中的的适适宜宜浓浓度度为为100500g/L，而而铁铁、钴钴、锰锰等等需需要要量量甚甚微微（千千分分之之几毫克）。几毫克）。5生生长长因因素素是是真真菌菌生生命命活活动动中中不不可可缺缺少少而而需需要要量又极少的有机营养物质，如维生素等。量又极少的有机营养物质，如维生素等。维生素在维生素在120以上时易被破坏以上时易被破坏（二）培养基制备（二）培养基制备u天然培养基天然培养基:利用含有丰富营养的天然有机物质利

14、用含有丰富营养的天然有机物质制成的培养基制成的培养基u合成培养基合成培养基:利用已知成分的化学药品配制成的利用已知成分的化学药品配制成的培养基培养基u半合成培养基半合成培养基:采用部分天然物质为碳源及生长采用部分天然物质为碳源及生长因素的来源，再添加些无机盐类。因素的来源，再添加些无机盐类。固体培养基和液体培养基固体培养基和液体培养基 二、消毒与灭菌二、消毒与灭菌u干热灭菌干热灭菌u湿热灭菌湿热灭菌u过滤除菌法过滤除菌法 u紫外线灭菌法紫外线灭菌法 u药物灭菌法药物灭菌法 0.1%升汞液可作非金属器皿和材料的表面灭菌升汞液可作非金属器皿和材料的表面灭菌 2%5%漂白粉液可用于恒温室、接种室墙壁

15、消毒。漂白粉液可用于恒温室、接种室墙壁消毒。70%75%乙醇可作非金属器皿和材料的表面灭菌。乙醇可作非金属器皿和材料的表面灭菌。3的甲醛的甲醛-高锰酸钾熏蒸接种箱、无菌室高锰酸钾熏蒸接种箱、无菌室 三、菌种的分离培养与保存复壮三、菌种的分离培养与保存复壮（一）菌种分离培养（一）菌种分离培养组织分离法组织分离法 是指通过药用真菌菌体组织或其生长基质分是指通过药用真菌菌体组织或其生长基质分离提纯菌丝的方法。离提纯菌丝的方法。孢子分离法孢子分离法 是利用真菌的孢子，在适宜的培养基上萌发是利用真菌的孢子，在适宜的培养基上萌发长成菌丝体以获得纯菌种的一种方法。它可分为多孢子分长成菌丝体以获得纯菌种的一种

16、方法。它可分为多孢子分离法和单孢子分离法。离法和单孢子分离法。寄主分离法寄主分离法 对于茯苓、木耳、银耳、香菇等木质腐生菌，对于茯苓、木耳、银耳、香菇等木质腐生菌，可以从其寄主板木上分离出菌丝做菌种，或直接做原种和可以从其寄主板木上分离出菌丝做菌种，或直接做原种和栽培种。栽培种。菌种的保藏菌种的保藏斜面低温斜面低温矿油保藏矿油保藏砂土保藏砂土保藏液态氮液态氮超低温超低温固体保藏固体保藏砂土处理砂土处理接菌接菌干燥干燥（二）、菌种保藏（二）、菌种保藏n斜面低温法斜面低温法斜面培养基上培养到菌丝旺盛生长斜面培养基上培养到菌丝旺盛生长 移放到移放到4左右的冰箱左右的冰箱 中经经36个月转接一次个月转

17、接一次使用前一两日置常温下活化转管使用前一两日置常温下活化转管 n麸曲法麸曲法用麸皮加水拌匀用麸皮加水拌匀,分装于小试管分装于小试管,厚约；厚约；常规灭菌常规灭菌,冷却后接入菌种培养至长好冷却后接入菌种培养至长好室温下放入装有室温下放入装有CaCl2的干燥器中干燥几日的干燥器中干燥几日,20以下可保藏以下可保藏12年。年。n石蜡油封藏法石蜡油封藏法 在菌种的表面灌注无菌的液体石蜡在菌种的表面灌注无菌的液体石蜡；直立放在低温干燥处保存直立放在低温干燥处保存12年。年。保藏孢子，可将砂土装入小试管并经过严格保藏孢子，可将砂土装入小试管并经过严格灭菌后，再将无菌孢子拌入其中，用石蜡封灭菌后，再将无菌

18、孢子拌入其中，用石蜡封口口。（三）、菌种的衰退与复壮（三）、菌种的衰退与复壮n菌种的衰退菌种的衰退多次无性繁殖、培养条件影响多次无性繁殖、培养条件影响 n菌种的复壮菌种的复壮采用采用低温保藏低温保藏，培养温度不宜超过培养温度不宜超过2828。减少传代减少传代,控制突变型在数量上取得优势的机会。控制突变型在数量上取得优势的机会。单菌落分离单菌落分离,选育生产性能良好的菌株选育生产性能良好的菌株，并有计划地把，并有计划地把无性和无性和有性繁殖的方法交替使用有性繁殖的方法交替使用，组织分离最好每年进行一次，有，组织分离最好每年进行一次，有性繁殖性繁殖3年一次。年一次。淘汰已衰退的个体淘汰已衰退的个体

19、，选择有利于高产菌株的培养条件。，选择有利于高产菌株的培养条件。四、接种培养四、接种培养（一）一级菌种（母种）的培养（一）一级菌种（母种）的培养制斜面培养基制斜面培养基选选优优良良健健壮壮成成熟熟的的种种菇菇,在在无无菌菌条条件件下下取取一一小块接于培养基上；小块接于培养基上；置置2530下培养出菌丝下培养出菌丝,即得纯菌种。即得纯菌种。（二）二级菌种（原种）培养（二）二级菌种（原种）培养选选适适当当配配方方，营营养养成成分分高高于于母母种种培培养基，灭菌。养基，灭菌。从从母母种种内内挑挑取取45mm3的的小小块块放放入入培养基中央培养基中央；置适温培养至菌丝长满瓶。置适温培养至菌丝长满瓶。（

20、三）三级菌种（栽培种）的扩大培养（三）三级菌种（栽培种）的扩大培养选择适当的配方，营养再高于原种选择适当的配方，营养再高于原种；取取原原种种长长满满菌菌丝丝的的小小块块（或或木木块块12片片与与混混合物少许），接入瓶内；合物少许），接入瓶内；培养至菌丝长满瓶培养至菌丝长满瓶。制制种种后后可可接接种种在在不不同同的的培培养养基基（如如段段木木、袋用料等）上大规模培养袋用料等）上大规模培养 原种、栽培种生产原种、栽培种生产n培养基的配制培养基的配制木屑木屑-米糠培养基米糠培养基棉籽壳培养基棉籽壳培养基 种木培养基种木培养基 米粉培养基米粉培养基n灭菌灭菌 高压蒸汽与常压蒸汽灭菌高压蒸汽与常压蒸汽灭

21、菌 原种、栽培种生产原种、栽培种生产n接种接种 每支试管可接每支试管可接4 45 5瓶原种，每瓶原种可接瓶原种，每瓶原种可接50508080袋袋栽培种。栽培种。n培养培养 一般培养温度为一般培养温度为20202828，在接种，在接种12 h12 h后，菌种即后，菌种即可恢复生长；可恢复生长；2 23 d3 d后，种块上菌丝逐渐伸入培养基内；后，种块上菌丝逐渐伸入培养基内；1 1周后有的菌种有红褐色、褐色或黄色分泌物出现，有的有周后有的菌种有红褐色、褐色或黄色分泌物出现，有的有原基出现，可用于生产原基出现，可用于生产。袋料栽培虫草培育段木栽培药用真菌人工栽培第四节第四节 药用真菌的人工栽培药用真

22、菌的人工栽培段木栽培段木栽培段木的准备段木的准备加强管理加强管理场地的选择场地的选择接种接种病虫害防治病虫害防治（一）选择场地（一）选择场地 与真菌种类有关与真菌种类有关茯苓喜酸性砂壤并排水良好的南坡茯苓喜酸性砂壤并排水良好的南坡灵芝、银耳选水源方便、遮阴潮湿、避风向灵芝、银耳选水源方便、遮阴潮湿、避风向南的场地。南的场地。（二）段木准备（二）段木准备 野生野生 壳斗科植物壳斗科植物 营养丰富、水分适中时期砍伐营养丰富、水分适中时期砍伐,常以晚秋落常以晚秋落叶后到第叶后到第2年春树木萌发前为好年春树木萌发前为好 剃枝、锯段、干燥、打孔等项处理。剃枝、锯段、干燥、打孔等项处理。（三）接种（三）接

23、种 栽培的关键栽培的关键 接种前应严格检查段木组织是否枯死接种前应严格检查段木组织是否枯死水分状况是否适中水分状况是否适中选择阴天进行为宜。选择阴天进行为宜。（四）（四）管理管理 栽培的关键栽培的关键 保持栽培场地清洁；保持栽培场地清洁；搭搭棚棚、遮遮阴阴、加加温温、喷喷水水等等调调节节菌菌对对光光照照、温湿度、空气的要求温湿度、空气的要求。（五）杂菌污染与病虫害防治（五）杂菌污染与病虫害防治 霉菌、线虫及白蚁霉菌、线虫及白蚁l霉菌霉菌青霉、曲霉、毛霉等青霉、曲霉、毛霉等培养基灭菌要彻底；培养基灭菌要彻底；严格检查菌种质量，适当加大接种量；严格检查菌种质量，适当加大接种量；立即销毁污染菌种。立

24、即销毁污染菌种。l线虫线虫由土壤或水进入段木由土壤或水进入段木,蛀食菌基部。蛀食菌基部。段木靠地面不宜太近段木靠地面不宜太近,保持水源清洁；保持水源清洁；覆覆土土材材料料最最好好进进行行巴巴氏氏消消毒毒，并并在在地地面面上上撒撒施石灰；施石灰；隔隔离离病病区区，停停水水使使其其干干燥燥，并并用用1%的的冰冰醋醋酸清洁处理烂穴酸清洁处理烂穴,防止蔓延。防止蔓延。黑翅大白蚁（六）采收（六）采收 因菌类不同从接种到采收所需时间及因菌类不同从接种到采收所需时间及采收次数各异。采收次数各异。银耳接种后银耳接种后40日即可陆续采收多次；日即可陆续采收多次；灵芝灵芝4个月收获，每年可收个月收获，每年可收23

25、次。次。代料栽培代料栽培n工艺流程工艺流程菌种准备（母种菌种准备（母种原种原种栽培种）栽培种）备料备料配料配料装袋装袋灭菌灭菌接种接种菌丝培养菌丝培养出菇出菇管理管理采收采收加工加工袋料栽培工艺流程袋料栽培工艺流程菌种准备菌种准备备料配料装袋灭菌加工加工采收出菇管理菌丝培养接种n技术要点技术要点（1 1）栽培材料）栽培材料 阔叶树的木屑和农业废料，阔叶树的木屑和农业废料，（2 2）栽培方式）栽培方式 瓶栽、袋栽、箱栽、菌柱栽培、床栽、阳畦瓶栽、袋栽、箱栽、菌柱栽培、床栽、阳畦床栽、室内层架式床栽等。床栽、室内层架式床栽等。（3 3）栽培场所）栽培场所 专业菇房，也可利用清洁、通风、明亮的房专业菇房，也可利用清洁、通风、明亮的房子改作栽培场所。使用前必须消毒。子改作栽培场所。使用前必须消毒。（4 4）栽培与管理）栽培与管理 按生产季节安排按生产季节安排 培养基按常规配制与灭菌，发菌阶段一般在培养基按常规配制与灭菌，发菌阶段一般在20202424培养，培养室的温度超过培养，培养室的温度超过3030时菌丝生长会受到影响。时菌丝生长会受到影响。（5 5）采收与加工）采收与加工 去除残留的泥土和培养基，按质量标准进去除残留的泥土和培养基，按质量标准进行加工行加工