pChk2_Thr68_pCdc_省略_6蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义_蒋华勇.docx

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3、 印 或 扫 描 等 复 制 手 段 保 存 、 汇 编 学 位 论 文 .（ 保 密 的 学 位 论 文 在 解 密 后 适 用 本 授 权 书 ）学 位 论 文 作 者 签 名: 曰 期 : 月 导 师 签 名 ： 日 期 :第二军医大学硕士学位论文pCHK2-Thr68/pCDC25C-Ser216 蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义The Expression of PCHK2-Thr68/pCDC25C-Ser216 Proteins and its Clinical Smnificance in Breast Cancer研究生姓名： 蒋华勇学科及专业： 肿瘤学研宄方向： 乳腺癌基础研

4、究导师： 王雅杰教授本课题获上海市卫生局科研计划（2009113)资助第二军医大学长海医院肿瘤科一四年五月目录Abstract .3獅各 .6mm .7材料与方法 .11關 .18.29组仑 .34参考文献 .35综述 .41参考;献 .44翻 .47摘 要【研究目的】基因的突变、缺失、表达异常等现象均与肿瘤发生、发展密切相关，DNA损伤 修复应答系统的异常，不能及时修复异常蛋白，可能乳腺癌发病的原因之一。 ATM/CHK2/CDC25C信号传导通路在DNA 双链断裂诱导的 DNA损伤修复、细胞周 期阻滞和细胞凋亡方面占有十分重要的作用。本研宄通过免疫组化方法检测 pCHK2-Thr68、pC

5、DC25C-Ser216蛋白在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达情况，对两 种蛋白的表达与乳腺癌患者各临床病理参数进行相关性分析，探讨pCHK2-Thr68、 pCDC25C-Ser216通路蛋白在乳腺癌发病、进展和治疗中的作用，进步探究该通路 蛋白做为乳腺癌临床治疗靶点的可行性，为临床实践提供参考。【研究方法】1991年至2011年，累计收集上海交通大学医学院附属瑞金医院、第二军医大学附 属长海医院和上海市黄浦区中心医院经病理确诊的乳腺癌患者组织标本292例。将经 过处理的乳腺癌组织标本进行染色，制备成组织芯片，根据免疫组化染色结果分析 pCHK2-Thr68、pCDC25C-Ser216蛋白在乳

6、腺癌组织和癌旁组织中的定性表达情况， 分析表达差异，并与病理类型、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期等 临床病理参数做相关性分析研究。1、 乳腺癌组织和癌旁组织间pCHK2-Thr68蛋白表达的差异以及蛋白表达与临床 病理参数之间的关系使用Pearson卡方检验或Fisher确切概率法，多因素分析采用 logistic逐步回归。2、 检测pCDC 25C-Ser216蛋白在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况，研究分析分 布差异。乳腺癌组织和癌旁组织间蛋白表达的差异，蛋白表达和各临床病理参数之间 的关系使用Pearson卡方检验或Fisher确切概率法。多因素分析采用logistic 逐步回

7、 归。配对比较的癌与癌旁组织间蛋白表达的关系使用McNemar检验。3、 联合检测pCHK2-Thr68/pCDC25C-Ser216蛋白在乳腺癌组织中的表达，明确 两种蛋白的表达相关性及该通路蛋白表达在乳腺癌中的临床意义。Spearman相关系 数检验用于分析癌与癌旁组织中pCHK2-Thr68、pCDC25C -Ser216的表达关系。两种 蛋白的联合表达状态分成四组，四组表达情况与临床病理参数之间的关系使用Fisher 确切概率法。4、 统计分析应用SPSS18.0软件进行，所有数据均进行双侧检验，检验水准 ct=0.05。【研究结果】292例乳腺癌组织标本芯片，由于脱片、染色效果不佳等

8、原因，能够观察到细胞 内pCHK 2-Thr68、pCDC25C-Ser216有显色反应的癌组织共265例，癌旁组织33例。1、 pCHK2-Thr68蛋白在乳腺癌组织中表达定位于细胞核。pCHK2-Thr68蛋白在 乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织（20.38%和0, P=0.005),表达阳性与 LuminalB 型乳腺癌显著相关（P=0.0065, OR=2.337),与临床分期、T分期（肿瘤大小）、N 分期（淋巴结转移数目）、病理类型、组织学分级、月经状态、HER2、ER、PR 状态、 年龄无明显相关性。2、 pCDC25C-Ser216蛋白在乳腺癌组织中胞核、胞浆均有表达，在癌旁组

9、织中 几乎全部表达于细胞核。与癌旁组织相比，癌组织中胞核的表达明显增高（82.26% 和24.24%，P=0.000) 。癌和癌旁组织pCDC 25C-Ser216蛋白表达未见一致相关性(p=0.078)，蛋白表达与临床各病理参数未见明显相关性。3、 乳腺癌组织中pCHK2-Thr68、pCDC25C-Ser216的表达呈正相关性，相关系 数为 0.137 (p=0.026)。把 pCHK2-Thr68/pCDC25C-Ser216 的联合表达状态分成四 组，四组蛋白表达情况与临床分期、T分期（肿瘤大小）、N分期（淋巴结转移数目）、 病理类型、组织学分级、月经状态、HER2、ER、PR状态、年

10、龄以及近似分子分型 等临床病理參数未见明显相关性。【研究结论】pCHK2-Thr68、pCDC25C-Ser2丨6蛋白在乳腺癌组织中的表达均明显高于癌旁组 织，两种蛋白表达呈正相关性，pCHK2-Thr68表达阳性与LuminalB亚型乳腺癌有一定 的相关性。提示CHK2/CDC25CDNA 损伤修复通路在乳腺癌中存在激活的现象，与其 发挥DNA损伤应答功能相一致，可能在乳腺癌发生、发展发挥重要作用，有可能成为 潜在的临床治疗靶点。【关键词】乳腺癌，pCHK2-Thr68，pCDC25C-Ser216，免疫组化技术AbstractObjectiveGenomic mutation, delet

11、ion and abnormal exoression are related to the development of cancers, DNA damage repair network cannot repair the abnormal protein in tune and may be one of the reasons for incidence of breast cancer. ATM/CHK2/CDC25C signal pathway plays an important role in DNA damage repair, cell cycle arrest and

12、 inducive cell apoptosis by DNA double strand breaks. In this study, we applied the methods of immunohistochemistry to detect pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 protein in breast cancer tissues and analysed the correlation between the expression of pCHK2-Thr68 pCDC25C-Ser216 protein and the clinicopatho

13、logical parameters of breast cancer patients. To explore its role in the development of breast cancer and the feasibility of these proteins as therapeutic targets.Materials and MethodsCollected surgical specimens of 292 patients with breast cancer were used to make tissue microarray. Immunohistochem

14、ical technique was used to test pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 protein expression in breast cancer and paracancerous tissues. The correlations between protein expression and its clinical significance was analysed. Combining detection of pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 protein was carried out to clari

15、fy the clinical significance in breast cancer. The correlation between the expression of protein and pathological type,histological grade, tuinor size, lymph node metastasis and TNM staging was analysed.1 .Using immunohistochemical technique to analyse pCHK2 -Thr68 expression in breast cancer and pa

16、racancerous tissue and its clinical significance. The relationship between protein expression in breast cancer and paracancerous tissue as well as the relationship between the clinicopathological parameters were analysed using the Pearsons x 2 test or Fishers exact probability methods and multivaria

17、te analysis by logistic regression.2. Immunohistochemical technique was used to test the expression of pCDC25C -Ser216 in breast cancer and paracancerous tissue. The expression of pCDC25C-Ser216 protein differences and its clinical significance were explored. The distribution difference of pCDC25C-S

18、er216 expression between breast cancer and paracancerous tissue and the relationship between protein expression and clinicopathological parameters were analysed using the Pearson fs x 2 test or nshers exact probability methods. Logistic regression wasused to implement multivariate analysis. McNemar

19、test was used to analyse the relationship between paired breast cancer and paracancerous tissue.3. Combining detection of the expression of of pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 proteins in breast cancer. The relationship of pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 was analysed using Spearman correlation coeffici

20、ent test. pCHK2-Thr68/pCDC25C-Ser216 combining expression state was divided into four groups and the relationship between the expression of four groups and clinical pathological parameters was analysed using risher exact probability methods.4. Applying the statistical analysis software SPSS 18.0, al

21、l data were performed bilateral inspection,inspection level a =0.05ResultsDue to offchip and bad dyeing effection, the color reaction of pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 can be observed in 265 cases of cancer tissues and 33 cases paracancerous tissue among 292 cases ot breast cancer tissue microarray.

22、1.Significant difference of the expression of pCHK2-Thr68 protein in breast cancer and paracancerous tissue was observed, the expression in cancer tissues was higher than that of paracancerous tissues (20.38% and 0, P=0.005). Increased expression of pCHK2-Thr68 was significantly correlated with Lumi

23、nal B breast cancers(P=0.0065, OR =2.337). Ihere was no significant correlation between the expression of pCHK2-Thr68 and clinical staging T staging, N staging (the number of lymph node metastasis),pathological type,histological grade, menopausal, HER2, ER, PR status and age.2. The expression of pCD

24、C25C-Ser216 protein localized in nucleus and cytoplasm, Almost all expressed in the nucleus with paracancerous tissue .Compared with paracancerous tissues, the expression of pCDC25C-Ser216 protein in breast career increased significantly(82.26% Vs 24.24%, P=0.000). There was no consistent relationsh

25、ip between the expression of pCDC25C-Ser216 protein in career and paracancerous tissues(p=0.078).No significant correlation existed between the expression of pCDC25C-Ser216 protein and clinical pathologicalparameters.3. There was a positive correlation between expression of pCHK2-Thr68 and pCDC25C-S

26、er216 in breast cancer, the correlation efficient was 0.137 (p=0.026). The pCHK2-Thr68/pCDC25C-Ser216 expression status was divided into four groups, there was no obvious correlation in four groups with clinical staging, T staging (tumor size), N staging (the number of lymph node metastasis), pathol

27、ogical type, histological grade,menopausal,HER2,ER,PR status, age and the approximate molecular type.ConclusionsThe study showed that: expression of pCHK2-Thr68 and pCDC25C-Ser216 proteins in breast cancer was significantly higher than that in paracancerous tissues, the two protein expression were p

28、ositively correlated. The expression of pCHK2-Thr68 was significantly correlated with LuminalB breast cancer.DNA damage repair pathway proteins CHK2、 CDC25C may play an important role in the occurrence and development of breast cancer and may be a potential clinical therapeutic target.KEY WORDS breast cancer, pCHK2-Thr68, pCDC25C-Ser216, immunohistochemical technique