丹参多酚酸盐抗氧化资料电子版-丹参多酚酸盐.doc

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1、丹参多酚酸盐英文名：Depsides Salts from Salvia miltiorrhiza in Lyophilizied Powder for Injection化学分子式：C36H30O16 分子量：718.59 常以金属镁盐形式存在 国家顶级药物研究机构中科院药研所历时 科技部国家“十五”重大科技专项 13年研发 国家863计划项目 “知识创新工程重大项目”全球第一个天然安全的多功效强力抗氧化冻干粉针剂是已知的最强抗氧化应激药物，清除自由基活性是VitE的1000倍，EGb761的100倍无毒消除大量自由基消除大量自由基消除大量自由基护脑 强心国家四部委颁发的重点新产品证书 拥有

2、自主知识产权中国专利和美国专利授权2007年上海市科技发明一等奖 “现代生物与新药产业发展基金”第一个用于危重症氧化应激抢救 高效保护重要脏器免受损伤化合物对脑梗塞中风的受损面积能降低80，对心肌梗塞的防治率达90 是治疗缺血缺氧性损伤的理想药物上海绿谷制药有限公司一、 概述（一） 丹参的美誉为什么来自丹参的活性单体能安全有效治疗多种疾病呢？“天蕴甘露，地育丹参。穿金石，化瘀浊，功同四物。疗诸疾。救苍生，效若桴鼓。”丹参2000多年人体疾病治疗史总结意义 “天蕴甘露，地育丹参。穿金石，化瘀浊，功同四物。疗诸疾。救苍生，效若桴鼓。”强效，可用于急症救命丹参属唇形科鼠尾草，也是欧洲十分古老的药用物

3、，学名Salvia，源于拉丁文，意为“医治拯救”，其意即是说鼠尾草可解救世人免于疾病之苦;强效，可用于急症救命2000年前“本草纲目”里就被列为上品无毒, 疗效确切，既可用于急症抢救疗效，也可长期服用有强身防病防老的保健功能；“一味丹参，功同四物”丹参一味药，可以独自成方，相当于“地黄、当归、白芍、川芎” 四味药的功效丹参的多效和强效;“一味丹参，气死名医”；强效和多效；丹参本身也作为被国家食品药品监督管理局批准列入“可用于保健食品的物品名单” (卫法监发2002151号)；安全，可靠；植物鼠尾草在欧洲作为香辛料蔬菜,保健食品而受人欢迎；安全，可靠；“对现代人而言，丹参更胜人参”；“有效治疗现

4、代生活方式病”东方“维他命”之称；有营养保健成分；是东方中药使用量第一名的单味中草药；医患认可；第一个向美国FDA申请植物新药的中草药。世界瞩目；丹参大全近百位专家选中丹参作为典范探索中药现代化十多个春秋的辛勤耕耘，现代医学对丹参几十年轰轰烈烈研究的整理总结（245万字）2008.4丹参极其制剂多靶点改善微循环和保护靶器官损伤作用已经得到国际药理界的认可；“大地赐予人类最好的礼物”丹参100%水溶性有效成分制剂（丹酚酸B80%）丹参多酚酸盐是中药现代化的典范，20多年三代多学科医药工作者心血结晶献给世界最好的礼物。世界上植物药方兴未艾，它是全球“绿色”浪潮的组成部分。从植物丹参里提取的有效单体

5、丹参多酚酸（丹酚酸）意义非凡，远超过吗啡（法国-鸦片）、奎宁（西班牙-金鸡纳树皮）、青蒿素（中国-青蒿）等植物有效单体因为它来自“疗诸疾。救苍生，效若桴鼓”的丹参。（二）植物单体现代化中药，分子结构为含多个酚羟基的苯酚和羧酸，所以叫多酚酸（三）丹参多酚酸盐是中药现代化的示范性产品，获得多种荣誉，是将代表中药走向世界，为更多人的健康服务的一个国际标准化的中药。 二、产品说明【成 分】丹参最有效成分浓缩精华丹参多酚酸盐：含丹参乙酸 (丹酚酸B,Salvianolic acid B，SalB )镁（Magnesium Lithospermate B，MLB）80%，其余20%为丹参素钾、迷迭香酸钠、

6、紫草酸二钾、紫草酸镁、丹参乙酸二钾、丹酚酸G镁和异丹参乙酸二钾，100%为丹参水溶性有效成分。【分子结构与构效关系】丹参多酚酸类化合物都具有苯酚和羧酸结构，其水溶性较强，目前已从丹参中发现酚酸类化合物24个，其中最早发现的是丹参素（3，4一二羟苯乳酸），之后发现了一系列酚酸类化合物，分别命名为丹酚酸A、B、C、D、E、F、G、H、I、J等。丹参中酚酸类化合物的结构主要为丹参素与一个或多个咖啡酸的缩合物，或丹参素的衍生物，或迷迭香酸衍生物。1.清除自由基：由于丹酚酸具有大量的酚羟基和很大的共扼兀键，自身可作为还原性物质接受氧化性物质(如自由基)的攻击，而对抗其氧化作用;或作为电子转移媒介，改变自

7、由基的氧化反应途径而保护机体免受氧化损伤，发挥抗氧化作用。丹酚酸属于预防型和断链型抗氧化剂,并可有效清除DPPH和羟自由基。丹酚酸B又称为丹参酸乙或丹参乙酸(Salianic acid B)或紫草酸B(Lithospermic acid B)，是三分子丹参素和一分子咖啡酸的缩合物，是一种缩酚酸类多羟基化合物，拥有最多的酚羟基（每分子7个），是丹参含量最多，活性最强的成分，已成为丹参类制剂的质控标准。淡黄色无定形粉末，分子式C36H30O16分子量：718.59 常以金属镁盐形式存在。2.与蛋白质结合发挥药效：如与蛋白质结合能力强的多酚往往也具有较强的金属配位能力和抗氧化性，而多酚对自由基的清除

8、过程也与其对铁、铜离子的配位密切相关。因此,植物多酚的生物活性也是其多种化学性质共同作用的结果。植物多酚通过疏水键和多点氢键与蛋白质发生反应是其最重要的化学特征, 此方面的研究工作开展得最多、最深人,这个反应广泛地存在于自然界, 而这个反应更重要的意义在于它是类广泛利用多酚的基础。对于多酚与蛋白质反应的机制, 现在普遍接受的是“ 手套一手” 反应模式, 即植物多酚以疏水键和多点氢键与蛋白质相结合的反应理论。反应历程主要是植物多酚分子先通过疏水键向蛋白质分子表面靠近, 多酚分子进人疏水袋, 然后与蛋白质分子发生多点氢键结合。植物多酚与其它大子, 如生物碱、多糖、核酸、细胞膜等的分子复合反应也与此

9、反应机制相似。3.植物多酚与金属离子的配位:植物多酚与金属离子的反应是其具有特殊化学性能的一个重要方面, 多酚中的多个邻位酚经基可以作为一种多基配体与金属离子发生配位反应, 形成稳定的五元环鳌合物。由于植物多酚配位基团多、配位能力强、配合物稳定, 所以大部分金属离子与多酚配位结合后都形成沉淀。尤其是在碱性条件下, 多酚与金属离子易形成多核配合物, 例如植物多酚与Cu 2+、Zn 2+等金属离子的配位结合, 可以使含这些离子的金属酶活性受到抑制。这可能也是多酚具有抑制酶活性、抗病毒、抗微生物（杀灭和抑制内毒素活性：有效抑制变形链球菌、豁性放线菌和血链球菌的生长、产酸及变形链球菌产生水不溶性葡聚糖

10、, 从而达到了抗龋的作用）等生物活性的原因之一。金属铁、铜等离子是许多自由基产生过程的催化剂, 尤其是铁离子是OH 等自由基产生的媒介物。丹酚酸的多酚分子中的邻苯二酚结构可鳌合铁离子, 形成无活性的铁复合物, 从而影响氧化过程, 这也是丹酚酸具有抗氧化性的又一原因。After administration of MLB at an intravenous dose of 4 mg/kg or an oral dose of 100 mg/kg, the total biliary recovery of the four metabolites after 30 h reached 95.5

11、+/- 2.4% (with approximately 90% recovered within 2 h) or 5.5 +/- 0.7%, respectively. The rapid and high biliary excretion levels of these metabolites suggested that they could undergo enterohepatic circulation in rats and that they might thereby be largely responsible for the pharmacological effect

12、s of MLB（3）. M1 ( 32 O-monomet hyl2lit hospermic acid B)和M2 (3, 3O-dimethyl lithospermmic acid B) 为丹参乙酸镁的两种主要代谢产物，亦具有强力抗氧化的作用（3）。其在大鼠体内的药代动力学特征如下（4）：Tian J等（5）研究发现丹酚酸B降解产物(2E)-2-6-(E)-2-carboxylvinyl-2,3-dihydroxyphenyl-3-(3,4-Dihydr-oxyphenyl) propenoic acid，即使在脑梗塞后6小时使用，也能很好保护脑组织，梗塞后30分钟一次性大剂量使用（冲

13、剂疗法），25mg/kg，保护作用可以延长到7天，明显增加脑内ATP含量，改善线粒体能量代谢和呼吸链复合体活性，减少MDA，增加SOD和GSH-Px。）郭永学（6）用HPLC制备了丹酚酸B的降解产物并进行了结构鉴定，得出了丹酚酸B 的降解机理。1H（13C)-NMR鉴定结果表明，丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、紫草酸和丹酚酸E是丹酚酸B的主要降解产物。丹酚酸B主要降解途径是酯水解和苯并吠喃开环，其中丹参素、紫草酸是水解产物，原儿茶醛是氧化产物，丹酚酸E是苯并吠喃开环产物。参考文献（1）Bioavailability of salvianolic acid B in conscious and fre

14、ely moving rats.Int J Pharm. 2006 326(1-2):25-31.（2）丹参酚酸盐在健康志愿者的药代动力学和药效学研究 中国临床药理学与治疗学 2004，9（11）：1209-1212（3）Zhang Y, Akao T , Na kamura N , et al . Megnesium lithospermate B is excreted rapidly into rat bile mostly as methylated metabolites, which are potent antioxidants J . Drug Metab Disp os ,2

15、004 , 32 (7) :7522757（4）丹参乙酸镁活性代谢产物在大鼠体内的药代动力学特征 西安交通大学学报( 医学版)，2007，28（4）：395-398（5）SMND-309, a novel derivate of salvianolic acid B, ameliorates cerebral infarction in rats: characterization and role.2009，Brain Res. 2009 Mar 31;1263:114-21.（6）丹酚酸B的降解机制及纯化工艺研究 大连理工学院 生物化工 2007年博士学位论文【药理作用】一、丹参多酚酸抗氧

16、化应激二、丹参多酚酸抗炎三、丹参多酚酸抗血栓四、丹参多酚酸抗肿瘤五、丹参多酚酸微循环改善和促组织修复丹酚酸文献检索同义词： 丹参水溶性成分、丹参水溶性提取物、丹参活性成分；丹参酸、丹参酸镁、丹参酸乙、丹参乙酸、丹参乙酸镁、丹参酚酸、紫草酸、丹参多酚酸、丹参多酚酸镁、丹参多酚酸盐、丹酚酸、多酚酸、总丹酚酸、丹酚酸B、丹酚酸B-镁、丹参活性单体； 咖啡酰缩酚酸、缩酚酸、咖啡酸、咖啡酰、咖啡酸衍生物、鼠尾草、邻酚羟基、新木脂素骨架、丹参缩酚酸B SalB、Sa-B、MLB、Lsb、Sla、Slm、LDL氧化导致动脉粥样硬化为特点的慢性炎症ROS和OX-LDL使血管受损；粘附分子增加内皮细胞氧化使粘附

17、分子增加，促使白细胞粘附：缺血再灌注机制之一内皮素增加异化血栓形成三、抗氧化剂1. 丹参多酚酸作为抗氧化剂的研究过程（目前已知的抗氧化作用最强的天然化合物）1.1 1990年，危一松的研究（丹参水溶性提取物对大鼠心、肝脑、睾丸脂质过氧化的抑制作用 赣南医学学院报1990，10（4）：211-212）发现丹参水提物具有很强的抗氧化活性，清除具有细胞毒性的氧自由基可能是丹参的重要药理机制之一。丹参水溶性活性成分有可能作为抗氧化剂应用于预防和治疗与脂过氧化过多的有关疾病。氧自由基引起过氧化有一特点, 即氧化为链锁反应, 包括启动和蔓延两个阶段。PUFA分子结构双键上的氢原子易受氧自由基的攻击, 夺取

18、氢原子而形成脂自由基(R ), R 自发地与氧起反应而形成脂过氧基(ROO) 吸引一个氢原子而使另一分子PUFA过氧化, 从而形成一种稳定的脂氢过氧化物(ROOH)及一分子脂自由基(R )。如此不断循环, 使许多分子过氧化。这种链锁反应很难自动终止, 除非加入氧自由基捕捉剂方可终止反应。脂氢过氧化物经过过氧化物酶分解, 生成丙二醛(MDA)及戊烷等。细胞膜、线粒体、微粒体均富含PUFA, 在Fe+2 -半胱氨酸作用下, 发生明显的脂质过氧化。ESM(丹参水提物)可抑制Fe+2-半胱氨酸引起的脂质过氧化, 保护细胞膜、线粒体、微粒免受自由基的攻击。其抗氧化机理有可能包括抑制自由基链锁反应的启动和

19、终止蔓延两个环节。本实验结果表明, 丹参水提物，具有很强的抗氧化活性, 可显著抑制Fe+2-半胱氨酸引起的心、肝、脑、翠丸的组织匀浆、线粒体和微粒体的脂质过氧化。提示有可能作为抗氧化剂应用于预防和治疗与脂过氧化过多的有关疾病。1.2 1991年，国家开始立项研究丹参水溶性活性单体-丹酚酸抗脂质过氧化的构效关系（国家自然科学基金委员会生命科学部资助科学基金项目：丹酚酸类似物的合成及其抗脂质过氧化的构效关系：黎连娘）1.3 1993，加拿大研究丹酚酸B减少心肌缺血再灌注损伤高达72%，与其抗氧化清除自由基作用有关；Life Sci. 1993;52(22):PL239-44. Demonstrat

20、ion of the myocardial salvage effect of lithospermic acid B isolated from the aqueous extract of Salvia miltiorrhiza.Department of Clinical Biochemistry, University of Toronto, Ont., Canada. Lithospermic acid B has been isolated to 95% purity by high performance liquid chromatography from the aqueou

21、s extract of the roots of Salvia miltiorrhiza. When infused at 5.5 mumoles/kg into the post-ischemic rabbit heart, it reduced by 62 +/- 10% (n = 8) the myocardial damage found in the saline control in a rabbit ischemia-reperfusion model.1.4 1995年中国医学科学院药物研究所四位科学家联合撰文宣告“中药丹参的新水溶性活性成份丹酚酸类化合物”：“18个成分，均

22、具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基作用,其中含量最高的2个成分丹酚酸A和B活性最强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，丹酚酸A和B抗血小板活性比从丹参中分离的已知成分原儿茶醛和丹参素强。这两个化合物对肾上腺素引起的小鼠肠系膜微循环障碍有明显改善作用。上述结果阐明了丹酚酸类化合物是丹参水煎剂和丹参注射剂防治心脑血管和肝脏疾病的有效成分并从分子水平探讨了其作用机理。本研究对丹参及其同属植物的活性成分提出了新的见解, 对中药丹参及其代用品的质量评估和各种制剂的质量控制提出了科学依据, 在丹参的化学与药理研究中是一个新的突破。在天然产物化学领域中增添了既有咖啡酰缩酚酸结构又有新木脂素骨架的

23、一类新水溶性成分。”1.4 1997年，我国神经药理学十年研究进展 张均田 把丹参多酚酸归类为自由基清除剂，可捕捉OH和O2自由基，还有抑制黄嘌呤氧化酶活性的作用，有明显的抗脂质过氧化的作用。并指出了构效关系构效关系研究表明, 抗氧化作用与结构中酚羟基数目,共轭体系长短有关。 中国药理学通报, 1997，13（2）97-103构效关系研究表明, 抗氧化作用与结构中酚羟基数目,共轭体系长短有关。酚羟基数多, 共轭体系长, 则抗氧化作用强。采用心脑缺血再灌注损伤造成小鼠学习记忆障碍和心室纤颤, 丹酚酸A 可改善记忆和减少心室纤颤发生率, 经测定组织中脂质过氧化产物MDA 含量降低, 表明丹酚酸改善

24、心脑缺血再灌注损伤的主要机制可能与抗氧化作用有关。白内障的形成与组织内的代谢异常, 氧化作用增强有着密切的关系, 丹酚酸A 及其乙酰化物0105% 011% 溶液滴眼, 每天2 次, 对半乳糖性白内障和氧化应激白内障均有明显抑制作用, 与现有抗白内障药物相比, 其优点在于除具抗氧化活性, 还具抑制醛糖还原酶的作用。1.5 2000，杜冠华.张均田 丹参水溶性有效成分-丹酚酸的研究进展 基础医学与临床2000(5)：丹参是我国传统医学中常用药物之一有悠久的临床应用历史。近几十年来采用现代医学方法结合化学分子生物学和细胞生物学等多学科的技术手段，对丹参进行了较系统的研究取得大量新的认识和实验结果，

25、并开发出一系列疗效良好的临床应用药物。丹参水溶性有效成分特别是丹酚酸类化合物受到医药学家的极大重视对其中的各个组分进行了深入的研究。本文结合本实验室长期研究丹酚酸的结果和有关文献对丹参水溶性有效成分丹酚酸的研究进展作简单的介绍。丹酚酸类化合物虽然都有较强的抗氧化作用但各种丹酚酸抗氧化作用强度不同 在各种过氧化反应实验中包括对自由基清除作用的研究中以丹酚酸A B 作用最强而其它丹酚酸的作用则较A B 弱以抑制肝脏微粒体脂质过氧化作用为例几种主要丹酚酸的作用强度顺序为Sal ASal BSal AA RosSal M。再次强调其强大持久的抗氧化效能，是目前已知的抗氧化作用最强的天然产物之一。丹参水

26、溶性成分在丹参的作用中占重要地位其最突出的作用特点是具有很强的清除自由基和抗氧化作用根据近年研究结果自由基参与机体多种疾病包括衰老的发生和发展过程 清除自由基提高机体抗氧化能力是防治多种疾病的重要途径之一丹酚酸可以通过清除自由减少自由基对机体的损伤而产生保护作用同时通过广泛的药理作用调节和改善机体的机能状态促进受损机体组织的修复和复原达到预防和治疗疾病的目的因此可以认为丹酚酸有可能成为作用强疗效好具有明显特点的药物丹参中含有多种有效成分这些有效成分又有多方面的药理作用1.6 关于丹酚酸类抗氧化剂的作用强度：1995年前多丹酚酸A研究比较多(因为丹酚酸A是我国科学家黎年娘1984年发现并分离提出

27、的，而丹酚酸B是日本学者1988年分离提纯的)，认为丹酚酸A的作用最强，后来经过构效关系的研究和论证，2000年时的综述（如前），是两者相近；2000年以后新的在线标识技术和海通量筛选技术都确定丹酚酸B的作用最强（如前表），这也符合构效关系的研究结果构效关系研究表明, 抗氧化作用与结构中酚羟基数目,共轭体系长短有关，而丹酚酸B酚羟基数和共轭体系都是最强的。2. 丹酚酸抗氧化作用特点1995（丹酚酸药理作用及作用机制 杜冠华 博士研究生毕业论文 中国医学科学院药物研究所首届研究生优秀论文评比第二名）2.1. 对不同氧化体系产生的脂质过氧化反应，丹酚酸均有很强的抑制作用，与已知的抗氧化剂维生素E相

28、比，作用强而广泛。在某些氧化反应中达相似抗氧化效果时，丹酚酸的浓度比维生素E要低近1000倍；2.2. 丹酚酸对羟自由基的清除作用比甘露醇强，产生相似作用时丹酚酸所需浓度较甘露醇低约1000倍；2.3.丹酚酸清除羟自由基的作用强度可持续5小时无明显降低；2.4.丹酚酸对超氧阴离子有很强的清除作用，其清除超氧阴离子的量可超过自身浓度的数倍至20余倍；2.5.丹酚酸溶液在室温条件下易于发生氧化作用，但将丹酚酸水溶液室温放置3一4周，仍有一定的抗氧化作用，表明丹酚酸的抗氧化活性是比较稳定的.3.丹参多酚酸抗氧化应激见奇效研究表明：丹参多酚酸在急性心脑血管事件中，清除自由基，稳定生物膜（3-8），保护

29、细胞器（9,13,23,33），防治心脑梗塞（预适应和缺血再灌注心脑细胞保护（10,11,13,16，17，19），减轻脑水肿（3-5,7-9），减少梗塞和缺血面积达70%的独特疗效（5，8，9,45，）。台湾研究其針對腦梗塞中風的受損面積能降低80，對心肌梗塞的防治率達90，更胜西药（37,24）。如能在基层医院第一时间快速注射，将保护70%-80%（8，37）的心脑细胞免遭死亡，成倍延长到达大医院后心脑梗塞等缺血组织的抢救时间（如脑梗塞从原来的溶栓抢救时间窗3-6小时，迅速给药后延长到6-12小时）并能防治缺血再灌注损伤。2000以来，对丹酚酸的研究已经成为世界热点。我国神经药理研究专家张

30、均田和杜冠华综述报告“丹参水溶性有效成分-丹酚酸的研究进展”不仅再次强调其强大持久的抗氧化效能，还结论其为理想的抗脑缺血药物（3，5，7，9）。而作为几代科学工作者寻找多年的理想的天然安全的多功能抗氧化剂丹参多酚酸，可以用于许多急性氧化应激抢救多种危重症中保护重要脏器：如心肺复苏、各类休克、中毒、严重创伤、烧伤等，改善组织缺血，稳定生物膜，保护受损血管内皮（11-15，21，24，），防治微循环、多器官功能的迅速衰竭等；对慢性氧化应激疾病，目前研究最多的有动脉硬化（8，13，28，41）、神经退行性病变（9-11，33）、糖尿病血管并发症（36）、肝纤维化（12）、系膜增殖性肾病（36）、癌和

31、癌前病变（33，35，53）等也有确切疗效。丹參萃取物對缺氧發生後之 丹參萃取物對預防腦中風發生後之延長生存時間比較圖 大腦損傷保護圖 治疗：各組試驗鼠大腦推持 预防：各組試驗鼠大腦破壞體積受損體積及比例分析（0.01） 及比例分析（0.01）組別 實驗隻數 大腦維持受損體積比例 大腦受損比例（與控制組比例） 組別 實驗隻數 大腦受損體積比例 大腦受損比例（與控制組比例） 控制組 617.631.59 100%控制組 617.071.37 100%丹參萃取物高劑量組 67.641.76 43.34%丹參萃取物高劑量組 63.922.04 22.96%丹參萃取物低劑量組 67.122.37 40

32、.38%丹參萃取物低劑量組 68.042.55 47.12%吴俊芳; 王洁; 张均田; 总丹酚酸对小鼠脑缺氧的保护作用 中国临床药理学与治疗学, 1999，（4）：261-2634丹酚酸B的体内抗氧化活性丹酚酸B对氧化应激的效应已在多种动物和细胞模型中被广泛研究。在对鼠、兔脑部和心脏的缺血再灌注模型中，丹酚酸B可提高抗氧化能力，降低丙二醛水平，减少脑部和心脏的损伤。在由链尿霉素、先锋霉素引起小鼠肾损伤和衰竭研究中，丹酚酸B可还原超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性，降低羟自由基水平，缓解病理状态。丹酚酸B可以抑制由黄嘌呤过氧化物酶产生的氧自由基引起的心室肌细胞和大动脉内皮细胞坏死，抑制超氧阴离子对

33、细胞色素C的还原。丹酚酸B可抑制由血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子等炎性因子引发的内皮细胞膜高通透性和膜损伤。丹酚酸B可以减少由顺铂引起的上皮细胞乳酸脱氢酶渗漏和丙二醛形成，还可抑制由高糖和过氧化氢诱导的肾小球细胞胞内活性氧产生。丹酚酸B可以抑制NADPH，维生素C和铁-半胱氨酸诱导的小鼠脑、肝肾匀浆，微粒体和肝细胞的脂质过氧化，对CCl4、D-氨基半乳糖和脂多糖引起的肝细胞坏死表现出肝保护作用。5. 丹酚酸B的体外抗氧化活性研究结果表明丹酚酸B具有清除DPPH和ABTS自由基，清除超氧阴离子和羟自由基，螯合亚铁离子等作用，其活性强于维生素C和丹参素。此外，体外细胞实验显示，丹酚酸B可以提高胞内

34、SOD、CAT和GPX活性，提高细胞清除活性氧的能力，对H202引起的内皮细胞损伤有良好的保护效应。丹酚酸B显著抑制了H202诱导信号通路上游事件PKCa的激活，抑制了MAPK通路JNK和p38的活化，以及核转录因子NF-iB65活化，阻断了黏附分子ICAM-1表达和分泌。过氧化亚硝基（ONOO）是由机体内一氧化氮（NO）与超氧阴离子()合成的一类氮自由基，可引发机体的损伤。清除过氧化亚硝基，抑制其对蛋白质的硝基化修饰是目前国际研究的热点之一。过氧化亚硝基（ONOO）作为一类重要的氮自由基，是由机体炎症发生部位的一氧化氮（NO）与超氧阴离子（）合成，可引发机体蛋白质损伤、脂质过氧化、DNA断裂

35、。长期处于这种硝化应激状态下，将引起一系列人类疾病的发生，如动脉粥样硬化、肿瘤、阿尔茨海默病、帕金森等疾病。咖啡酸及其衍生物是水溶性抗氧化剂，具有明显清除ONOO-的活性，具有明显清除ONOO的活性，清除能力由高到低依次为：丹酚酸B（27.550.13M）迷迭香酸（37.680.22M）咖啡酸（39.600.41M）阿魏酸（45.050.57M）丹参素钠（51.511.02M）trolox（85.441.68M）。ONOO-诱发机体内蛋白的氧化/硝化修饰而活性降低或失活，而天然酚类化合物是一类良好的ONOO清除剂。6丹参多酚酸药理作用表现6.1. 保护心血管:范英昌等的实验证明SalB可以有效

36、减少实验性心肌梗死大鼠的梗死灶范围，增加梗死灶内成纤维细胞和毛细血管数，SalB减少心肌梗死灶的机制可能是提高细胞内SOD的含量，减少自由基对心肌细胞的毒害作用，有效地促进梗死灶内纤维细胞的增生，从而加速心脏的修复过程72。SalB可以降低急性心肌缺血模型大鼠的左室舒张末期压，升高左室内压最大上升及下降速率，大剂量应用对左室收缩和舒张功能均有显著提高作用，主要作用靶点为细胞骨架结构类、细胞防御与炎性反应等相关基因73。在家兔心肌缺氧复氧损伤模型，SalB具有负性频率、增加冠脉流量和降低冠脉流出液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平的作用，可减轻心肌细胞损伤74。SalB具有减轻H2O2

37、所致内皮细胞的氧化性损伤，降低血管内皮细胞表面细胞勃附分子表达和抑制中性粒细胞勃附的作用75。6.2. 抗肝、肾纤维化的作用：肝星状细胞(HSC)的活化和增殖是肝纤维化形成和发展的关键因素。TGF一1是促肝纤维化主要的细胞因子之一，HSC获得增殖能力并活化为肌成纤维细胞样细胞，血小板生长因子 (PDGF)是最强的刺激HSC增殖因子。活化的HSC增殖加速并合成分泌大量的细胞外基质(ECM)沉积于肝脏形成肝纤维化。 SalB可抑制TGF一印及其受体蛋白的表达【76，还可以通过抑制Hsc表面PDGF受体的表达而抑制PDGF或MDA两种病理性因素导致的Hsc增殖771，SalB在抑制Hsc细胞增殖的同

38、时也降低了细胞内氧化水平【78。王清兰等研究发现SalB能明显减轻HgC12，长期口服诱导肾间质纤维化模型大鼠肾小管炎症坏死与肾间质胶原沉积，减轻肾组织轻脯氨酸(HyP)含量，降低异常增高的血清尿素氮与肌醉水平，升高谷肤甘肚 (GsH)含量，并降低MDA含量，其机制为增强机体抗氧化损伤能力与减轻脂质过氧化损伤79。6.3.丹酚酸B治疗缺血性脑病的研究进展：SalB容易通过血脑屏障，并能选择性扩张脑血管而不影响外周血管，改善缺血区血流量而无窃血。6.3.1. 脑缺血性疾病自由基生成：病理情况下如脑缺血时，细胞内NO浓度显著升高，达到能与SOD竞争超氧化物的水平，因为NO含有一个未配对电子，有超氧

39、阴离子存在时，迅速与其反应生成过氧亚硝酸根离子(ONOO)后者质子化后进一步生成过氧亚硝酸(ONOOH)，并在酸性环境中分解为OH和NO2。其中，硝基过氧化物的直接氧化作用的毒性远大于OH的毒性，因为硝基过氧化物不仅是一种很强的氧化剂，更重要的是它对反应具有很高的选择性，如过氧化亚硝基能够直接氧化脂质、DNA以及蛋白质的琉基、锌/硫中心等，上述反应的速率大约是过氧化亚硝基分解产生OH速率的1000倍。由此可见，硝基过氧化物可能是NO途径中产生的一种非常重要的OFR。缺血缺氧使浸润于脑血管上的白细胞激活，白细胞与血小板相互作用，代谢产生AA，进一步代谢后产生OFR。此外，在缺血期，细胞内堆积的乳

40、酸能够解离蛋白结合的FZe+，促使更多的OH产生。6.3.2.脑缺血时丹酚酸的作用丹酚酸具有很强的抗脑缺血作用，可缩小脑梗塞面积和脑水在同等剂量下，作用强于viEt。丹酚酸在原代培养的神经细胞上具有保护脑细胞免受低糖低过氧化氢，谷氨酸所致神经细胞损伤的作用。丹酚酸具有明显的抗氧化作用，在体外能抗脂质过氧化，清除氧阴离子及轻自由基，在体内能抑制脑缺血后高氧化水平，减抗氧化物质的损失。丹酚酸能对抗NO的毒性抑制脑缺血后迟发性NO的升高，抑诱导性NOS的活性。丹酚酸可抑制体内血栓形成，选择性抑制TXA2含量，从而提PGZIT/XAZ比值，改善缺血后体内异常的凝血机制。丹酚酸具有对抗大鼠脑突触体谷氨酸

41、释放的作用，尤其是钙非赖性过程，对减轻缺血性损伤有重要意义。对脑能量代谢的影响:观察SalB对脑缺血小鼠脑能量代谢变化的影响，发现在脑缺血早期，SalB可有通过降低脑缺血损伤时线粒体膜电位的升高、脑组织水肿，增加磷酸肌酸含量、脑能荷值、Na+-K+ATPase、Ca2+ATPase的活性，从而稳定线粒体膜电位，维持线粒体正常的功能和结构，保证脑组织所需的能量代谢，缓解脑水肿，保护神经细胞80。SalB对体外培养的大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的实验表明，SalB通过维持细胞Ca2+稳态，稳定线粒体膜电位及降低细胞凋亡率，起到保护皮层神经元的作用。丹酚酸B脑缺血再灌注损伤脑水肿的影响: 脑水肿是脑缺

42、血再灌注损伤的重要病理过程，分为细胞毒性、血管源性和间质性3类，均表现为脑组织水分增加、体积增大、颅内压升高，是威胁中风患者生命的严重并发症之一。缺血性脑水肿为混合性脑水肿，缺血早期为细胞毒性水肿，其机制与神经元或/和内皮细胞的。缺血后数分钟，缺血区毛细血管内皮细胞及其周围的胶质细胞即开始肿胀，持续肿胀引起血脑屏障破坏、毛细血管通透性增加。此时即由细胞毒性水肿过渡到血管源性水肿。缺血早期，钙超载、Na+-KATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性下降、兴奋性氨基酸的神经毒作用均可使细胞内渗透压增高，水分进入细胞内，导致细胞内水肿。随后，促炎症细胞因子、活性氧、AA、MMP等的过量产生损伤EC

43、，造成BBB开放，此时即由细胞毒性水肿过渡到血管源性水肿。脑组织内水分持续增多，聚集于脑间质内或聚集于神经细胞内，引起脑组织含水量增加，故脑含水量及脑指数的测定可反映脑水肿的程度。本实验结果显示，脑缺血再灌注不同时间点，脑含水量与脑指数均显著上升(PO.O1)。脑组织HE染色也可见随着再灌注时间的延长，脑皮质区神经元水肿及坏死加重，间质水肿，血管周间隙显著增大。SalB组和Nim组脑含水量与脑指数下降，IR12h尤为明显(PO.Ol)，形态学表现为神经元水肿和血管水肿明显减轻，神经元坏死减少，表明应用SalB和Nim能有效缓解缺血再灌后的脑水肿。对脑缺血再灌注小鼠脑组织细胞因子含量的影响：现代

44、研究认为，炎症反应是脑缺血再灌注损伤的重要的病理过程。过度的炎症反应不仅影响局部的血液供应，而且可以直接破坏组织结构，是造成缺血脑组织损伤的主要原因之一。在脑缺血后一些具有免疫活性的细胞如内皮细胞、多形核白细胞、巨噬细胞、小胶质细胞均能产生细胞因子和粘附分子，而这些物质反过来又能激活上述细胞，通过正反馈作用加强炎性反应，引起血脑屏障通透性增加，导致脑水肿形成。SalB能够减轻神经细胞的水肿、坏死，可能与减少TXB2、IL-l、TNF-含量的释放，以及粘附分子ICAM-1、P-选择素的表达，从而维持了TXB2/6-keto-PGF1平衡，抑制了再灌后的炎症反应有关。SalB能够减轻脑缺血再灌注损

45、伤，其作用机制可能为:通过抑制炎性细胞因子的活化和白细胞与内皮细胞的粘附，从而维持血脑屏障的完整性，达到缓解脑水肿的作用。通过维持血管活性物质稳态，起到改善微循环的作用。对缺血神经元及内皮细胞功能的影响:SalB能改善缺血再灌注损伤大鼠的神经功能，减少抗氧化酶的消耗，促进自由基的清除，并减轻脂质过氧化反应82;增加缺血再灌注后bcl-2表达，同时显著降低bax表达，从而调节它们抗凋亡和促凋亡作用83。复制脑缺血再灌注模型，观察SalB对脑缺血再灌注30min、 60min内皮细胞分泌功能、脑水肿等变化的影响，发现SalB在急性脑缺血早期可以起到改善内皮细胞功能，缓解脑水肿的作用，初步表明维持缺

46、血区微血管结构和功能完整性对于干预脑缺血病理损伤进程、促进神经功能恢复的重要意义。对脑血管内皮生长因子的影响：血管内皮生长因子(VEGF)是内皮细胞特异性的有丝分裂原，具有促进内皮细胞增殖，提高血管通透性等生物学特性。脑缺血后，低氧可激活VEGF诱导大量新生血管形成，减少神经元的凋亡和死亡。提高 VEGFmRNA表达，促进新生血管形成，并能较好地抑制VEGF诱导血管通透性增加的作用85。综上所述，SalB在多方面表现出药理活性，尤其是它的抗氧化作用在心脑血管疾病的防治中具有重要意义。以上研究通过不同机制证明SalB对脑缺血再灌注有保护作用，对于防治脑缺血和老年痴呆等急慢性神经退行性疾病具有良好的前景。四、氧化应激知识 自由基概念 自由基（Free Radical）是指独立带有不配对价电子（即奇数电子）的原子、分子、或化学基团，因含有一个未成对电子而具有顺磁性和很高的反应活性。自由基都有一个对电子，具有强烈的配对倾向，所以大多数自由基都很活泼，很容易与其它分子或自由应生成新的自由基，由此引发连锁反应。 多数自由基反应性很强，寿命很短，如羟基自由基的寿命只有10-6秒；但也有少数自由基反应性不强，寿命较长，并相当稳定，如多环芳烃