免疫细胞化学实验技能总结精选PPT.ppt

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1、关于免疫细胞化学实验技能总关于免疫细胞化学实验技能总结结第1页，讲稿共78张，创作于星期日1 1 1 1 1 1、定义、定义、定义、定义、定义、定义用用用用用用标标标标标标记记记记记记的的的的的的特特特特特特异异异异异异性性性性性性抗抗抗抗抗抗体体体体体体对对对对对对组组组组组组织织织织织织切切切切切切片片片片片片或或或或或或细细细细细细胞胞胞胞胞胞标标标标标标本本本本本本中中中中中中某某某某某某些些些些些些化化化化化化学学学学学学成成成成成成分分分分分分的的的的的的分分分分分分布布布布布布和和和和和和含含含含含含量量量量量量进进进进进进行行行行行行组组组组组组织织织织织织和和和和和和细细细细

2、细细胞胞胞胞胞胞原原原原原原位位位位位位定定定定定定性性性性性性、定定定定定定位位位位位位或或或或或或定定定定定定 量量量量量量 研研研研研研 究究究究究究，这这这这这这 种种种种种种 技技技技技技 术术术术术术 称称称称称称 为为为为为为免免免免免免 疫疫疫疫疫疫 组组组组组组 织织织织织织 化化化化化化 学学学学学学（immunohistochemistryimmunohistochemistryimmunohistochemistryimmunohistochemistryimmunohistochemistryimmunohistochemistry）技技技技技技 术术术术术术 或或或

3、或或或免免免免免免 疫疫疫疫疫疫 细细细细细细 胞胞胞胞胞胞 化化化化化化 学学学学学学（immunocytochemistryimmunocytochemistryimmunocytochemistryimmunocytochemistryimmunocytochemistryimmunocytochemistry）技术。）技术。）技术。）技术。）技术。）技术。第2页，讲稿共78张，创作于星期日2 2 2 2 2 2、原理、原理、原理、原理、原理、原理根根根根根根据据据据据据抗抗抗抗抗抗原原原原原原抗抗抗抗抗抗体体体体体体反反反反反反应应应应应应和和和和和和化化化化化化学学学学学学显显显显显

4、显色色色色色色原原原原原原理理理理理理,组组组组组组织织织织织织切切切切切切片片片片片片或或或或或或细细细细细细胞胞胞胞胞胞标标标标标标本本本本本本中中中中中中的的的的的的抗抗抗抗抗抗原原原原原原先先先先先先和和和和和和一一一一一一抗抗抗抗抗抗结结结结结结合合合合合合，再再再再再再利利利利利利用用用用用用一一一一一一抗抗抗抗抗抗与与与与与与标标标标标标记记记记记记生生生生生生物物物物物物素素素素素素、荧荧荧荧荧荧光光光光光光素素素素素素等等等等等等的的的的的的二二二二二二抗抗抗抗抗抗进进进进进进行行行行行行反反反反反反应应应应应应，最最最最最最后后后后后后通通通通通通过过过过过过呈呈呈呈呈呈色

5、色色色色色反反反反反反应应应应应应或或或或或或荧荧荧荧荧荧光光光光光光来来来来来来显显显显显显示示示示示示细细细细细细胞胞胞胞胞胞或或或或或或组组组组组组织织织织织织中中中中中中化化化化化化学学学学学学成成成成成成分分分分分分，在在在在在在光光光光光光学学学学学学显显显显显显微微微微微微镜镜镜镜镜镜或或或或或或荧荧荧荧荧荧光光光光光光显显显显显显微微微微微微镜镜镜镜镜镜下下下下下下可可可可可可清清清清清清晰晰晰晰晰晰看看看看看看见见见见见见细细细细细细胞胞胞胞胞胞内内内内内内发发发发发发生生生生生生的的的的的的抗抗抗抗抗抗原原原原原原抗抗抗抗抗抗体体体体体体反反反反反反应应应应应应产产产产产产

6、物物物物物物，从从从从从从而而而而而而能能能能能能够够够够够够在在在在在在细细细细细细胞胞胞胞胞胞爬爬爬爬爬爬片片片片片片或或或或或或组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。上原位确定某些化学成分的分布和含量。上原位确定某些化学成分的分布和含量。上原位确定某些化学成分的分布和含量。上原位确定某些化学成分的分布和含量。上原位确定某些化学成分的分布和含量。第3页，讲稿共78张，创作于星期日常用的标记物有常用的标记物有常用的标记物有常用的标记物有常用的标记物有常用的标记物有荧光素荧光素荧光素荧光素荧光素荧光素、酶酶酶酶酶酶和和和和和和放射性同位素放射性同位

7、素放射性同位素放射性同位素放射性同位素放射性同位素：标标标标标标记记记记记记荧荧荧荧荧荧光光光光光光素素素素素素的的的的的的称称称称称称为为为为为为免免免免免免疫疫疫疫疫疫荧荧荧荧荧荧光光光光光光法法法法法法，常常常常常常用用用用用用的的的的的的荧荧荧荧荧荧光光光光光光素素素素素素有有有有有有异异异异异异硫硫硫硫硫硫氰氰氰氰氰氰酸酸酸酸酸酸荧荧荧荧荧荧光素光素光素光素光素光素(FITC)(FITC)(FITC)、罗丹明、罗丹明、罗丹明、罗丹明、罗丹明、罗丹明(rhodamine)(rhodamine)(rhodamine)等。等。等。等。等。等。标标标标标标 记记记记记记 酶酶酶酶酶酶 的的的

8、的的的 称称称称称称 为为为为为为免免免免免免 疫疫疫疫疫疫 酶酶酶酶酶酶 法法法法法法，常常常常常常 用用用用用用 的的的的的的 酶酶酶酶酶酶 有有有有有有 辣辣辣辣辣辣 根根根根根根 过过过过过过 氧氧氧氧氧氧 化化化化化化 物物物物物物 酶酶酶酶酶酶(horseradish peroxidase)(horseradish peroxidase)(horseradish peroxidase)等。等。等。等。等。等。标标标标标标记记记记记记同同同同同同位位位位位位素素素素素素的的的的的的称称称称称称为为为为为为放放放放放放射射射射射射免免免免免免疫疫疫疫疫疫法法法法法法，常常常常常常用用用

9、用用用的的的的的的同同同同同同位位位位位位素素素素素素有有有有有有3 33H HH、141414C CC、323232S S S和和和和和和313131P P P等。等。等。等。等。等。第4页，讲稿共78张，创作于星期日 二、免疫酶二、免疫酶/免疫荧光免疫荧光三、酶联免疫吸附试验三、酶联免疫吸附试验一、石蜡切片一、石蜡切片/冰冻切片冰冻切片讲解提纲讲解提纲第5页，讲稿共78张，创作于星期日（1 1）石蜡切片的制作石蜡切片的制作石蜡切片的制作石蜡切片的制作 蒸馏水洗涤蒸馏水洗涤蒸馏水洗涤蒸馏水洗涤2 2遍遍遍遍二甲苯约二甲苯约二甲苯约二甲苯约20min20min、二甲苯、二甲苯、二甲苯、二甲苯/

10、石蜡石蜡石蜡石蜡(1:1)30min,(1:1)30min,纯蜡纯蜡纯蜡纯蜡、各各各各30min30min常规石蜡切片，切片厚度为常规石蜡切片，切片厚度为常规石蜡切片，切片厚度为常规石蜡切片，切片厚度为7 m7 m5050、7070 、8080酒酒酒酒精精精精各各各各15 15 min min，9595酒酒酒酒精精精精、各各各各15 15 minmin，无无无无水水水水乙乙乙乙醇醇醇醇 、各各各各15 15 minmin，无无无无水水水水乙醇乙醇乙醇乙醇/二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯(1:1)15 min(1:1)15 min于干净载玻片上进行展片，于干净载玻片上进行展片，于干净载玻片上进行展片，

11、于干净载玻片上进行展片，3737烤干烤干烤干烤干取材、固定取材、固定取材、固定取材、固定酒精脱水酒精脱水酒精脱水酒精脱水洗涤洗涤洗涤洗涤展片、烤片展片、烤片展片、烤片展片、烤片包埋、切片包埋、切片包埋、切片包埋、切片透明、浸蜡透明、浸蜡透明、浸蜡透明、浸蜡第6页，讲稿共78张，创作于星期日n n根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜新鲜新鲜新鲜、准确准确准确准确、完整完整完整完整，材料要避免，材料要避免，材料要避免，材料要避免挤压挤压挤压挤压、挫伤挫伤挫

12、伤挫伤、干枯干枯干枯干枯。n n所采集材料应所采集材料应所采集材料应所采集材料应立即立即立即立即放入固定液，并编号，注明采集时放入固定液，并编号，注明采集时放入固定液，并编号，注明采集时放入固定液，并编号，注明采集时间、名称、组织部位，所取组织块要间、名称、组织部位，所取组织块要间、名称、组织部位，所取组织块要间、名称、组织部位，所取组织块要大小适当大小适当大小适当大小适当，即要，即要，即要，即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。n n如：角膜、如：角膜、如：角膜、如：角膜、T

13、E-HCTE-HCTE-HCTE-HC等组织材料等组织材料等组织材料等组织材料 细胞材料细胞材料细胞材料细胞材料 肝脏、鱼卵肝脏、鱼卵肝脏、鱼卵肝脏、鱼卵 取材取材第7页，讲稿共78张，创作于星期日 取材后，应立即进行固定。固定是制片极为关键的一个取材后，应立即进行固定。固定是制片极为关键的一个取材后，应立即进行固定。固定是制片极为关键的一个取材后，应立即进行固定。固定是制片极为关键的一个步骤，制片质量的优劣除与材料的新鲜程度有关外，还取步骤，制片质量的优劣除与材料的新鲜程度有关外，还取步骤，制片质量的优劣除与材料的新鲜程度有关外，还取步骤，制片质量的优劣除与材料的新鲜程度有关外，还取决于最初

14、的固定是否适当和完全。决于最初的固定是否适当和完全。决于最初的固定是否适当和完全。决于最初的固定是否适当和完全。n n固定的意义固定的意义固定的意义固定的意义 新鲜的组织被割取后新鲜的组织被割取后新鲜的组织被割取后新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的由于细胞内酶的作用和细菌的由于细胞内酶的作用和细菌的由于细胞内酶的作用和细菌的繁殖，可引起组织的繁殖，可引起组织的繁殖，可引起组织的繁殖，可引起组织的自溶和腐败自溶和腐败自溶和腐败自溶和腐败。因此，割取组织块后，。因此，割取组织块后，。因此，割取组织块后，。因此，割取组织块后，应立即采用一种方法将组织尽可能保持原有的形态结构，应立即采用一

15、种方法将组织尽可能保持原有的形态结构，应立即采用一种方法将组织尽可能保持原有的形态结构，应立即采用一种方法将组织尽可能保持原有的形态结构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固定固定固定固定。固定固定第8页，讲稿共78张，创作于星期日固定的目的和作用在于：固定的目的和作用在于：固定的目的和作用在于：固定的目的和作用在于：防止组织自溶和腐败；防止组织自溶和腐败；防止组织自溶和腐败；防止组织自溶和腐败；使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存使细胞内的蛋白质、糖、

16、脂肪等各种成分沉淀保存使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活时相近似的形态和结构；时相近似的形态和结构；时相近似的形态和结构；时相近似的形态和结构；因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不同的折光率，造成光学上的差别，使原来在生活情同的折

17、光率，造成光学上的差别，使原来在生活情同的折光率，造成光学上的差别，使原来在生活情同的折光率，造成光学上的差别，使原来在生活情况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂还有助染作用还有助染作用还有助染作用还有助染作用(如醋酸、苦味酸如醋酸、苦味酸如醋酸、苦味酸如醋酸、苦味酸)，从而使细胞各部易于，从而使细胞各部易于，从而使细胞各部易于，从而使细胞各部易于染色；染色；染色；染色；固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而

18、不易变形，固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利于操作。有利于操作。有利于操作。有利于操作。第9页，讲稿共78张，创作于星期日名称名称名称名称10%10%10%10%甲醛甲醛甲醛甲醛4%4%4%4%多聚多聚多聚多聚甲醛甲醛甲醛甲醛苦味酸苦味酸苦味酸苦味酸冰醋酸冰醋酸冰醋酸冰醋酸锇酸锇酸锇酸锇酸固定效果固定效果固定效果固定效果好好好好好好好好沉淀一切沉淀一切沉淀一切沉淀一切蛋白蛋白蛋白蛋白对染色质对染色质对染色质对染色质固定好固定好固定好固定好好好好好组织收缩组织收缩组织收缩组织收缩大大大大小小小小大大大大小小小小小小小小主要用途主要

19、用途主要用途主要用途常规病理常规病理常规病理常规病理切片切片切片切片免疫化免疫化免疫化免疫化学学学学不单独使不单独使不单独使不单独使用用用用不单独使不单独使不单独使不单独使用用用用-核核核核型型型型电镜电镜电镜电镜缺缺缺缺 点点点点长期用其长期用其长期用其长期用其固定的组固定的组固定的组固定的组织变为酸织变为酸织变为酸织变为酸性不利于性不利于性不利于性不利于染色，特染色，特染色，特染色，特别是细胞别是细胞别是细胞别是细胞核的着色核的着色核的着色核的着色固定的固定的固定的固定的时间不时间不时间不时间不宜太长，宜太长，宜太长，宜太长，以以以以24242424小小小小时以内时以内时以内时以内为宜为宜

20、为宜为宜渗透力弱渗透力弱渗透力弱渗透力弱，对组织，对组织，对组织，对组织收缩大收缩大收缩大收缩大使组织膨使组织膨使组织膨使组织膨胀，一般胀，一般胀，一般胀，一般不单独使不单独使不单独使不单独使用用用用价格昂贵价格昂贵价格昂贵价格昂贵；有毒；有毒；有毒；有毒第10页，讲稿共78张，创作于星期日混合固定剂混合固定剂混合固定剂混合固定剂（1 1 1 1）BouinBouinBouinBouin氏固定液氏固定液氏固定液氏固定液：为常用的良好的固定剂，穿透速度快，组织收：为常用的良好的固定剂，穿透速度快，组织收：为常用的良好的固定剂，穿透速度快，组织收：为常用的良好的固定剂，穿透速度快，组织收缩性较小，

21、固定均匀，固定后组织有适当的硬度，缩性较小，固定均匀，固定后组织有适当的硬度，缩性较小，固定均匀，固定后组织有适当的硬度，缩性较小，固定均匀，固定后组织有适当的硬度，对于切片和染色均对于切片和染色均对于切片和染色均对于切片和染色均有良好的效果有良好的效果有良好的效果有良好的效果。一般固定。一般固定。一般固定。一般固定1224122412241224小时，固定后入小时，固定后入小时，固定后入小时，固定后入70%70%70%70%酒精洗去苦味酒精洗去苦味酒精洗去苦味酒精洗去苦味酸的黄色，在脱水时经各浓度酒精也可洗去黄色。酸的黄色，在脱水时经各浓度酒精也可洗去黄色。酸的黄色，在脱水时经各浓度酒精也可

22、洗去黄色。酸的黄色，在脱水时经各浓度酒精也可洗去黄色。（2 2 2 2）CarnoyCarnoyCarnoyCarnoy液液液液：渗透力强，特别适宜于固定染色体、肝糖、粘液等一：渗透力强，特别适宜于固定染色体、肝糖、粘液等一：渗透力强，特别适宜于固定染色体、肝糖、粘液等一：渗透力强，特别适宜于固定染色体、肝糖、粘液等一些较为细微的结构。显示些较为细微的结构。显示些较为细微的结构。显示些较为细微的结构。显示DNADNADNADNA、RNARNARNARNA效果良好。效果良好。效果良好。效果良好。（3 3 3 3）改良改良改良改良BouinBouinBouinBouin氏固定液氏固定液氏固定液氏固

23、定液：此液对一般组织固定效果都很好，固定时：此液对一般组织固定效果都很好，固定时：此液对一般组织固定效果都很好，固定时：此液对一般组织固定效果都很好，固定时间为间为间为间为418418418418小时，固定后直接放小时，固定后直接放小时，固定后直接放小时，固定后直接放70%70%70%70%乙醇脱水，固定时间较长对乙醇脱水，固定时间较长对乙醇脱水，固定时间较长对乙醇脱水，固定时间较长对组织亦无损害。组织亦无损害。组织亦无损害。组织亦无损害。第11页，讲稿共78张，创作于星期日固定时应注意的事项固定时应注意的事项固定时应注意的事项固定时应注意的事项（1 1 1 1）固定液及被固定的组织必须）固定

24、液及被固定的组织必须）固定液及被固定的组织必须）固定液及被固定的组织必须新鲜新鲜新鲜新鲜；（2 2 2 2）固定液的用量一般为组织体积的）固定液的用量一般为组织体积的）固定液的用量一般为组织体积的）固定液的用量一般为组织体积的1020102010201020倍，容器不要过小，倍，容器不要过小，倍，容器不要过小，倍，容器不要过小，材料也不要太多；应避免组织紧贴瓶底或瓶壁，以免影响固定液材料也不要太多；应避免组织紧贴瓶底或瓶壁，以免影响固定液材料也不要太多；应避免组织紧贴瓶底或瓶壁，以免影响固定液材料也不要太多；应避免组织紧贴瓶底或瓶壁，以免影响固定液的渗入；的渗入；的渗入；的渗入；（3 3 3

25、3）固定时间视）固定时间视）固定时间视）固定时间视组织块的种类、性质、大小，固定液的种类、组织块的种类、性质、大小，固定液的种类、组织块的种类、性质、大小，固定液的种类、组织块的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的等；等；等；等；（4 4 4 4）固定所用的固定液，以）固定所用的固定液，以）固定所用的固定液，以）固定所用的固定液，以新配新配新配新配的为好，放置过久会失效；的为好，放置过久会失效；的为好，放置过

26、久会失效；的为好，放置过久会失效；（5 5 5 5）在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入，对长）在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入，对长）在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入，对长）在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入，对长期固定的标本，可期固定的标本，可期固定的标本，可期固定的标本，可经常更换固定液经常更换固定液经常更换固定液经常更换固定液;（6 6 6 6）取材固定应同时）取材固定应同时）取材固定应同时）取材固定应同时作好记录作好记录作好记录作好记录，包括组织名称、固定液和时间，包括组织名称、固定液和时间，包括组织名称、固定液和时间，包括组织名称、

27、固定液和时间等内容。等内容。等内容。等内容。第12页，讲稿共78张，创作于星期日乙醇：乙醇：乙醇：乙醇：高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水，而必须经过用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水，而必须经过用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水，而必须经过用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水，而必须经过由低到由低到由低到由低到高高高高的一系列不同浓度的酒精，逐渐取代组织中水分，的一系列不同浓度的酒精，逐渐取代组织中水分，的一系列不同浓度

28、的酒精，逐渐取代组织中水分，的一系列不同浓度的酒精，逐渐取代组织中水分，以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。脱水脱水第13页，讲稿共78张，创作于星期日注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：（1 1 1 1）脱水的时间应根据）脱水的时间应根据）脱水的时间应根据）脱水的时间应根据组织块的大小和组织的类型组织块的大小和组织的类型组织块的大小和组织的类型组织块的大小和组织的类型而定。而定。而定。而定。（2 2 2 2）组织块在高浓度，特别是无水乙醇内）

29、组织块在高浓度，特别是无水乙醇内）组织块在高浓度，特别是无水乙醇内）组织块在高浓度，特别是无水乙醇内不能放置的不能放置的不能放置的不能放置的时间太长时间太长时间太长时间太长。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过度硬化，使得切片病理组织易碎裂。度硬化，使得切片病理组织易碎裂。度硬化，使得切片病理组织易碎裂。度硬化，使得切片病理组织易碎裂。（3 3 3 3）在脱水的过程中可以将组织块）在脱水的过程中可以将组织块）在脱水的过程中可以将组织块）在脱水的过程中可以将组织块停留

30、停留停留停留在在在在70%80%70%80%70%80%70%80%的酒的酒的酒的酒精中。精中。精中。精中。（4 4 4 4）每次更换新的脱水剂时（组织块从低浓度到高浓度）每次更换新的脱水剂时（组织块从低浓度到高浓度）每次更换新的脱水剂时（组织块从低浓度到高浓度）每次更换新的脱水剂时（组织块从低浓度到高浓度），都要把组织块放在吸水纸上，都要把组织块放在吸水纸上，都要把组织块放在吸水纸上，都要把组织块放在吸水纸上吸干吸干吸干吸干，以免将水及低浓度，以免将水及低浓度，以免将水及低浓度，以免将水及低浓度脱水剂带入高浓度脱水剂中，影响脱水效果。脱水剂带入高浓度脱水剂中，影响脱水效果。脱水剂带入高浓度脱

31、水剂中，影响脱水效果。脱水剂带入高浓度脱水剂中，影响脱水效果。第14页，讲稿共78张，创作于星期日置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用；置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用；置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用；置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用；二甲苯：是现在应用最广的一种透明剂，价格较便宜，不能和二甲苯：是现在应用最广的一种透明剂，价格较便宜，不能和二甲苯：是现在应用最广的一种透明剂，价格较便宜，不能和二甲苯：是现在应用最广的一种透明剂，价格较便宜，不能和水混合，遇水则变成乳白色浑浊，因此必完全脱水后才能使水混合，遇水则变成乳白色浑浊，因此必完全脱

32、水后才能使水混合，遇水则变成乳白色浑浊，因此必完全脱水后才能使水混合，遇水则变成乳白色浑浊，因此必完全脱水后才能使用；易溶于酒精又能溶解石蜡，透明力强；用；易溶于酒精又能溶解石蜡，透明力强；用；易溶于酒精又能溶解石蜡，透明力强；用；易溶于酒精又能溶解石蜡，透明力强；其最大的其最大的其最大的其最大的缺点缺点缺点缺点是是是是容易使组织收缩变硬变脆容易使组织收缩变硬变脆容易使组织收缩变硬变脆容易使组织收缩变硬变脆，所以组织不能在其停，所以组织不能在其停，所以组织不能在其停，所以组织不能在其停留过久，透明时间视组织块的大小、性质而定；有的组织如留过久，透明时间视组织块的大小、性质而定；有的组织如留过久

33、，透明时间视组织块的大小、性质而定；有的组织如留过久，透明时间视组织块的大小、性质而定；有的组织如肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等，不宜用二甲肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等，不宜用二甲肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等，不宜用二甲肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等，不宜用二甲苯透明，因组织过硬不易切片；长时间接触，对粘膜有刺激苯透明，因组织过硬不易切片；长时间接触，对粘膜有刺激苯透明，因组织过硬不易切片；长时间接触，对粘膜有刺激苯透明，因组织过硬不易切片；长时间接触，对粘膜有刺激作用。作用。作用。作用。透明透明第15页，讲稿共78张，创作于星期日（1 1 1 1）

34、浸蜡的目的浸蜡的目的浸蜡的目的浸蜡的目的 置换组织中的透明剂，为包埋做准备。置换组织中的透明剂，为包埋做准备。置换组织中的透明剂，为包埋做准备。置换组织中的透明剂，为包埋做准备。（2 2 2 2）注意事项注意事项注意事项注意事项 温箱中的温度必须严格控制在温箱中的温度必须严格控制在温箱中的温度必须严格控制在温箱中的温度必须严格控制在60606060的范围，不能超过的范围，不能超过的范围，不能超过的范围，不能超过60606060；浸蜡时间不宜过长。；浸蜡时间不宜过长。；浸蜡时间不宜过长。；浸蜡时间不宜过长。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和

35、脆变。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。浸蜡浸蜡第16页，讲稿共78张，创作于星期日（1 1 1 1）步骤）步骤）步骤）步骤 准备包埋蜡：一般应用硬蜡（准备包埋蜡：一般应用硬蜡（准备包埋蜡：一般应用硬蜡（准备包埋蜡：一般应用硬蜡（5658565856585658或或或或6062606260626062），所用的），所用的），所用的），所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性。石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性。石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性。石蜡要求透明无杂质，新

36、的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性。包埋用过的石蜡可以反复使用。包埋用过的石蜡可以反复使用。包埋用过的石蜡可以反复使用。包埋用过的石蜡可以反复使用。准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。在包埋框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好在包埋框中

37、倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好在包埋框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好在包埋框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。方向。方向。方向。包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体状，即可放入冷水中，加速其凝固。状，即可放入冷水中，加速其凝固。状，即可放入冷水中，加速其凝固。状，即可放入冷水中，加速其凝固。待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架，待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架，

38、待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架，待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架，或拆开纸盒，取出或拆开纸盒，取出或拆开纸盒，取出或拆开纸盒，取出蜡块。蜡块。蜡块。蜡块。包埋包埋第17页，讲稿共78张，创作于星期日（2 2 2 2）注意事项）注意事项）注意事项）注意事项 包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘附在镊子上，造成蜡块凝固不均匀。附在镊子上，造成蜡块凝固不均匀。附在镊子上，造成蜡块凝固不均匀。附在镊子上，造

39、成蜡块凝固不均匀。包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽量缩短。量缩短。量缩短。量缩短。包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的问题：在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的

40、问题：在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的问题：在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的问题：a.a.a.a.脱水脱水脱水脱水不彻底。不彻底。不彻底。不彻底。b.b.b.b.包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝结状。结状。结状。结状。c.c.c.c.组织内还残留有较多的透明剂。组织内还残留有较多的透明剂。组织内还残留有较多的透明剂。组织内还残留有较多的透明剂。d.d.d.d.石蜡不纯。石蜡不纯。石蜡不纯。石蜡不纯。包埋箱

41、中的温度必须保持恒定。包埋箱中的温度必须保持恒定。包埋箱中的温度必须保持恒定。包埋箱中的温度必须保持恒定。如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色第18页，讲稿共78张，创作于星期日 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将包埋好的蜡块用刀片修成规整的

42、四棱台，以少许热蜡液将包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片刀的锐利与否切片刀的锐利与否切片刀的锐利与否切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当蜡块硬度适当蜡块硬度适当蜡块硬度适当都直接影响切片质都直接影响切片质都直接影响切片质都直接影响切片质量，可

43、用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为度为度为度为4 4 4 47 7 7 7微米微米微米微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。轻放在纸上。轻放在纸上。轻放在纸上。切片切片第19页，讲稿共78张，创作于星期日 用用用用粘附剂粘附剂粘附剂粘附剂将展平的蜡片牢附于载玻片上，以免在以后的脱蜡、水化及将展平的蜡片牢附于载玻片

44、上，以免在以后的脱蜡、水化及将展平的蜡片牢附于载玻片上，以免在以后的脱蜡、水化及将展平的蜡片牢附于载玻片上，以免在以后的脱蜡、水化及染色等步骤中二者滑脱开。粘附剂是染色等步骤中二者滑脱开。粘附剂是染色等步骤中二者滑脱开。粘附剂是染色等步骤中二者滑脱开。粘附剂是甘油蛋白甘油蛋白甘油蛋白甘油蛋白。首先在洁净的载玻片上涂抹薄层甘油蛋白，再将一定长度蜡带（连首先在洁净的载玻片上涂抹薄层甘油蛋白，再将一定长度蜡带（连首先在洁净的载玻片上涂抹薄层甘油蛋白，再将一定长度蜡带（连首先在洁净的载玻片上涂抹薄层甘油蛋白，再将一定长度蜡带（连续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水（续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水

45、（续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水（续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水（45454545左右）中展平后，捞左右）中展平后，捞左右）中展平后，捞左右）中展平后，捞至玻片上铺正，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入至玻片上铺正，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入至玻片上铺正，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入至玻片上铺正，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45454545温箱中温箱中温箱中温箱中干燥，也可在干燥，也可在干燥，也可在干燥，也可在37373737温箱中干燥，但需适当延长时间。温箱中干燥，但需适当延长时间。温箱中干燥，但需适当延长时间。温箱中干燥，但需适当延长时间。展片展片第

46、20页，讲稿共78张，创作于星期日缺缺缺缺 点：材料发生裂隙破碎或脱落点：材料发生裂隙破碎或脱落点：材料发生裂隙破碎或脱落点：材料发生裂隙破碎或脱落原原原原 因：因：因：因：1 1 1 1脱水不干净脱水不干净脱水不干净脱水不干净2 2 2 2有透明剂残留有透明剂残留有透明剂残留有透明剂残留3 3 3 3石蜡透入时，温度过高或时间石蜡透入时，温度过高或时间石蜡透入时，温度过高或时间石蜡透入时，温度过高或时间过长过长过长过长4 4 4 4由于脱水剂和透明剂的影响，由于脱水剂和透明剂的影响，由于脱水剂和透明剂的影响，由于脱水剂和透明剂的影响，使组织变硬发脆使组织变硬发脆使组织变硬发脆使组织变硬发脆5

47、 5 5 5材料太硬或太粗材料太硬或太粗材料太硬或太粗材料太硬或太粗补补补补 救救救救 办办办办 法法法法 ：1 1 1 1无法弥补无法弥补无法弥补无法弥补2 2 2 2增加浸蜡时间，重新包埋增加浸蜡时间，重新包埋增加浸蜡时间，重新包埋增加浸蜡时间，重新包埋3 3 3 3无法补救无法补救无法补救无法补救4 4 4 4用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明行脱水和透明行脱水和透明行脱水和透明5 5 5 5在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液在蜡块表面涂一薄

48、层火棉胶溶液 常见问题分析常见问题分析第21页，讲稿共78张，创作于星期日缺缺缺缺 点：石蜡带弯曲不直点：石蜡带弯曲不直点：石蜡带弯曲不直点：石蜡带弯曲不直原原原原 因：因：因：因：1 1 1 1石蜡块上下两边不平行石蜡块上下两边不平行石蜡块上下两边不平行石蜡块上下两边不平行2 2 2 2石蜡块的上下两边不和刀口平石蜡块的上下两边不和刀口平石蜡块的上下两边不和刀口平石蜡块的上下两边不和刀口平行行行行3 3 3 3刀口锋利不一，局部产生差刀口锋利不一，局部产生差刀口锋利不一，局部产生差刀口锋利不一，局部产生差异异异异4 4 4 4蜡块的一边较另一边为软蜡块的一边较另一边为软蜡块的一边较另一边为软

49、蜡块的一边较另一边为软 或两边的硬度不一致或两边的硬度不一致或两边的硬度不一致或两边的硬度不一致5 5 5 5材料未居蜡块正中央材料未居蜡块正中央材料未居蜡块正中央材料未居蜡块正中央6 6 6 6材料大而形不正材料大而形不正材料大而形不正材料大而形不正补补补补 救救救救 办办办办 法法法法 ：1 1 1 1取下台木，将两边修干取下台木，将两边修干取下台木，将两边修干取下台木，将两边修干2 2 2 2调节标本台，使两者平行调节标本台，使两者平行调节标本台，使两者平行调节标本台，使两者平行3 3 3 3移动刀片，改用新的刀口移动刀片，改用新的刀口移动刀片，改用新的刀口移动刀片，改用新的刀口4 4

50、4 4待蜡块冷却后再切，或重新包待蜡块冷却后再切，或重新包待蜡块冷却后再切，或重新包待蜡块冷却后再切，或重新包埋埋埋埋5 5 5 5用刀片切去部分石蜡，使材料用刀片切去部分石蜡，使材料用刀片切去部分石蜡，使材料用刀片切去部分石蜡，使材料居中居中居中居中6 6 6 6在大的一边切去少许石蜡在大的一边切去少许石蜡在大的一边切去少许石蜡在大的一边切去少许石蜡第22页，讲稿共78张，创作于星期日缺缺缺缺 点：切片分离、不能连成带状点：切片分离、不能连成带状点：切片分离、不能连成带状点：切片分离、不能连成带状原原原原 因：因：因：因：1 1 1 1室温过低室温过低室温过低室温过低2 2 2 2石蜡过硬石