中药及其制剂分析2.ppt

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1、中药及其制剂分析2 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望中药制剂分析的一般程序含量测定含量测定检查检查鉴别鉴别取样取样鉴别药味的选取原则单味制剂，直接选取单一药味进行鉴别。中药复方制剂，应按照君、臣、佐、使，依次选择药味。当药味较多时，应首选君药、臣药、贵重药、毒性药进行鉴别研究。凡有原粉入药者，应该作显微鉴别。原则上处方中的每一药味均应进行鉴别研究，选择尽量多的药味制订在标准中，但最少也要超过处方的1/3药味。二、鉴别试验鉴定有临床疗效的已知成分黄连

2、小檗碱（抗菌消炎）麻黄 麻黄碱（支气管哮喘）乌头 乌头碱（毒性）洋地黄 强心苷（强心）延胡索 延胡索乙素（镇痛）选择原则应选有专属性的特征进行鉴别多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别显微鉴别（含生药粉制剂）丸剂、片剂、胶囊剂、散剂快速，简便，覆盖面大 色谱鉴别TLC法应用最多 （Rf、颜色、荧光）GC法 含挥发性成分的药物 HPLC法常与含量测定同时进行阴、阳对照法阳性对照阳性对照 将要鉴别的药材按制剂将要鉴别的药材按制剂 工艺处理，再按鉴别方工艺处理，再按鉴别方 法提取的溶液法提取的溶液阴性对照阴性对照 把制剂中要鉴别的药材把制剂中要鉴别的药材 除去，除去，用剩下的各味药用剩下的各味药 按制

3、剂工艺处理，再按按制剂工艺处理，再按 鉴别方法提取的溶液鉴别方法提取的溶液 处方处方 牛黄牛黄10g 10g 朱砂朱砂60g 60g 黄连黄连200g 200g 黄芩黄芩120g 120g 栀子栀子120g 120g 郁金郁金80g80g 方药分析方药分析 牛黄牛黄清热解毒药，主含胆酸类成分清热解毒药，主含胆酸类成分黄连黄连清热燥湿药，主要为小檗碱清热燥湿药，主要为小檗碱黄芩黄芩清热燥湿药，主要为黄酮类清热燥湿药，主要为黄酮类栀子栀子清热泻火药，主含栀子甙清热泻火药，主含栀子甙朱砂朱砂安神药，主含硫化汞（安神药，主含硫化汞（HgSHgS）郁金郁金活血去瘀药，主含挥发油活血去瘀药，主含挥发油 示

4、例 万氏牛黄清心丸黄芩甙供试品黄芩空白栀子甙供试品 栀子空白中药指纹图谱定定义义：运运用用现现代代分分析析技技术术表表征征和和评评价价具具有有代代表表性性中中药药化学成分群信息。化学成分群信息。“现现代代分分析析技技术术”：光光谱谱、色色谱谱、波波谱谱、联联用用技技术术，以及化学计量学和计算机技术等。以及化学计量学和计算机技术等。“中中药药化化学学成成分分群群”：药药材材、饮饮片片、中中药药提提取取物物和和成成药药中中与与药药理理活活性性相相关关的的，由由次次生生代代谢谢产产物物组组成成的的化合物群。化合物群。“代代表表性性”：中中药药化化学学成成分分群群信信息息须须具具有有统统计计学学意意义

5、的样本数。义的样本数。国外应用情况v美美国国FDA允允许许草草药药类类食食品品添添加加剂剂申申报报中中可可以以提提供供色色谱谱指纹图谱。指纹图谱。vWHO在在草草药药评评价价指指导导原原则则中中规规定定若若活活性性成成分分不不明明，可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量的一致性。可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量的一致性。v欧欧共共体体在在草草药药质质量量评评价价的的指指南南中中指指出出，单单靠靠测测定定某某有有效成分的稳定性是不够的。效成分的稳定性是不够的。v国国际际上上基基本本认认可可，草草药药色色谱谱指指纹纹图图谱谱可可以以提提供供复复杂杂成成分分的的定定性性甚甚至至定定量量信信息息，考考察

6、察生生产产中中的的影影响响，控控制制产产品的一致性。品的一致性。色谱指纹图谱的基本属性模糊性模糊性 强调分析、比较指纹图谱的相似性，而强调分析、比较指纹图谱的相似性，而不是完全相同。不是完全相同。是一种是一种综合的、量化的综合的、量化的色谱鉴别手段。色谱鉴别手段。整体性整体性 将指纹图谱作为一个整体来分析和比较将指纹图谱作为一个整体来分析和比较它的综合特征以达到鉴别的目的。它的综合特征以达到鉴别的目的。系系统统性性：指指图图谱谱所所反反映映的的化化学学成成分分全全部部信信息息，其其中中包包括括中中药药有有效效部部位位所所含含主主要要成成分分的的种种类类，或或指指标标成成分分的的全部。全部。特特

7、征征性性：指指图图谱谱中中反反映映的的化化学学成成分分信信息息是是具具有有高高度度选选择择性性的的，这这些些信信息息的的综综合合结结果果，将将有有助助于于特特征征区区分分中中药的真伪与优劣。药的真伪与优劣。稳稳定定性性：在在规规定定的的方方法法与与条条件件下下，不不同同的的操操作作者者和和不不同同的的实验室应能作出相同的指纹图谱。实验室应能作出相同的指纹图谱。指纹图谱的制定原则中药材中药材预处理预处理中药液相色谱中药液相色谱中药液相色谱中药液相色谱分析条件分析条件分析条件分析条件分离分离色谱条件色谱条件初始化初始化指导指导指导指导方法学考察方法学考察指纹图谱指纹图谱调整色谱条件调整色谱条件调整

8、色谱条件调整色谱条件N N其他其他其他其他1.1.计算机辅助指纹图谱评价计算机辅助指纹图谱评价计算机辅助指纹图谱评价计算机辅助指纹图谱评价2.2.多成分定量分析方法建立多成分定量分析方法建立多成分定量分析方法建立多成分定量分析方法建立色谱指纹图谱平台流程中药指纹图谱中药指纹图谱工作站软件工作站软件知母为百合科植物知母(Anemarrhena sphodeloides Bge.)的干燥根茎，为常用中药主要成分为皂苷类，黄酮类，木脂素等芒果苷和新芒果苷是其清热作用 的有效成分示例：知母的指纹图谱研究色谱条件色谱条件色谱柱：Hypersil填料，C18-ODS柱（5m，4.6250mm，大连依利特）

9、；流动相：采用梯度洗脱，A相为乙腈，B相为25mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）；流速：1.0ml/min，运行时间60min，检测波长257nm，柱温为25。梯度程序：Time(min)%A(ACN)%B(buffer)0010020100589220892321585507030溶液制备供试品溶液供试品溶液药材粉末药材粉末0.2g 80%0.2g 80%甲醇甲醇25ml 25ml 超声超声20min20min过滤过滤过滤过滤残渣残渣残渣残渣80%80%80%80%甲醇甲醇甲醇甲醇25ml25ml25ml25ml滤液滤液滤液滤液过滤过滤过滤过滤超声超声超声超声20min20min2

10、0min20min滤液滤液滤液滤液合并滤液合并滤液合并滤液合并滤液挥干，甲醇定容至挥干，甲醇定容至25ml不同产地知母药材的不同产地知母药材的不同产地知母药材的不同产地知母药材的HPLCHPLC指纹图谱指纹图谱指纹图谱指纹图谱中药制剂分析的一般程序含量测定含量测定检查检查鉴别鉴别取样取样检查项目检查项目意义意义方法方法水分水分贮贮藏藏过过程程中中保保证证质质量量的的中中药药指指标，霉变、粘结、成分分解标，霉变、粘结、成分分解烘干法、甲苯法、烘干法、甲苯法、减压干燥法减压干燥法总总灰灰分分和和酸酸不溶性灰分不溶性灰分控制药材中泥土、砂土的量控制药材中泥土、砂土的量炽灼残渣法炽灼残渣法重金属重金属

11、对对人人体体有有严严重重危危害害，药药材材由由于于环环境境污污染染等等原原因因易易引引入入重重金金属属杂质，杂质，严重影响中药出口严重影响中药出口干干法法、湿湿法法破破坏坏-硫硫代代乙酰胺法乙酰胺法砷盐砷盐药药材材由由于于受受除除草草剂剂、杀杀虫虫剂剂、化学肥料等影响易引入砷盐化学肥料等影响易引入砷盐古古蔡蔡法法、二二乙乙基基二二硫硫代氨基甲酸银法等代氨基甲酸银法等农药残留农药残留药药材材栽栽培培为为了了减减少少虫虫害害，喷喷洒洒农农药药，土土壤壤中中残残存存的的农农药药，含含磷、含氯，磷、含氯，严重影响中药出口严重影响中药出口氧氧瓶瓶燃燃烧烧法法(不不明明农农药药测测定定总总氯氯/磷磷量量)

12、、GC(已知农药已知农药)、比色等、比色等中药及其制剂分析的杂质检查中药及其制剂分析的杂质检查烘干法烘干法（不含或少含挥发性成分）（不含或少含挥发性成分）甲苯法甲苯法（含挥发性成分）（含挥发性成分）减压干燥法减压干燥法（含挥发性成分贵重药）（含挥发性成分贵重药）GC法法(一一)水分测定法水分测定法酸不溶性灰分的测定（外来杂质）酸不溶性灰分的测定（外来杂质）总灰分的测定（生理灰分总灰分的测定（生理灰分+外来杂质）外来杂质）（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定WHO规定植物药规定植物药铅铅10ppm镉镉0.3ppm干法破坏干法破坏湿法破坏湿法破坏硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法

13、（三）重金属的测定（三）重金属的测定（四）残留农药（四）残留农药有有机机氯氯类类：六六六六六六、DDT、五五氯氯硝硝基基苯苯、艾艾氏剂氏剂有有机机磷磷类类：磷磷酸酸酯酯类类（敌敌敌敌畏畏、敌敌百百虫虫）、硫硫代代磷磷酸酸酯酯类类（对对硫硫磷磷）、磷磷酰酰胺胺及及硫硫代代磷磷酰酰胺胺（甲胺磷）（甲胺磷）氨氨基基甲甲酸酸酯酯类类：萘萘基基氨氨基基甲甲酸酸酯酯类类（西西维维因因）、杂环甲基氨基甲酸酯类（呋喃丹）、涕灭威等杂环甲基氨基甲酸酯类（呋喃丹）、涕灭威等拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类 农残的特性农残的特性中药材中农药残留污染具有普遍性中药材中农药残留污染具有普遍性 种植药材中农药残留量较高，而野生药

14、材中仅有痕种植药材中农药残留量较高，而野生药材中仅有痕量检出量检出中成药中农药残留量一般较低中成药中农药残留量一般较低 同一地区的同种药材、同一药材的不同部位农药残同一地区的同种药材、同一药材的不同部位农药残留量也有较大的差异留量也有较大的差异 不易发生急性中毒事件不易发生急性中毒事件 有机磷和氨基甲酸酯类农药检出率较低，残留量也有机磷和氨基甲酸酯类农药检出率较低，残留量也低低 薄层色谱法薄层色谱法薄薄层层酶酶抑抑制制法法-利利用用某某些些有有机机磷磷农农药药对对胆胆碱碱酯酯酶酶具具有有抑抑制制作作用用，且且酶酶的的基基质质(-醋醋酸酸萘萘酯酯)水水解解产产物物能能与与特特定定显显色色剂剂结结

15、合合呈呈紫紫色色反反应应原原理理，在在已已有有农农药药展展层层的的薄薄层层板板上上，其其农农药药斑斑点点部部位位因因酶酶的的活活性性被被抑抑制制，基基质质不不被被水水解解，不不引引起起呈呈色色反反应应，能能在在薄薄层层板板上上衬衬出出无无色色斑斑点点，根根据斑点大小，经扫描测定残留量。据斑点大小，经扫描测定残留量。展开前展开前展开后展开后1 2 1 2 气相色谱法气相色谱法提取提取：1、有机溶剂、有机溶剂+硅藻土或硅藻土或Flori硅土柱纯化硅土柱纯化 2、超临界流体萃取（超临界流体萃取（SFE）色谱柱色谱柱：毛细管柱，多以硅氧烷类为固定液，毛细管柱，多以硅氧烷类为固定液，如如OV-17，OV

16、-21，SE-30，SE-54等等检测器检测器：电子捕获检测器（电子捕获检测器（ECD）火焰光度检测器（火焰光度检测器（FPD）ChP2010ChP2010一部附录一部附录IX Q IX Q 农药残留量测定法农药残留量测定法 色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验：SE-54（30m 0.32mm 0.25um）或）或DB-1701，63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度：电子捕获检测器。进样口温度：230；检测器；检测器温度：温度：300；不分流进样；不分流进样；程序升温：程序升温：初始初始100，每分钟每分钟10升至升至220，每分钟，每分钟8升至升至250，保持，保持10

17、分钟。分钟。理论塔板数按理论塔板数按-BHC峰计算，不低于峰计算，不低于106，分离度应大，分离度应大于于1.5。ChP2010ChP2010一部附录一部附录IX Q IX Q 农药残留量测定法农药残留量测定法混混 合合 对对 照照 品品 溶溶 液液：BHC（、-BHC），DDT（PP-DDE、PP-DDD、OP-DDT、PP-DDT），五五 氯氯 硝硝 基基 苯苯（PCNB），溶剂为石油醚（），溶剂为石油醚（60-90）；）；供试品溶液制备：供试品溶液制备：药材、中药制剂药材、中药制剂进样量：进样量：1ul按外标法计算按外标法计算9种农药残留量。种农药残留量。0.2 g/g；0.1 g/g

18、针对农残的对策 抗虫药材品种的选育抗虫药材品种的选育生物防治及生物农药的使用生物防治及生物农药的使用科学种植中药材，科学使用农药科学种植中药材，科学使用农药采收、加工、包装、贮存采收、加工、包装、贮存药材种植环境的选择药材种植环境的选择降低土壤农药残留本底降低土壤农药残留本底加强绿色中药材基地建设加强绿色中药材基地建设中药制剂分析的一般程序含量测定含量测定检查检查鉴别鉴别取样取样测定项目的选定原则1 首选君药及贵重药、剧毒药建立含量首选君药及贵重药、剧毒药建立含量测定方法测定方法2 其次考虑臣药及其他味药其次考虑臣药及其他味药3 有效成分明确的，可选有效成分有效成分明确的，可选有效成分4 成分

19、类别清楚的，可测某一类总成分成分类别清楚的，可测某一类总成分的含量的含量含量测定含量测定5检测成分应归属某单一药味检测成分应归属某单一药味6检测成分应与中医用药的功能主治相近检测成分应与中医用药的功能主治相近7无法含量测定的，可测定浸出物含量无法含量测定的，可测定浸出物含量化学分析法化学分析法色谱法色谱法常用定量方法常用定量方法分光光度法分光光度法（一）化学分析法重量分析法重量分析法 容量分析法容量分析法特点特点 A、准确度、精密度高、准确度、精密度高 B、抗干扰能力差、抗干扰能力差（二）分光光度法UV法法 比色法比色法特点特点 A、灵敏度高、灵敏度高 B、简便、快速、简便、快速 C、精密度稍

20、低、精密度稍低 D、干扰多、干扰多（三）薄层扫描法（TLCS）测定薄层板上斑点对单色光的吸测定薄层板上斑点对单色光的吸收或反射的强度而进行定量的方法收或反射的强度而进行定量的方法特点特点 A、分离效果好、分离效果好 B、适用于无法用、适用于无法用UV、HPLC 法测定的组分法测定的组分 C、准确度、精密度低于、准确度、精密度低于HPLC 1、选择测定条件、选择测定条件（1）薄层色谱条件）薄层色谱条件分离好分离好 不拖尾不拖尾（2）检测方法）检测方法吸收测定法吸收测定法荧光测定法荧光测定法反射法反射法透射法透射法（3）扫描方式）扫描方式 单波长单波长双波长双波长线性扫描法线性扫描法锯齿扫描法锯齿

21、扫描法外标法外标法（4）散射参数）散射参数SX（1）薄层板）薄层板 均匀、平整均匀、平整2、注意事项注意事项（2）点样量）点样量 准确准确（4）显色剂）显色剂 均匀、适当均匀、适当（5）保护斑点）保护斑点 用相同大小洁净玻璃盖住薄用相同大小洁净玻璃盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固定和层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固定和隔绝空气作用隔绝空气作用（3）斑点）斑点 应完全分离，不拖尾应完全分离，不拖尾（四）HPLC法RP-HPLC流动相流动相 甲醇甲醇-水水PIC 反离子反离子 氢氧化四丁基铵氢氧化四丁基铵色谱柱色谱柱 ODSRP-PIC 反离子反离子 烷基磺酸盐烷基磺酸盐 无机阴离子无机

22、阴离子外标法和内标法外标法和内标法流动相的选择（1）中性成分）中性成分甲甲醇醇-水水、乙乙腈腈-水水、四四氢氢呋呋喃喃-水水三三种种系系统统。乙乙腈腈-水水:黏度较小黏度较小;乙腈的紫外末端吸收小乙腈的紫外末端吸收小;待待测测物物极极性性较较大大甲甲醇醇或或乙乙腈腈的的比比率率可可适适当当小些小些;待待测测物物极极性性较较小小适适当当加加大大甲甲醇醇或或乙乙腈腈的的比比例例;流动相的选择（2）碱性成分）碱性成分生生物物碱碱类类化化合合物物如如小小檗檗碱碱、麻麻黄黄碱碱等等;固固定定相相上上的的残余硅醇基往往使峰拖尾或被吸附，柱效降低。残余硅醇基往往使峰拖尾或被吸附，柱效降低。向向流流动动相相中

23、中加加入入胺胺类类添添加加剂剂作作为为扫扫尾尾剂剂，让让胺胺类类添添加加剂剂中中的的游游离离胺胺基基与与残残余余硅硅醇醇基基（SiOH）首首先先相相互互作作用用，从从而而掩掩盖盖生生物物碱碱分分子子与与键键合合相相的的亲亲硅硅醇基效应。醇基效应。常用添加剂：三乙胺、乙二胺、二乙胺、正丁胺常用添加剂：三乙胺、乙二胺、二乙胺、正丁胺 流动相的选择 加入反离子加入反离子，常用离子对试剂为烷基磺酸（盐），如，常用离子对试剂为烷基磺酸（盐），如庚烷磺酸钠；所采用的流动相的庚烷磺酸钠；所采用的流动相的pH为为3 3.5。例如反相离子对例如反相离子对HPLC法测定伪麻黄碱法测定伪麻黄碱分离条件为色谱柱：（分

24、离条件为色谱柱：（4.0mmi.d.25cm），流动），流动相：乙腈（相：乙腈（50ml）-水（水（400ml）-磷酸氢钾（磷酸氢钾（4g）-庚烷磺酸钠（庚烷磺酸钠（1g）：乙二胺（）：乙二胺（0.1ml），流速），流速0.7ml/min。流动相的选择（3）酸性成分）酸性成分中药有效成分酸性成分：脂肪酸、酚类、黄酮类中药有效成分酸性成分：脂肪酸、酚类、黄酮类等。等。如丹参素、黄芩甙、甘草酸等；如丹参素、黄芩甙、甘草酸等；常采用离子抑制色谱法及离子对色谱法。常采用离子抑制色谱法及离子对色谱法。流动相的选择 离子抑制色谱法离子抑制色谱法通通过过向向流流动动相相中中加加入入少少量量弱弱酸酸（常常用用

25、醋醋酸酸）调调节节流流动动相相的的pH值值，抑抑制制组组分分的的解解离离，以以达达到到分分离离的目的。本法适用于的目的。本法适用于3pKa7的弱酸。的弱酸。例如反相离子抑制色谱法测定绿原酸例如反相离子抑制色谱法测定绿原酸分分离离条条件件为为色色谱谱柱柱:YWG-C18(4.6mm25cm);流流动相动相:甲醇甲醇-水水-乙酸乙酸(60:40:0.5)。流动相的选择 离子对色谱离子对色谱离子对色谱法测定中药有效成分酸性成分时，所采用的流动相pH一般为77.5，常用的反离子为四丁基季铵盐及四丁基磷酸盐等。例如大黄素：反相离子对色谱法分离条件为色谱柱:YWG-C18(4.6mmi.d.25cm);流

26、动相:甲醇-水(含10mmol/L四丁基磷酸钠)=65:35;流速1ml/min。中药含量测定色谱法的难点分离不完善分离不完善色谱容量色谱容量 结构相似结构相似 检测受限制检测受限制检测响应检测响应 含量低含量低 指标成分的选择指标成分的选择易分离检测成分易分离检测成分 有效有效/毒性毒性/贵重成分贵重成分 本品为()-a-(羟甲基)苯乙酸-8-甲基-8-氮杂双环3.2.1-3-辛酯硫酸盐-水合物。按干燥品计算，含(C17H23NO3)2H2S04不得少于98.5%。【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭。本品在水中极易溶解，在乙醇中易溶。熔点熔点 取本品，在120干燥4小时后，立即依法

27、测定(附录C)，熔点不得低于189，熔融时同时分解。【鉴别】(1)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集487图)一致。(2)本品显托烷生物碱类的鉴别反应(附录)。(3)本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应(附录)。【检查】酸度酸度 取本品0.50g，加水10ml溶解后，加甲基红指示液1滴，如显红色，加氢氧化钠滴定液(0.02molL)0.15ml，应变为黄色。莨菪碱莨菪碱 取本品，按干燥品计算，加水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法测定(附录E)，旋光度不得过-0.40。有关物质有关物质 取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100m

28、l量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(附录V D)试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05molL磷酸二氢钾溶液(含0.0025molL庚烷磺酸钠)-乙腈(84:16)(用磷酸或氢氧化钠试液调节pH值至5.0)为流动相，检测波长为225nm，阿托品峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶液20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除相对主峰保留时间0.17前的溶剂峰外，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液

29、主峰面积（1.0%）。干燥失重干燥失重 取本品，在120干燥4小时，减失重量不得过5.0(附录L)。炽灼残渣炽灼残渣 不得过0.1(附录N)。【含量测定】取本品约0.5g，精密称定，加冰醋酸与醋酐各10ml溶解后，加结晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1molL)滴定至溶液显纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1molL)相当于6768mg的(C17H23NO3)2H2S04【类别】抗胆碱药。【贮藏】密封保存。【制剂】（1）硫酸阿托品片（2）硫酸阿托品注射液中药现代化研究的内容探明中药的作用机理确证主要有效成分及相互的关系提出评价其质量的客观指标制定出比较完善的质量标准实现中药制剂质量由控制向评价的转变研究现代化、生产产业化、产品国际化复习思考题1、常见中药制剂的分类？、常见中药制剂的分类？2、中药制剂分析中待测成分的提取方、中药制剂分析中待测成分的提取方法有哪些？法有哪些？3、中药及其制剂的定性鉴别方法？、中药及其制剂的定性鉴别方法？