第十单元免疫缺陷性疾病的免疫学检测.ppt

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1、第十第十单单元免疫缺陷性疾病的免疫元免疫缺陷性疾病的免疫学学检测检测现在学习的是第1页，共52页实验一实验一HIV抗体初筛实验抗体初筛实验现在学习的是第2页，共52页获得性免疫缺陷综合征获得性免疫缺陷综合征是是由由人人类类免免疫疫缺缺陷陷病病毒毒（HIV）感感染染所所引引起起的的以以CD4+T细细胞胞减减少少为为主主要要特特征征，同同时时伴伴反反复复机机会会感感染染、恶恶性性肿肿瘤瘤及及中枢神经系统退行性病变的一组综合征。中枢神经系统退行性病变的一组综合征。现在学习的是第3页，共52页HIV感染的免疫学检验方法主要针对病毒抗原和抗病毒抗体感染的免疫学检验方法主要针对病毒抗原和抗病毒抗体的检测以

2、及免疫细胞数量和功能的分析。的检测以及免疫细胞数量和功能的分析。HIV抗体初筛实验主要包括酶联免疫吸附试验（抗体初筛实验主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、化）、化学发光或免疫荧光试验、快速检测试验（明胶颗粒凝集试验、免学发光或免疫荧光试验、快速检测试验（明胶颗粒凝集试验、免疫渗滤试验和免疫层析试验）等。疫渗滤试验和免疫层析试验）等。ELISA是最常用的是最常用的HIV抗体初筛实验方法。本实验采用双抗原夹抗体初筛实验方法。本实验采用双抗原夹心心ELISA法检测人血清中法检测人血清中HIV抗体。抗体。检测方法检测方法现在学习的是第4页，共52页在符合在符合级生物安全实验室（级生物安全实验室（

3、BSL-2）要求的艾滋）要求的艾滋病检测实验室中进行。病检测实验室中进行。实验条件实验条件现在学习的是第5页，共52页将将HIV抗抗原原包包被被于于固固相相载载体体，加加入入待待检检样样品品和和酶酶标标记记的的HIV抗抗原原，形形成成抗抗原原抗抗体体酶酶标标抗抗原原复复合合物物，洗洗涤涤，加加底底物物显显色色。通通过过酶酶标标仪仪检检测测吸吸光光度度A450nm值值，根根据据A450nm值值判判断断HIV抗体的存在与否。抗体的存在与否。实验原理实验原理现在学习的是第6页，共52页1.HIV抗原酶标板。抗原酶标板。2.洗涤液洗涤液PBS-Tween20。3.辣根过氧化物酶标记的辣根过氧化物酶标记

4、的HIV抗原。抗原。4.辣根过氧化物酶底物溶液。辣根过氧化物酶底物溶液。5.底物稀释液底物稀释液PBS-1%BSA。6.终止液终止液2mol/lH2SO4溶液。溶液。7.对照血清对照血清临床标本筛选获得的阳性血清和阴性血清。临床标本筛选获得的阳性血清和阴性血清。8.酶标仪、洗板机。酶标仪、洗板机。试剂与器材试剂与器材现在学习的是第7页，共52页操作步骤操作步骤编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、孔、阳性对照阳性对照3孔，空白对照孔，空白对照2孔孔加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100l

5、，用封板膜封板后置，用封板膜封板后置37温育温育60min。洗涤：用洗板机清洗，在干净滤纸上拍干。：用洗板机清洗，在干净滤纸上拍干。加酶：每孔加酶结合物：每孔加酶结合物100l（空白对照孔除外），充分（空白对照孔除外），充分混匀，置混匀，置37温育温育30min。洗涤：用洗板机清洗，在干净滤纸上拍干。：用洗板机清洗，在干净滤纸上拍干。显色：每孔加入底物缓冲液：每孔加入底物缓冲液50l，TMB50l，振荡混，振荡混匀，匀，37避光显色避光显色10min。测定：每孔加终止液：每孔加终止液50l，振荡混匀。在，振荡混匀。在450nm波长波长下，酶标仪测定各孔下，酶标仪测定各孔A450nm值。值。现在

6、学习的是第8页，共52页结果判断结果判断计算临界值：临界值计算临界值：临界值=阳性对照值阳性对照值10%。正常情况下，阳性对照孔的正常情况下，阳性对照孔的A450nm值值0.80，样品，样品A450nm值值临界临界值者为值者为HIV抗体阳性。抗体阳性。正常情况下，阴性对照孔的正常情况下，阴性对照孔的A450nm值值0.08，样品，样品A450nm值值临界值者为临界值者为HIV抗体阴性。抗体阴性。现在学习的是第9页，共52页注意事项注意事项实验中设立阳性与阴性对照。实验中设立阳性与阴性对照。底物显色时间不宜过长。底物显色时间不宜过长。注意生物安全。注意生物安全。对对初初筛筛呈呈阳阳性性反反应应的

7、的样样品品，应应进进行行复复检检试试验验。如如复复检检均均呈呈阴阴性性，则则报报告告HIV抗抗体体阴阴性性（-）；如如均均呈呈阳阳性性反反应应，或或一一阴阴一一阳阳，应应送送HIV确证实验室进行确证试验。确证实验室进行确证试验。现在学习的是第10页，共52页临床意义临床意义作为作为HIV感染的筛查实验。感染的筛查实验。HIV有两个血清型：有两个血清型：HIV-1和和HIV-2，后，后者少见。此试验阳性者应进一步作确证试验。者少见。此试验阳性者应进一步作确证试验。思考题思考题ELISA是检测是检测HIV抗体的常用方法，但并不是唯一的方法。化学发光抗体的常用方法，但并不是唯一的方法。化学发光或免疫

8、荧光试验、免疫胶体金以及免疫层析实验等均可用于或免疫荧光试验、免疫胶体金以及免疫层析实验等均可用于HIV抗体的抗体的检测，试比较各种方法之间的优缺点。检测，试比较各种方法之间的优缺点。第三军医大学第三军医大学 吴超吴超 现在学习的是第11页，共52页实验二实验二HIV确认实验确认实验现在学习的是第12页，共52页HIV抗体初筛试验阳性者，须作确证试验。确证实验必须在专抗体初筛试验阳性者，须作确证试验。确证实验必须在专门的艾滋病确证实验室中进行，并最终确定患者是否感染门的艾滋病确证实验室中进行，并最终确定患者是否感染HIV。确证试验方法包括免疫印迹试验、条带免疫试验、放射免疫沉确证试验方法包括免

9、疫印迹试验、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验、免疫荧光试验等。淀试验、免疫荧光试验等。免疫印迹实验免疫印迹实验(WesternBlot，WB)是用以检测是用以检测HIV抗体的首选抗体的首选确证试验方法，其检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣确证试验方法，其检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的的“金标准金标准”。现在学习的是第13页，共52页以硝酸纤维素膜为载体的抗原条，组合了以硝酸纤维素膜为载体的抗原条，组合了HIV-1全病毒抗原和全病毒抗原和HIV-2gp36重组蛋白抗原。当抗原条与被检血清及对照血清接触重组蛋白抗原。当抗原条与被检血清及对照血清接触时，如血清标本有时，如血清标本有HIV

10、-1/HIV-2特异性抗体，将会与抗原条上的特异性抗体，将会与抗原条上的HIV-1/HIV-2gp36抗原结合。结合的抗体再与酶标二抗结合，抗原结合。结合的抗体再与酶标二抗结合，加入底物显色，观察结果判断。加入底物显色，观察结果判断。实验原理实验原理现在学习的是第14页，共52页1.HIV1/2抗原硝酸纤维膜条抗原硝酸纤维膜条20条条2.印迹缓冲液（印迹缓冲液（10）12ml3.漂洗缓冲液（漂洗缓冲液（10）60ml4.底物底物BCIP/NBT溶液溶液50ml5.结合物结合物70l6.HIV1/2阴性对照血清阴性对照血清70l7.HIV1弱阳性对照血清弱阳性对照血清70l8.HIV1强阳性对照

11、血清强阳性对照血清70l9.反应槽、摇床、移液管、吸引器反应槽、摇床、移液管、吸引器试剂与器材试剂与器材现在学习的是第15页，共52页操作步骤操作步骤1.取出反应槽，每一槽内加取出反应槽，每一槽内加2ml漂洗缓冲液。漂洗缓冲液。2.用用镊镊子子小小心心地地夹夹住住抗抗原原条条编编号号端端放放入入漂漂洗洗缓缓冲冲液液中中，编编号号面面朝朝上，每槽上，每槽1条，让溶液条，让溶液完全覆盖。完全覆盖。3.将反应槽放将反应槽放置摇床，摇动置摇床，摇动510分钟后吸弃漂洗液。分钟后吸弃漂洗液。4.每每槽槽加加入入印印迹迹缓缓冲冲液液2ml，然然后后分分别别加加入入20l待待检检血血清清或或血血浆，并用本试

12、剂盒中的对照血清作平行对照浆，并用本试剂盒中的对照血清作平行对照。6.在在室室温温下下将将反反应应槽槽在在摇摇床床上上摇摇动动60分分钟钟。旋旋摇摇完完毕毕后后，吸吸弃印迹缓冲液弃印迹缓冲液。现在学习的是第16页，共52页7.每每槽槽加加入入2ml漂漂洗洗缓缓冲冲液液，旋旋摇摇5分分钟钟后后，吸吸弃弃漂漂洗洗缓缓冲冲液，共漂洗液，共漂洗3次，每次次，每次5分钟。分钟。8.在每槽中加入在每槽中加入2ml结合物稀释液，旋摇结合物稀释液，旋摇45分钟。分钟。9.从槽中吸弃结合物稀释液，从槽中吸弃结合物稀释液，重复步骤重复步骤6。10.每槽中加入底物每槽中加入底物2ml，旋摇，旋摇15分钟。分钟。11

13、.吸吸去去底底物物液液，每每槽槽中中加加入入2ml蒸蒸馏馏水水，旋旋摇摇5分分钟钟后后，终终止反应止反应。将抗原条放于二张滤纸间吸干水分后观察结果。将抗原条放于二张滤纸间吸干水分后观察结果。现在学习的是第17页，共52页结果判断结果判断1.对照血清检测结果判定要求对照血清检测结果判定要求 HIV-1强强阳阳性性对对照照血血清清：必必需需出出现现gp160/gp120和和gp41、p24带带型型，以以及及p66、p55/p51、p34、p17带带型型判判定定为为阳阳性性，HIV-2gp36应为阴性。应为阴性。HIV-1弱弱阳阳性性对对照照血血清清：在在gp160、gp120和和gp41、p24带

14、带型型中中至至少少出出现现二二条条，判判定定为为阳阳性性。其其他他位位置置其其可可能能出出现现弱弱带带，但但对对分析并非必需。分析并非必需。HIV-2gp36应为阴性。应为阴性。HIV-2阳性对照血清：必需出现阳性对照血清：必需出现gp36重组蛋白带型。重组蛋白带型。阴性对照血清：应无上述的特异性带型出现。阴性对照血清：应无上述的特异性带型出现。现在学习的是第18页，共52页2.被检血清被检血清/血浆的判定标准血浆的判定标准有下列情况之一者判定为有下列情况之一者判定为HIV-1抗体阳性。抗体阳性。至少一条至少一条env带和一条带和一条pol带；带；至少一条至少一条env带和一条带和一条gag带

15、；带；至少一条至少一条env带、一条带、一条gag带和一条带和一条pol带；带；至少二条至少二条env带；带；有有HIV-2gp36重组蛋白带型出现者判定为重组蛋白带型出现者判定为HIV-2抗体阳性，需用抗体阳性，需用HIV2确认试剂进一步检测。确认试剂进一步检测。无无HIV抗体特异性带型出现者判定为抗体特异性带型出现者判定为HIV抗体阴性。抗体阴性。出现出现HIV特异性抗体带型，但带型不足以确认阳性者，判定特异性抗体带型，但带型不足以确认阳性者，判定为为HIV抗体可疑。抗体可疑。现在学习的是第19页，共52页注意事项注意事项1.实实验验中中必必须须同同时时设设定定HIV-1强强阳阳性性、HI

16、V-1弱弱阳阳性性和和HIV-1+2阴性血清对照。阴性血清对照。2.如如果果抗抗原原条条和和血血清清样样品品作作用用时时间间过过长长，阴阴性性样样品品也也可可能能出出现现弱弱带。带。3.凡溶血、脂血或混浊样品均为不宜检测标本。凡溶血、脂血或混浊样品均为不宜检测标本。4.试验中操作应注意生物安全。试验中操作应注意生物安全。5.底底物物显显色色时时间间，一一般般控控制制在在30分分钟钟内内。时时间间太太长长，本本底底变变深深；如如果果强强阳阳性性血血清清色色带带增增深深时时可可提提前前终终止止反反应应；若若弱弱阳阳性性对对照照血血清清色色带带较浅，可以适当延长反应时间。较浅，可以适当延长反应时间。

17、现在学习的是第20页，共52页临床意义临床意义用用于于在在初初筛筛试试剂剂判判断断为为HIV阳阳性性(如如ELISA法法)基基础础上上的的血血清清或或血血浆浆样样本本，进进行行确确证证是是否否为为HIV-1阳阳性性及及诊诊断断是否感染了是否感染了HIV-2。现在学习的是第21页，共52页思考题思考题1.HIV血清抗体检测的初筛实验和确认实验在检测血清抗体检测的初筛实验和确认实验在检测HIV感染的临感染的临床意义及实验原理上的差异？床意义及实验原理上的差异？2.免疫印记实验、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验及免疫免疫印记实验、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验及免疫荧光试验（荧光试验（IFA）等均可用

18、作）等均可用作HIV的确认实验，试分析免的确认实验，试分析免疫印记实验应用如此广泛的原因疫印记实验应用如此广泛的原因?第三军医大学第三军医大学 吴超吴超 现在学习的是第22页，共52页实验三实验三T细胞亚群的流式细胞仪检测细胞亚群的流式细胞仪检测现在学习的是第23页，共52页HIV感感染染可可导导致致免免疫疫系系统统中中CD4+T细细胞胞数数量量减减少少以以及及CD4+T细细胞胞/CD8+T细细胞胞比比例例失失调调，因因此此，CD4+T细细胞胞计计数数可可用用于于评价评价HIV感染者免疫状况，辅助临床进行疾病分期。感染者免疫状况，辅助临床进行疾病分期。CD4+T淋淋巴巴细细胞胞数数量量还还可可

19、评评估估HIV感感染染者者机机会会性性感感染染的的风风险，辅助判断是否进行预防性治疗。险，辅助判断是否进行预防性治疗。背景知识背景知识现在学习的是第24页，共52页CD4+和和CD8+T淋淋巴巴细细胞胞计计数数的的方方法法分分为为两两大大类类，一一类类是是应应用用流流式式细细胞胞仪仪测测定定法法，另另一一类类是是非非流流式式细细胞胞仪仪测测定定法法。其其中中，流流式式细细胞胞仪仪检检测测是是目目前前应应用用较较为为普普遍遍的的一一种种方方法法，包包括括多多平平台台法法和和单单平平台台法。法。单单平平台台法法仅仅需需要要流流式式细细胞胞仪仪进进行行群群体体细细胞胞的的相相对对计计数数。本本实实验

20、主要介绍单平台法对验主要介绍单平台法对T淋巴细胞的流式细胞检测。淋巴细胞的流式细胞检测。现在学习的是第25页，共52页流流式式细细胞胞仪仪可可检检测测单单细细胞胞或或微微粒粒的的信信号号，将将待待测测细细胞胞或或微微粒粒进进行行荧荧光光染染色色后后制制成成悬悬液液标标本本，在在一一定定气气体体压压力力下下将将待待测测样样品品压压入入流流动动室室，待待测测细细胞胞在在鞘鞘液液的的包包裹裹下下单单行行排排列列，依依次次通通过过流流式式细细胞胞仪仪的的检检测测区区域域。单单平平台台方方法法即即应应用用三三色色、四四色色流流式式试试剂剂配配以以内内参参绝绝对对计计数数微微球球，加加上上流流式式细细胞胞

21、仪仪淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群获获取取和和分分析析软软件件，一一步步即即可可获获得得T细细胞胞亚亚群群的的相相对对数数（百百分分比比）和和绝绝对对数数。通通过过使使用用已已知知数数量量的的参参考考微微球球为为内内参参，可可通通过过获获取取的的目目标标细细胞胞与与参参考考微微球球的的比比例例、参参考考微微球球数量和样品体积，得到每微升的淋巴细胞数量。数量和样品体积，得到每微升的淋巴细胞数量。实验原理实验原理现在学习的是第26页，共52页现在学习的是第27页，共52页1.TruCOUNT绝对计数管。绝对计数管。2.TriTEST三色试剂三色试剂CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP或或M

22、ultiTEST四色试剂四色试剂CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC。3.FACSLysingSolution（10X）蒸馏水（蒸馏水（0.45m过滤）配制成过滤）配制成1X浓度的溶血素；浓度的溶血素；4.PBS鞘液鞘液0.45m过滤；过滤；5.BDCaliBRITEBeads及及BDTruCOUNTcontrols。6.流式细胞仪。流式细胞仪。试剂与器材试剂与器材现在学习的是第28页，共52页操作步骤操作步骤1.标本制备：采集外周静脉血标本制备：采集外周静脉血2-3ml,EDTA-K3抗凝。标本抗凝。标本与试剂用前轻轻摇匀；与试剂用前轻轻摇匀；2.准确加入准确

23、加入20l荧光试剂和荧光试剂和50l全血，充分混匀；全血，充分混匀；3.充分混匀，室温（充分混匀，室温（2025）避光反应）避光反应15min；4.加入加入450lFACS溶血液溶血液(1X)，充分混匀；，充分混匀；5.充分混匀，室温（充分混匀，室温（2025）避光放置）避光放置15min；6.24h内流式检测。内流式检测。现在学习的是第29页，共52页单平台一步法由计算机软件直接出结果并打印出报告单，报告单的内容单平台一步法由计算机软件直接出结果并打印出报告单，报告单的内容包括如下：包括如下：项目项目单位单位参考正常值范围参考正常值范围CD3+/CD45+%56%85%CD3+绝对数绝对数个

24、个/l10272086CD3+CD8+/CD45+%15%34%CD3+CD8+绝对数绝对数个个/l323836CD3+CD4+/CD45+%30%54%CD3+CD4+绝对数绝对数个个/l7061125CD4+/CD8+比值比值12结果判断结果判断现在学习的是第30页，共52页注意事项注意事项1.用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂K2EDTA、K3EDTA、酸性、酸性枸橼酸葡萄糖溶液（枸橼酸葡萄糖溶液（ACD）或肝素抗凝）或肝素抗凝2.一般要求一般要求48h内染色，染色后内染色，染色后6h内分析。如采血后内分析。如采血后24h内染色，则可内染色，则可在染色后

25、在染色后24h内分析。内分析。3.在室温（在室温（1825）保存和运输样品，避免极端温度（结冰或大于）保存和运输样品，避免极端温度（结冰或大于37）。高温季节，需用隔热容器盛装样品，并将其置于有冰袋和吸）。高温季节，需用隔热容器盛装样品，并将其置于有冰袋和吸热物质的容器中。热物质的容器中。4.溶血、凝血或结冰的样品应视为不合格样品，超过检测允许时间的溶血、凝血或结冰的样品应视为不合格样品，超过检测允许时间的样品不可检测。样品不可检测。5.应报告所有相关数据的正常值范围，且每个实验室都应测定参应报告所有相关数据的正常值范围，且每个实验室都应测定参考数值。考数值。现在学习的是第31页，共52页临床

26、意义临床意义用用于于HIV感感染染者者的的疾疾病病分分期期：凡凡CD4+T淋淋巴巴细细胞胞200/l或或CD4+T淋巴细胞的百分比淋巴细胞的百分比14%的的HIV感染者可归入艾滋病。感染者可归入艾滋病。判判断断HIV感感染染的的临临床床合合并并症症：如如CD4+T淋淋巴巴细细胞胞200/l时时，易易发发生生卡卡氏氏肺肺囊囊虫虫肺肺炎炎；而而巨巨细细胞胞病病毒毒感感染染和和鸟鸟分分支支杆杆菌菌感感染染常常发发生生于于CD4+T淋淋巴巴细细胞胞50/l的的病病人人，极极少少见见于于CD4+T淋淋巴巴细细胞胞100/l的病人。的病人。现在学习的是第32页，共52页思考题思考题T淋巴细胞的流式细胞检测

27、技术包括多平台法和单淋巴细胞的流式细胞检测技术包括多平台法和单平台法，试述两种方法的差异？平台法，试述两种方法的差异？第三军医大学第三军医大学 吴吴 超超现在学习的是第33页，共52页临床见习：临床见习：HIV抗体初筛试验抗体初筛试验现在学习的是第34页，共52页了解了解HIV抗体初筛试验的实验室要求和检测流程与质量抗体初筛试验的实验室要求和检测流程与质量控制，熟悉用于控制，熟悉用于HIV抗体初筛试验的样品种类与采集要求，抗体初筛试验的样品种类与采集要求，掌握掌握HIV抗体初筛试验中抗体初筛试验中ELISA检测方法原理与结果分析。检测方法原理与结果分析。见习要点见习要点现在学习的是第35页，共

28、52页采采用用双双抗抗原原夹夹心心ELISA法法检检测测血血清清中中HIV（1+2）抗抗体体。HIV抗抗原原包包被被于于固固相相载载体体，加加入入待待检检样样品品和和酶酶标标记记的的HIV抗抗原原，形形成成抗抗原原抗抗体体酶酶标标抗抗原原复复合合物物，洗洗涤涤，加加底底物物显显色色。通通过过酶酶标标仪仪检检测测吸吸光光度度（OD值值），根根据据OD值值判判断断HIV抗抗体体的的存存在与否。在与否。基本原理基本原理现在学习的是第36页，共52页样品的采集与要求样品的采集与要求HIV抗体初筛试验可采用血清、血浆样品。抗体初筛试验可采用血清、血浆样品。1采样前准备采样前准备根据检测项目的具体要求，确

29、定采集样品的种类、处理、保存根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术规范的要求操作，遵守生及运输的时限和方法，按照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求。物安全要求。检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间。选择合适的室内（外）采血空间，一致，并注明样品采集时间。选择合适的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、受

30、检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。采血管及试管架、硬质废弃物容器等。现在学习的是第37页，共52页2采集和处理样品采集和处理样品血血浆浆：将将采采集集的的抗抗凝凝全全血血15003000r/min离离心心15min，上上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。血血清清：根根据据需需要要，用用一一次次性性注注射射器器（或或真真空空采采血血管管）抽抽取取510ml静静脉脉血血，室室温温下下自自然然放放置置12h，待待血血液液凝凝固固、血血块块收收缩缩后后再再用用15003000r/min离离心心15min

31、，吸吸出出血血清清，置置于于合合适适的容器中，备用。的容器中，备用。现在学习的是第38页，共52页3样品的保存样品的保存用用于于HIV抗抗体体检检测测的的血血清清或或血血浆浆样样品品，短短期期（1周周）内内进进行行检检测测的的可可存存放放于于28，一一周周以以上上应应存存放放于于-20以以下下。艾艾滋滋病病检检测测筛筛查查实实验验室室检检测测的的筛筛查查阳阳性性样样品品应应及及时时送送确确证证实实验验室室，而而筛筛查查阴阴性性样样品品，可可根根据据具具体体需需要要决决定定保保存存时时间间，建建议议至至少少保保存存12个个月月。特特殊殊用用途途或或专专项项项项目目的的样样品品根根据据具具体体要要

32、求求确定保存时间。确定保存时间。现在学习的是第39页，共52页4样品的运送样品的运送根根据据符符合合生生物物安安全全要要求求；要要获获得得相相应应部部门门批批准准并并由由具具有有资资质质的的人人员员专专程程护护送送。应应采采用用三三层层容容器器对对样样品品进进行行包包装装，随随样样品品应应附附有有与与样样品品唯唯一一性性编编码码相相对对应应的的送送检检单单。送送检检单单应应标标明明受受检检者者姓姓名名、样样品品种种类类等等信信息息，并并应应放放置置在在第第二二层层和和第第三三层容器之间。层容器之间。现在学习的是第40页，共52页1初筛试验初筛试验根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛

33、检测，根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（抗体阴性（-）报告；对呈阳性）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。筛查程序筛查程序现在学习的是第41页，共52页2复检试验复检试验对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则试剂进行复检试

34、验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告性反应，则报告HIV抗体阴性（抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图图图HIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行性反应，则应考虑进行HIV-1p24抗原或核酸检测，必要时进行随抗原或核酸检测，必要

35、时进行随访。访。艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。室可以直接进行确证试验。现在学习的是第42页，共52页3.初筛和复检流程初筛和复检流程图图HIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程样品样品初筛试验初筛试验筛查试剂筛查试剂阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应复检试验复检试验原原有有试试剂剂或或同同一一试试剂商不同原理试剂剂商不同原理试剂均阳性反应均阳性反应一阴一阳一阴一阳均阴性反应均阴性反应确证试验确证试验报告阴性报告阴性另一不同原理试剂或另另一不同原理试剂或另外两种不同试剂商试剂外两种不同试剂商试剂+现

36、在学习的是第43页，共52页4筛查试验结果的报告筛查试验结果的报告HIV抗体筛查试验用附表抗体筛查试验用附表1（见实验指导教材）（见实验指导教材）进行报进行报告，阴性反应报告为告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（抗体阴性（-）”；阳性反应报；阳性反应报告为告为“HIV抗体待复检抗体待复检”。现在学习的是第44页，共52页5筛查试验呈阳性反应样品的转送筛查试验呈阳性反应样品的转送如如需需送送上上级级实实验验室室进进行行复复检检，需需要要核核对对身身份份，补补充充个个人人信信息息（如如姓姓名名和和身身份份证证号号码码），必必要要时时采采集集第第二二份份血血样样，持持HIV抗抗体体筛筛查查报报告告，

37、送送当当地地艾艾滋滋病病筛筛查查中中心心实实验验室室，或或直直接接送送确确证证实实验验室室复复检检。HIV抗抗体体复复检检试试验验用用附附表表2（见见实实验验指指导导教教材材）进进行行报报告告，两两次次检检测测均均阳阳性性或或一一阴阴一一阳阳报报告告为为“HIV抗抗体体待待确确证证”；两两次次检检测测均均阴阴性性报报告告为为“HIV抗抗体体阴阴性性（-）”。HIV抗体复检报告需由抗体复检报告需由1名检验人员和名检验人员和1名审核人员签字。名审核人员签字。现在学习的是第45页，共52页质量控制质量控制1试剂盒内部对照试剂盒内部对照试试剂剂盒盒内内部部对对照照质质控控品品即即为为试试剂剂盒盒内内提

38、提供供的的阳阳性性和和阴阴性性对对照照血血清清。试试剂剂盒盒内内部部对对照照用用于于判判断断每每次次实实验验的的有有效效性性，但但不不能能作作为为室室内内质质控控品品使使用用。每每一一次次检检测测临临床床样样品品时时，必必须须有有试试剂剂盒盒内内部部对对照照，而而且且只只能能在在同同批批号号的的试试剂剂盒盒中中使使用用。内内部部对对照照结结果果无无效效，必必须重新试验。须重新试验。现在学习的是第46页，共52页2室内质控品室内质控品为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也复性而设置的，包括强阳

39、性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的的23倍为宜。外部质控品的作用是，判断该批临床样品倍为宜。外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。室内质控品可以是商品或实验结果无效，必须重新试验。室内质控品可以是商品或实验室自行制备。室自行制备。现在学习的是第47页，共52页3建立质控图建立质控图最常用的质控图是最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，该图使用累计和质控图，该图使

40、用累计和技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。现在学习的是第48页，共52页（1）建立质控图参数：外部质控品的均值和标准差应建立）建立质控图参数：外部质控品的均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对外部质控品重复测定的基础在实验室常规使用方法对外部质控品重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少上。一般采用在不同批次检测取得至少20个数据；如个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次的检测，每个批次中不少于个批次中不少于4个质控血清测定结果，以建立一个临个质控血清测定结果，以

41、建立一个临时性的均值和标准差，当达到时性的均值和标准差，当达到20批次数据后，替代临批次数据后，替代临时性的均值和标准差。时性的均值和标准差。（2）绘制质控图：质控图是把检测数据与已确定的（计算）绘制质控图：质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）出的）“控制限控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每批次试验质控血清的测定值。验室每批次试验质控血清的测定值。现在学习的是第49页，共52页（3）质控规则及其使用）质控规则及其使用:实验室在报告实验结果之前必须评实验室在

42、报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前有许多质控规则，常用的是结果来决定。目前有许多质控规则，常用的是12S和和13S规则。规则。告警（告警（12S）：当外部质控品的）：当外部质控品的S/CO值超出值超出+2s范围时，系统处于告警状态，范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。高的假失控概率，所以一般不采用。失控（失控（13S）：当外部质控品的）：当外部质控品

43、的S/CO值超出值超出+3s范围时，系统处于失控状态，范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性下稳定性下降所致。降所致。漂移：连续几次（漂移：连续几次（35次）外部质控品的次）外部质控品的S/CO值都落在均值的一侧则称为值都落在均值的一侧则称为漂移，提示实验条件发生了较大的变化。漂移，提示实验条件发生了较大的变化。趋势：连续几次（趋势：连续几次（57次）外部质控品的次）外部质控品的S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起由参

44、数的缓慢改变引起。现在学习的是第50页，共52页（4）质控图的分析及失控处理）质控图的分析及失控处理：实验室应建立质控图分析及实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的均值和标准差用于计算质控限，将假失控概要求可靠的均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时，对原有外部质控品重复测率降到最低。当出现失控时，对原有外部质控品重复测定或更换新的外部质控品进行测定不是最有效的方法，定或更换新的外部质控品进行测定不是最有效的方法，必须找出问题发生的原因，找出解除问题的方法，并消必须找出问题发生的

45、原因，找出解除问题的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。除原因，防止将来出现同样的问题。现在学习的是第51页，共52页4室内质控其他方式室内质控其他方式“即刻法即刻法”质控质控“即刻法即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即次后，即可对第可对第3次检验结果进行质控。具体计算方法如下：次检验结果进行质控。具体计算方法如下：（1）将质控血清的测定值从小到大排列：）将质控血清的测定值从小到大排列：x1、x2、x3xn（x1为为最小值，最小值，xn为最大值）。为最大值）。（2）计算）计算和和s。（3）计算）计算SI上限值上限值和和SI下限值。下限值。现在学习的是第52页，共52页