微生物实验室培养原创.ppt

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1、关于微生物的实验室培养原创第一张，PPT共三十八页，创作于2022年6月微生物的类群微生物的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌如酵母菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除微生物包含了除植物界植物界和和动物界动物界以外的所有生物以外的所有生物无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻细菌、蓝藻原核细胞原核细胞第二张，PPT共三十八页，创作于2022年6月课题1 微生物的实验室培养第三张，PPT共三十八页，创作于2022年6月一一.培养基：培养基：1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、

2、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养自养异养异养氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含CHONCHON的的有机物有机物是是异异养型微生物的养型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源对 不同需要，配置供生长繁殖的营养基质 营养物质“吃”什么？第四张，PPT共三十八页，创作于2022年6月一一.培养基：培养基：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质2.2.特

3、殊营养：特殊营养：生长因子（维生素、碱基等）生长因子（维生素、碱基等）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨）3.pH3.pH、氧气的需求：、氧气的需求：4.4.种类：种类：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分离分离 鉴定鉴定工业工业 生产生产细菌偏碱，真菌偏酸细菌偏碱，真菌偏酸第五张，PPT共三十八页，创作于2022年6月牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏蛋白胨培养基配方(最广泛最广泛)1000mlH2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g第六张，PPT共三十八页，创作于2022年6月一）内

4、容：1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 2、将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基进行 3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行4、实验操作时应避免 二二.无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染关键技术是什么？清洁和消毒灭菌酒精灯火焰已经灭菌处理的材料和用具与周围的物品接触超净工作台超净工作台第九张，PPT共三十八页，创作于2022年6月耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物物品，品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法

5、较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法（日常）煮沸消毒法（日常）巴氏消毒法（巴氏消毒法（如：牛奶如：牛奶）化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌（玻璃器皿）干热灭菌（玻璃器皿）酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min二二.无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染.二）消毒与灭菌的区别：二）消毒与灭菌的区别：第十张，PPT

6、共三十八页，创作于2022年6月芽孢 在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做休眠体，叫做芽孢芽孢。对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。煮对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。煮沸沸3 3小时才死。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境小时才死。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌形成一个细菌.第十一张，PPT共三十八页，创作于2022年6月判断是否需要消毒或灭菌判断是否需要消毒或灭菌,请选择合适的方法。请选择合适的方法。（

7、1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手思考思考高压蒸汽干热灭菌酒精擦拭第十三张，PPT共三十八页，创作于2022年6月单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定义：定义：三三.菌落菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体第十四张，PPT共三十八页，创作于2022年6月S S型：菌落表面光滑，不被免型：菌落表面光滑

8、，不被免型：菌落表面光滑，不被免型：菌落表面光滑，不被免疫系统识别，有多糖荚膜，使疫系统识别，有多糖荚膜，使疫系统识别，有多糖荚膜，使疫系统识别，有多糖荚膜，使人患肺炎或小鼠得败血症，有人患肺炎或小鼠得败血症，有人患肺炎或小鼠得败血症，有人患肺炎或小鼠得败血症，有毒性毒性毒性毒性。R R型：型：型：型：菌落表面粗糙，被免疫菌落表面粗糙，被免疫菌落表面粗糙，被免疫菌落表面粗糙，被免疫系统识别，没有荚膜，无毒性。系统识别，没有荚膜，无毒性。系统识别，没有荚膜，无毒性。系统识别，没有荚膜，无毒性。肺炎双球菌光滑的粗糙的第十五张，PPT共三十八页，创作于2022年6月1000ml1000ml牛肉膏蛋白

9、胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g四四.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：培养基用量培养基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl琼脂琼脂补水定容补水定容

10、4.4.调调pHpH、分装、封口：、分装、封口：5.5.灭菌：灭菌：6.6.倒平板：倒平板：培养基、培养皿培养基、培养皿分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单个菌落不断搅拌第十六张，PPT共三十八页，创作于2022年6月倒平板倒平板约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基用手摸刚不烫手用手摸刚不烫手第十七张，PPT共三十八页，创作于2022年6月四四.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板

11、划线法：平板划线法：菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）外焰冷却试管口通过火焰冷却第十八张，PPT共三十八页，创作于2022年6月问题讨论问题讨论1 1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？种环吗？为什么？第一步划线前灼烧目的：消灭接种环上可能存在的微生第一步划线前灼烧目的：消灭接种环上可能存在的微生物物每次划线前灼烧目的：

12、杀死上次残留的菌种，保证每次划线前灼烧目的：杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。目逐渐减少，以便得到菌落。结束时灼烧的目的：及时杀死接种环上残留的菌种，避免结束时灼烧的目的：及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。细菌污染环境和感染操作者。第十九张，PPT共三十八页，创作于2022年6月 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

13、划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。个细菌繁殖而来的菌落。第二十张，PPT共三十八页，创作于2022年6月6 6支试管，分别

14、加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移液器移液器第二十一张，PPT共三十八页，创作于2022年6月第二十二张，PPT共三十八页，创作于2022年6月稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释

15、释10105 5倍倍注意：沾有酒精并灼烧第二十三张，PPT共三十八页，创作于2022年6月问题讨论问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。第二十四张，PPT共三十八页，

16、创作于2022年6月平板划线法：平板划线法：四四.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.培养：培养：将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录第二十五张，PPT共三十八页，创作于2022年6月五、课题成果评价五、课题成果评价 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不

17、同（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需

18、要分析原因，他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录第二十六张，PPT共三十八页，创作于2022年6月六六.菌种的保藏：菌种的保藏：1.1.临时保藏：临时保藏：试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020第二十七张，PPT共三十八页，创作于2022年6月3、关于牛肉膏蛋白胨培养基制备错误的是A、操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B、将称好的牛肉膏连同

19、称量纸一同放入烧杯C、待培养基冷却50至左右时进行倒平板D、待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置 4、无菌技术包括以下几方面的叙述，其中错误的是A、对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌C、未避免周围环境微生物的污染，实验室操作应在酒精灯火焰附近进行D、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触答案：A答案：A第二十八张，PPT共三十八页，创作于2022年6月5 5下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.

20、培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B是错是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确

21、的，因为与发酵有关的是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。菌种也杀死。答案：答案：B第二十九张，PPT共三十八页，创作于2022年6月第三十一张，PPT共三十八页，创作于2022年6月包器材第三十二张，PPT共三十八页，创作于2022年6月包器材第三十三张，PPT共三十八页，创作于2022年6月http:/ 微生物培养 教学视频http:/ 微生物介绍http:/ 微生物科学片http:/

22、 第三十四张，PPT共三十八页，创作于2022年6月大肠杆菌大肠杆菌：是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。分布：主要生活在大肠内。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，生命活动：其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素b和k，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。第三十五张，PPT共三十八页，创作于2022年6月1、分类：属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。2、代谢类型

23、：异养厌氧型 3、与人的关系：在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。第三十六张，PPT共三十八页，创作于2022年6月4、菌落：培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。5、应用：作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视。最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的6、地位：A 生活在大肠内，属于消费者，B 生活在体外则属于分解者。（很少考查到）特别提醒：关于大肠杆菌超标的食品卫生问题应该引起高考同学们的重视。第三十七张，PPT共三十八页，创作于2022年6月感感谢谢大大家家观观看看第三十八张，PPT共三十八页，创作于2022年6月