中药制剂检测技术第五章含量测定.pptx

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1、2021/9/131第五章第五章 中药制剂的含量测定中药制剂的含量测定（Content DeterminationContent Determination）概概 述述一、含量测定的定义和意义一、含量测定的定义和意义一、含量测定的定义和意义一、含量测定的定义和意义 中中药药制制剂剂的的含含量量测测定定是是指指用用适适当当的的化化学学方方法法或或仪仪器器分分析析方方法法对对制制剂剂中中某某种种（些些）有有效效成成分分或或有有效效部部位位进进行行的的定定量量分分析析。并并以以其其测测定定结结果果是是否否符符合合药药品品标标准准的的规规定定来来判判断断药药品品的的优优劣劣，是是控控制制和和评评价价药

2、药品品质量的重要方法。质量的重要方法。2021/9/132二、含量测定方法 中中药药制制剂剂含含量量测测定定的的方方法法包包括括化化学学分分析析法法和和仪仪器器分分析析法法两两大大类类。由由于于中中药药制制剂剂组组成成复复杂杂，仪仪器器分分析析法法更更为为常常用用。中中国国药药典典中中药药制制剂剂含含量量测测定方法概况见下表。定方法概况见下表。本本章章重重点点介介绍绍浸浸出出物物测测定定法法、挥挥发发油油测测定定法法、分光光度法分光光度法 、TLCSTLCS、HPLC HPLC 和和GCGC等。等。2021/9/133 方法方法 总数总数 修订修订 新增新增 删除删除 HPLC 339 30

3、282 0HPLC 339 30 282 0 TLC 32 3 12 12 TLC 32 3 12 12 GC 23 3 19 0 GC 23 3 19 0 分光光度法分光光度法 18 0 3 918 0 3 9 滴定法滴定法 13 0 3 013 0 3 0 重量法重量法 5 0 1 15 0 1 1 氮测定法氮测定法 5 1 1 05 1 1 0 挥发油测定法挥发油测定法 3 0 0 13 0 0 1 浸出物测定法浸出物测定法 13 1 2 1 13 1 2 1 总计总计 456 37 327 23456 37 327 23仪器分析法化学分析法2021/9/134第一节第一节 浸出物测定法

4、浸出物测定法（Determination of ExtractiveDetermination of Extractive）一、定义 浸浸出出物物测测定定法法系系根根据据制制剂剂中中化化学学成成分分的的溶溶解解性性，选选择择适适当当的的溶溶剂剂浸浸提提(提提取取)样样品品，并并测测定定浸浸出出物物（提取物）的含量，以此来控制药品的质量。（提取物）的含量，以此来控制药品的质量。2021/9/135二、意义 这这是是一一种种较较为为粗粗略略的的定定量量分分析析方方法法。但但对对于于有有效效成成分分不不明明确确或或无无法法建建立立确确切切的的定定量量分分析析方方法法的的中中药药材材及及其制剂，尚具有

5、一定的意义。其制剂，尚具有一定的意义。中中国国药药典典附附录录收收载载了了三三种种测测定定方方法法：水水溶溶性性浸浸出出物物测测定定法法、醇醇溶溶性性浸浸出出物物测测定定法法和和挥挥发发性性醚醚浸浸出出物物测测定定法法。有有的的品品种种还还采采用用了了乙乙酸酸乙乙酯酯浸浸出出物物测测定定法法。中中国国药药典典收收载载的的中中成成药药浸浸出出物物测测定定品品种种及及其其规规定定见表见表4-184-18。供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。2021/9/136类别品名溶剂方法限度（%）醇 溶性 浸出 物测 定七厘散乙醇热浸法60.0刺五加浸膏甲醇热浸法

6、60.0刺五加片甲醇热浸法80mg/片儿康宁糖浆正丁醇3.0独一味胶囊正丁醇8.0鼻窦炎口服液正丁醇1.2挥 发性 醚浸 出物 测定午时茶颗粒乙醚0.35沉香化气丸乙醚0.40乙醚0.10九味羌活丸乙醚0.30龟龄集乙醚0.25水浸出物测 定暑症片冷浸法25.0乙酸乙脂浸出物测定2021/9/137 三、水溶性浸出物测定法三、水溶性浸出物测定法 本本法法系系以以水水为为溶溶剂剂，对对制制剂剂中中水水溶溶性性成成分分进进行行提提取取，并并计计算算其其在在制制剂剂中中的的含含量量(%)(%)。本本法法包包括括冷冷浸浸法法和和热热浸浸法法。后后者者适适用于不含或少含淀粉、粘液质等成分的样品。用于不含

7、或少含淀粉、粘液质等成分的样品。1 1冷浸法冷浸法 取取供供试试品品约约4g4g，称称定定重重量量，置置250300ml250300ml的的锥锥形形瓶瓶中中，精精密密加加入入水水100ml100ml，塞塞紧紧，冷冷浸浸，前前6 6小小时时内内时时时时振振摇摇，再再静静置置1818小小时时，用用干干燥燥滤滤器器迅迅速速滤滤过过，弃弃去去初初滤滤液液，精精密密量量取取滤滤液液20ml20ml，置置己己干干燥燥至至恒恒重重的的蒸蒸发发皿皿中中，在在水水浴浴蒸蒸干干后后，于于105105干干燥燥3 3小小时时，移移置置干干燥燥器器中中，冷冷却却3030分分钟钟，迅迅速速精精密密称称定定重重量量，除除另

8、另有有规规定定外外，以以干干燥燥品品计计算算供供试试品品中中水水溶溶性性浸浸出出物物的的含含量量（W/W%W/W%）。）。2021/9/138含量（含量（W/W%W/W%）=100%100%m mi i 为水溶性浸出物重量（为水溶性浸出物重量（g g）mms s为为干干燥燥供供试试品品的的重重量量（g g）=供供试试品品重重量量（1 1 含水量含水量%)%)）2.热浸法(中成药较少用 自学)3.实例 暑症片的水溶性浸出物测定（P128）mi10020 ms2021/9/139 四、醇溶性浸出物测定法四、醇溶性浸出物测定法 本本法法系系以以甲甲醇醇、乙乙醇醇或或正正丁丁醇醇为为溶溶剂剂，提提取取

9、药药品品中中相相应应的的醇醇溶溶性性成成分分，并并计计算算其其含含量量（%）。正正丁丁醇醇浸浸出出物物测测定定法法主主要要用用于含较多皂苷类成分的制剂，更具专属性。于含较多皂苷类成分的制剂，更具专属性。1.1.甲醇、乙醇浸出物的测定甲醇、乙醇浸出物的测定 照水溶性浸出物测定法测定。照水溶性浸出物测定法测定。2.2.正丁醇浸出物的测定正丁醇浸出物的测定 按按各各品品种种项项下下规规定定的的方方法法测测定定。一一般般说说来来，水水溶溶液液制制剂剂可可直直接接用用水水饱饱和和的的正正丁丁醇醇提提取取数数次次，合合并并提提取取液液，置置已已干干燥燥恒恒重重的的蒸蒸发发皿皿中中，蒸蒸干干，置置10510

10、5干干燥燥3 3小小时时，移移置置干干燥燥皿皿中中，冷冷却却3030分分钟钟，迅迅速速精精密密称称定定重重量量，计计算算供供试试品品中中正正丁丁醇醇浸浸出出物物的的含含量量（W/V W/V%）。固固体体制制剂剂可可先先加加水水溶溶解解，移移至至分分液液漏漏斗斗中中，用用水水饱饱和和的的正正丁丁醇醇提提取取数数次次，合合并并提提取取液液，照照上上述述方方法法蒸蒸干干，干干燥燥，称称定定浸浸出出物物重重量量，计计算算出出制制剂剂中中正正丁丁醇醇浸浸出出物物的的含含量量（W/W W/W%）。）。2021/9/1310 3.3.注意事项注意事项 （1 1）回流加热乙醚须在水浴上进行。）回流加热乙醚须在

11、水浴上进行。（2 2）蒸发皿中挥去乙醚须在室温下风橱中进行。）蒸发皿中挥去乙醚须在室温下风橱中进行。（3 3）加热挥去浸出物中挥发性成分时，应缓缓加）加热挥去浸出物中挥发性成分时，应缓缓加热至热至 105105 4.4.实例实例 （1 1）儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定）儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定 （2 2）刺五加浸膏的甲醇浸出物测定）刺五加浸膏的甲醇浸出物测定2021/9/1311五、挥发性醚浸出物测定法五、挥发性醚浸出物测定法 本本法法以以乙乙醚醚为为溶溶剂剂，对对制制剂剂中中挥挥发发性性醚醚溶溶性性成成分分进进行行提提取取，并并计计算算其其在在制制剂剂中中的的含含量量（W/W W/W%）

12、。本本法法主主要要用用于于含含挥挥发发性性成成分分较较多多的的制剂，专属性较强。制剂，专属性较强。1.1.测定法测定法 取供试品（过四号筛）取供试品（过四号筛）25g25g，置五氧化二磷干燥器中，干燥，置五氧化二磷干燥器中，干燥1212小时，小时，精密称定重量（精密称定重量（mms s）,置索氏提取器中，加乙醚适量，除另有规定外，置索氏提取器中，加乙醚适量，除另有规定外，加热回流提取加热回流提取8 8小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，放置，小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中，干燥挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中，干燥1818小时，精密称定（

13、小时，精密称定（mm1 1），缓缓加热至），缓缓加热至105105，并于，并于105105干燥至恒重（干燥至恒重（mm2 2）。其减失重量即）。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量（为挥发性醚浸出物的重量（mm1 1-m-m2 2）。计算，即得。）。计算，即得。含量（含量（W/W%W/W%）=100%100%msm1-m22021/9/13122.2.实例实例 九味羌活丸的挥发性醚浸出物测定九味羌活丸的挥发性醚浸出物测定 本本品品由由羌羌活活、防防风风、苍苍术术、细细辛辛、川川芎芎、白白芷芷、黄黄芩芩、甘甘草草、地地黄黄等等九九味味中中药药组组成成，其其主主要要有有效效成成分为挥发油，故测定其中

14、挥发性醚浸出物的含量。分为挥发油，故测定其中挥发性醚浸出物的含量。2021/9/1313第二节第二节 挥发油测定法挥发油测定法（Determination of Volatile OilDetermination of Volatile Oil）一、意义一、意义 某某些些药药品品中中的的主主要要有有效效成成分分为为挥挥发发油油，故故中中国国药药典典收收载载了了挥挥发发油油测测定定法法，采采用用水水蒸蒸气气蒸蒸馏馏法法对对药药品品中中挥挥发发油油总总量量进进行行测测定定，以以控控制制药药品品质质量量。例例如如，正正骨骨水水、牡牡荆荆油油胶胶丸丸、保保妇妇康康栓栓和和满满山山红红油油滴滴丸丸等等中

15、中挥挥发油的测定。发油的测定。二、测定原理二、测定原理 首首先先利利用用挥挥发发油油的的挥挥发发性性用用水水蒸蒸气气蒸蒸馏馏法法将将其其提提取取完完全全；再再利利用用其其较较强强的的亲亲脂脂性性与与水水不不相相溶溶而而分分层层，即即可读取油的总量并求算出含量。可读取油的总量并求算出含量。2021/9/1314三、挥发油测定装置（图）2021/9/1315四、测定方法四、测定方法 供试品需粉碎后过二号至三号筛，混匀再测定。供试品需粉碎后过二号至三号筛，混匀再测定。1.1.甲法甲法 本本法法适适用用于于测测定定相相对对密密度度在在1.01.0以以下下的的挥挥发发油油。取取供供试试品品适适量量（约约

16、相相当当于于挥挥发发油油0.5ml0.5ml1.0ml1.0ml），称称重重（准准至至0.01g0.01g），置置烧烧瓶瓶中中，加加水水300ml300ml500ml500ml（或或适适量量）与与玻玻璃璃珠珠数数粒粒，振振摇摇混混合合后后，连连接接挥挥发发油油测测定定器器与与回回流流冷冷凝凝管管。自自冷冷凝凝管管上上端端加加水水使使充充满满挥挥发发油油测测定定器器的的刻刻度度部部分分，并并溢溢流流入入烧烧瓶瓶时时为为止止。置置电电热热套套中中或或用用其其他他适适宜宜方方法法缓缓缓缓加加热热至至沸沸，并并保保持持微微沸沸约约5 5小小时时，至至测测定定器器中中油油量量不不再再增增加加，放放置置片

17、片刻刻，开开启启测测定定器器下下端端的的活活塞塞，将将水水缓缓缓缓放放出出，至至油油层层上上端端到到达达刻刻度度0 0线线上上面面5mm5mm处处为为止止。放放置置1 1小小时时以以上上，再再开开启启活活塞塞使使油油层层下下降降至至其其上上端端恰恰与与刻刻度度0 0线线平平齐，读取挥发油量，计算即得。齐，读取挥发油量，计算即得。2021/9/13162.乙法 本法适用于测定相对密度在本法适用于测定相对密度在1.01.0以上的挥发油。取水约以上的挥发油。取水约300ml300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，

18、并溢流入烧瓶时为止，测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯再用移液管加入二甲苯1ml1ml，然后连接回流冷凝管。将烧瓶，然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中内容物加热至沸，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。部呈冷却状态为度。3030分钟后，停止加热，放置分钟后，停止加热，放置1515分钟以分钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自“取供试品适量取供试品适量”起，依法测定，自油层中减去二甲苯量，即为挥发油量，起，依法测定，自油层中减去二甲苯量，即为挥发油量，计算即得。计算即得

19、。2021/9/1317五、含量计算 含量（含量（V/W V/W）=100%=100%含量（含量（V/W V/W）=100%=100%含量（含量（V/W V/W）=100%=100%挥发油体积（挥发油体积（mlml）样品体积（样品体积（mlml）样品重量（样品重量（g g）挥发油密度（挥发油密度（g/mlg/ml）VOWSWSVO DOVSVOVO WSDOVS2021/9/1318第三节第三节 可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（Ultraviolet and Visible SpectrophotometryUltraviolet and Visible Spectrophotomet

20、ry）一、定义 根据被测物质在可见-紫外光的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度对该物质进行定性定量分析的方法称可见-紫外分光光度法。紫外分光光度计工作原理紫外分光光度计工作原理紫外吸收光谱图紫外吸收光谱图2021/9/1319二、特点 本法操作简便，灵敏度高，常用于中成药含测。本法操作简便，灵敏度高，常用于中成药含测。但本法不具分离功能，常用于总成分的测定。但本法不具分离功能，常用于总成分的测定。三、定量分析的理论基础 朗伯比尔定律朗伯比尔定律 A=K C LA=K C L A A为吸收度为吸收度 K K为吸收系数为吸收系数 C C为溶液浓度为溶液浓度 L L为溶液厚度为溶液厚度2021/9

21、/1320四、药典收载了三种测定方法 1.吸收系数法 仅用于UV,不需对照品。2.对照品比较法 主要用于Vis,需用对照品。3.标准曲线法 主要用于Vis,需用对照品。（原计算分光光度法取消）2021/9/1321第四节第四节 薄层扫描法薄层扫描法（Thin Layer Chromatography Scan TLCS Thin Layer Chromatography Scan TLCS）一、定义一、定义一、定义一、定义 薄层扫描法（薄层扫描法（TLCSTLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生对薄层色

22、谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。定性定量分析的方法。2021/9/1322 二、特点二、特点二、特点二、特点 具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。目前随着制板、

23、点样、展开等操作的仪等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制剂检验中，已成为重要的分析方法。剂检验中，已成为重要的分析方法。中国药典中国药典中有中有3232个中成药品种采用该法进行含量测定。个中成药品种采用该法进行含量测定。2021/9/1323 三、仪器及其工作原理 1.薄层扫描仪 中国药典采用双波长薄层扫描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAG-型等。2.扫描仪工作原理 2021/9/1324 3.3.测定方式测定方式

24、 （1 1）吸收法）吸收法 适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。（2 2）荧光法）荧光法 适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法高。射法测定，其灵敏度比吸收法高。2021/9/13254.4.测定波长测定波长 （1 1）单波长）单波长 一般用于荧光

25、测定法，即用某一波长的紫外光（激发光）一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。（2 2）双波长）双波长 主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（ss）和参比波长（）和参比波长（RR）依次扫描斑点，所测吸收度为）依次扫描斑点，所测吸收度为A=AA=As s A AR R R R 样品波长（样品波长（ss）：即被测成分的）：即被测成分的maxmax 参比波长（参比波

26、长（RR）：即被测成分的）：即被测成分的minmin或此波长处无吸收。或此波长处无吸收。2021/9/1326 5.5.光束扫描方式光束扫描方式（1 1）直线扫描）直线扫描 适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。（2 2）锯齿扫描）锯齿扫描 适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸收测定法常用此扫描方式。收测定法常用此扫描方式。6.6.光源光源（1 1）钨灯（）钨灯（WW）供可见光（供可见光（350350800nm800nm）测定，扫描有色成分的斑点。）测定，扫描有色成分的斑点。（

27、2 2）氘灯（）氘灯（D2D2）供紫外光（供紫外光（200200400nm400nm）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。（3 3）氙灯（）氙灯（XeXe）供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为365nm365nm。2021/9/1327 四、含量测定方法（外标法）TLCSTLCS含量测定有含量测定有外标法和内标法外标法和内标法，中国药典仅采用，中国药典仅采用外标法外标法。1.1.原理原理 外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描

28、被测成分和对照品同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。计算出被测成分的含量。2.2.类型类型 根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点法和外标两点法。法和外标两点法。若标准曲线通过原点，采用外标一点法。若标准曲线通过原点，采用外标一点法。若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。2021/9/1328外标一点法的直线方程：外标一点法的直线方程：C=F A F

29、 C=F A F 为斜率为斜率外标两点法的直线方程：外标两点法的直线方程：、F F1 1为斜率F F2 2为截距2021/9/13293.3.操作步骤操作步骤（1 1）对照品溶液的制备）对照品溶液的制备（2 2）供试品溶液的制备）供试品溶液的制备（3 3）点样）点样 一般要求使用市售薄层板。一般要求使用市售薄层板。外标一点法外标一点法：至少：至少6 6个原点个原点 对照品（对照品（R R）2 2个（同一质量）：个（同一质量）：2R2R 供试品（供试品（S S）4 4个（同一质量）分个（同一质量）分2 2组：组：2S2S1 1 1 1 2S2S2 2 2 22021/9/1330外标两点法外标两

30、点法：至少：至少8 8个原点个原点 对照品（R）4个 分2组 大质量的2个：2R1 1 小质量的2个：2R2 2 供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S1 1 2S2 2对照品与供试品应交叉点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量。外标两点法外标两点法外标一点法外标一点法2021/9/1331（4 4）展开）展开（5 5）显色定位）显色定位 供试品色谱中待测斑点的比移值（供试品色谱中待测斑点的比移值（RfRf值）和光谱扫描得到的值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结吸收光谱最大吸

31、收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。果的准确性。（6 6）扫描）扫描 应应沿展开方向沿展开方向扫描，扫描，不得横向不得横向扫描。扫描。（7 7）含量计算）含量计算 外标一点法外标一点法外标一点法外标一点法 求出供试品被测成分（斑点）的质量求出供试品被测成分（斑点）的质量Ms=MRXAsARMs被测成分的质量（M n=2）MR R被测对照品的质量As被测成分吸收度（荧光强度）积分值（A n=2）AR R被测对照品吸收度（荧光强度）积分值（A n=2）_2021/9/1332求出供试品中被测成分的含量求出供试品中被测成分的含量含量（W/W）=Ms X 稀释倍数取样量含量（W/片）=

32、Ms X 稀释倍数 X 平均片重取样量外标两点法外标两点法 求出供试品斑点中被测成分的质量Ms=C+V1C(V2-V1)(A-A1)(A2-A1)Ms被测成分的质量（mg n=2）A1 1对照品小点样量吸收度V1 1对照品小点样量（l）（荧光强度）积分值（A n=2）V2 2对照品大点样量（l）A2 2对照品大点样（荧光强度）A被测成分吸收度（荧光强度）积分值（A n=2）积分值（A n=2）C对照液的浓度（mg/ml）-_2021/9/1333五、应用实例五、应用实例 1.1.九分散中士的宁的含量测定九分散中士的宁的含量测定 九分散是由马钱子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉九分散是由马钱

33、子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉中含有士的宁、番木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，中含有士的宁、番木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，故需控制马钱子含量。中国药典规定按干燥品计每包含马钱子故需控制马钱子含量。中国药典规定按干燥品计每包含马钱子以士的宁计应为以士的宁计应为4.54.55.5mg5.5mg。供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品取本品1010包，混合研匀。精密称取包，混合研匀。精密称取2g2g置具塞锥形瓶中，精密置具塞锥形瓶中，精密加氯仿加氯仿20ml20ml与浓氨试液与浓氨试液1ml1ml，轻轻摇匀，称重，于室温下放置，轻轻摇匀，称重，于室温下放置2424小时，再称

34、重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取滤液密量取滤液10ml10ml，用硫酸溶液（，用硫酸溶液（33003300）分次提取，至生物）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿加氯仿5ml5ml使溶解，作为供试品溶液。使溶解，作为供试品溶液。2021/9/1334 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取士的宁对照品，加氯仿制成每取士的宁对照品，

35、加氯仿制成每1ml1ml含含0.4mg0.4mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。测定法测定法 吸取上述两种溶液各吸取上述两种溶液各5 5l l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶GF254GF254薄层板上，以甲薄层板上，以甲苯苯-丙酮丙酮-乙醇乙醇-浓氨试液。（浓氨试液。（161214161214）的上层溶液为展开剂，展开，）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：s=254nm s=254nm，R R R R=325nm=325nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，测量供试品吸收度积分值与对

36、照品吸收度积分值，计算，即得。已知：即得。已知：A AR R R R19663.0719663.07，AsAs20617.2520617.25，取样量，取样量2.098g2.098g。解答问题解答问题 采用外标一点法还是外标两点法？采用外标一点法还是外标两点法？采用什么方法显色定位？采用什么方法显色定位？计算每包药品中马钱子的含量。（保留两位有效数字）计算每包药品中马钱子的含量。（保留两位有效数字）2021/9/1335求出供试品斑点中士的宁的质量求出供试品斑点中士的宁的质量求出供试品中士的宁的含量求出供试品中士的宁的含量Ms=MRX=5lx 0.4g/lx =2.1gAsAR19663.07

37、20617.25含量（mg/包）=Ms X 稀释倍数 X 标示重量取样量=0.0021mg X 5ml X 20ml X 2.5g/包0.005mlX10mlX2.098g=5.0（mg/包）2021/9/1336 2.2.枳实导滞丸中橙皮苷的含量测定枳实导滞丸中橙皮苷的含量测定 本品系由枳实、大黄和黄连等八味药材制成的水丸。中国药典规定按干燥品计算，每1g含枳实以橙皮苷（C28282828H34343434O15151515）计，不得少于20.0mg。供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定（0.5124g），置索氏提取器中，加甲醇90ml，加热回流4 小时，趁热滤过至1

38、00ml 量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液与滤液合并，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2021/9/1337对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品，加甲醇制成每精密称取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml 1ml 含含0.05mg0.05mg的溶液，作为对照品的溶液，作为对照品溶液。溶液。测定法测定法 精密吸取供试品溶液精密吸取供试品溶液5 5、对照品溶液、对照品溶液2 2 与与5 5 ，分别点于同一聚酰胺，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇为展开剂，展开，展距约薄膜上，以甲醇为展开剂，展开，展距约3cm 3cm，取出，

39、晾干，喷以，取出，晾干，喷以 1 1三氯三氯化铝的甲醇溶液，放置化铝的甲醇溶液，放置3 3 小时，在紫外光灯小时，在紫外光灯(365nm)(365nm)下定位。上机进行荧下定位。上机进行荧光扫描，激发波长：光扫描，激发波长：330nm,330nm,线性扫描，测量供试品与对照品荧光强度的积线性扫描，测量供试品与对照品荧光强度的积分值（分值（AR(2 AR(2)=885.7 AR(5)=885.7 AR(5)=979.4 AS=835.6)=979.4 AS=835.6），计算，即得。），计算，即得。聚酰胺TLC分离黄酮类成分效果较好故选之。橙皮苷与AlCl3 3反应显色，在330nm紫外光下发射

40、较强的绿色荧光（波长：500nm）。2021/9/1338回答问题：本法采用的是吸收测定法还是荧光测定法？外标一点法还是外标两点法？透射法还是反射法？直线扫描还是锯齿扫描？光源是什么？求算枳实（橙皮苷）的含量（保留三位有效数字），并判断是否符合药典规定。2021/9/1339(V2-V1)(A-A1)(A2-A1)求算出斑点中橙皮苷的质量求算出斑点中橙皮苷的质量 MMs s=C+V C+V1 1 1 1C C=0.05mg/ml+2ul0.05mg/ml(979.4885.7)(5ul2ul)(835.6885.7)=0.0198ug(1.98X10 mg)求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量求

41、算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量含量（mg/g）=Ms X 稀释倍数取样量=-51.98X10 mgX 2.5 X 10 ul X 1.0 X 10 ul-5555ulX 5 X 10 ul X 0.5124g3=38.62021/9/1340第五节第五节 高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatograph HPLCHigh Performance Liquid Chromatograph HPLC）一、定义一、定义 以高压液体为流动相的液相色谱分析法称为高效以高压液体为流

42、动相的液相色谱分析法称为高效液相色谱法。液相色谱法。二、特点二、特点 高分辨，高灵敏，快速，适用范围宽，自动化程高分辨，高灵敏，快速，适用范围宽，自动化程度高。度高。特别适合中药的定性定量分析，特别适合中药的定性定量分析，中国药典中国药典中中大多大多 数中成药的含量测定采用此法。数中成药的含量测定采用此法。2021/9/1341三、类型三、类型 按原理分类主要有：按原理分类主要有：键合相键合相HPLCHPLC 正相键合相正相键合相HPLC HPLC 少用少用 反相键合相反相键合相HPLC HPLC 最常用十八烷基键合固定相最常用十八烷基键合固定相 (C18(C18或或ODS)ODS)常用甲常用

43、甲醇醇-水、乙腈水、乙腈-水作为流动相水作为流动相 吸附吸附HPLCHPLC 离子交换离子交换HPLCHPLC 凝胶过滤凝胶过滤HPLCHPLC 亲和亲和HPLCHPLC 胶束胶束HPLCHPLC 手性手性HPLCHPLC2021/9/1342四、色谱仪及其工作原理（P图）1.1.高效液相色谱仪高效液相色谱仪 一般由高压输液泵、进样阀、色谱柱、检测器和数据处一般由高压输液泵、进样阀、色谱柱、检测器和数据处理系统或色谱工作站组成。理系统或色谱工作站组成。2.2.工作原理工作原理 系用高压泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，通过进系用高压泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，通过进样阀注入样品溶液，流动

44、相携带样品进入色谱柱进行分离，样阀注入样品溶液，流动相携带样品进入色谱柱进行分离，被分离成分依次进入检测器，转变成相应的电信号，由数被分离成分依次进入检测器，转变成相应的电信号，由数据处理系统或色谱工作站进行处理而得到分析结果。据处理系统或色谱工作站进行处理而得到分析结果。2021/9/1343二、含量测定方法（外标法）内标法 外标法外标法 药物分析大多采用此法 1.系统适应性试验 包括色谱柱的理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中分离度和重复性更具实用意义。系统适应性试验即用各品种项下规定的对照品和条件对色谱系统进行试验，应符合要求。否则可对色谱分离条件作适当的调整。2021/9

45、/1344（1 1）色谱柱的理论板数（）色谱柱的理论板数（n n）考察柱效）考察柱效 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的对照物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同,但应取相同单位）和半高峰宽(WWh/2h/2h/2h/2),按下式计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最 小理论板数，应改变色 谱柱的某些条件（如柱 长、载体性能、色谱柱 充填 的优劣等），使 理论板数达到要求。2021/9/1345 （2 2）分离度（）分离度（R R）考察分离效果考察分离效果 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，在规定

46、的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另有规定，分离度应大于有规定，分离度应大于1.51.5。2021/9/1346 （3 3）重复性）重复性 考察测量的精密度考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样3 35 5次，次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSDRSD）应不大于）应不大于2.02.0。（4 4）拖尾因子（）拖尾因子（T T）考察色谱峰的对称性，保证测量的考察色谱峰的对称性，保

47、证测量的准确度准确度。特别是采。特别是采用峰高法测量时，应检查待测峰的用峰高法测量时，应检查待测峰的T T是否符合规定。除是否符合规定。除另有规定外，另有规定外，T T应在应在0.950.951.051.05之间。之间。式中:W W0.05h0.05h为0.05峰高处的峰宽；d d1 1为峰极大至峰前沿之间的距离。2021/9/1347 2.2.对照品溶液的制备对照品溶液的制备 3.3.供试品溶液的制备供试品溶液的制备 4.4.测定法测定法 将上述两种溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按下式计将上述两种溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按下式计算被测成分的含量。算被测成分的含量。（1 1）求出供试

48、液中被测成分的浓度）求出供试液中被测成分的浓度C C供供 （2 2）求出药品中被测成分的）求出药品中被测成分的含量含量C供C对A对A供C供X稀释倍数含量（W/W）取样量2021/9/13482021/9/13492021/9/13502021/9/1351 三、应用实例三、应用实例 1.1.牛黄解毒片中黄芩的含量测定牛黄解毒片中黄芩的含量测定 本品由牛黄、大黄、黄芩、冰片、石膏等八味中药制成。本品由牛黄、大黄、黄芩、冰片、石膏等八味中药制成。中国药典以中国药典以黄芩苷黄芩苷为指标，采用为指标，采用HPLCHPLC测定其中黄芩的含测定其中黄芩的含量。量。（1 1）色谱条件与系统适应性试验）色谱条

49、件与系统适应性试验 固定相：用十八烷基硅烷键合硅胶；固定相：用十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇流动相：甲醇-水水-磷酸磷酸磷酸磷酸（455545550.20.20.20.2），流速），流速1ml/min1ml/min；检测器：紫外检测器，检测波长为检测器：紫外检测器，检测波长为315nm315nm；理论塔板数按；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于黄芩苷峰计算应不低于30003000。（2 2）对照品溶液制备）对照品溶液制备 精密称取在精密称取在6060减压干燥减压干燥4 4小时的黄芩苷对照品适量，小时的黄芩苷对照品适量，以甲醇溶解配成每以甲醇溶解配成每1ml1ml中含中含31.231.2 g

50、g的对照品溶液。的对照品溶液。2021/9/1352 （3 3）供试品溶液制备）供试品溶液制备 取牛黄解毒片取牛黄解毒片2020片，剥去糖衣，精密称定片，剥去糖衣，精密称定（6.254g6.254g），研细，精密称取），研细，精密称取1.045 g1.045 g，加，加70%70%乙醇乙醇30ml30ml，超声处理，超声处理2020分钟，放冷，滤过，滤液置分钟，放冷，滤过，滤液置50ml50ml量量瓶中，用少量瓶中，用少量70%70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤于同一量瓶中，加于同一量瓶中，加70%70%乙醇至刻度，摇匀，即得。乙醇至刻度，摇匀，即得。（4 4）