液相色谱吸附色谱 .ppt

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1、液相色谱吸附色谱液相色谱吸附色谱 现在学习的是第1页，共39页第一节第一节 吸附色谱吸附色谱一、基本原理一、基本原理 吸附色吸附色谱谱是根据所用的吸附是根据所用的吸附剂对剂对被分离物被分离物质质的吸附能力的吸附能力不同，在流不同，在流动动相作用下，使各相作用下，使各组组分分离的色分分离的色谱谱方法；其中固方法；其中固定相定相为为吸附吸附剂剂，一般，一般为为固体，所以又称液固色固体，所以又称液固色谱谱。要求：固定相固定相吸附吸附剂（硅胶或（硅胶或AL2O3）具有表面活性吸附中心具有表面活性吸附中心 现在学习的是第2页，共39页在吸附色在吸附色在吸附色在吸附色谱谱中中中中 t tR R=tmm（1

2、 1K Vs/VmVs/Vm）VR R=V=VmK K V VS S其中其中其中其中K K是吸附平衡常数，是吸附平衡常数，是吸附平衡常数，是吸附平衡常数，VsVs为为固定相，即吸附固定相，即吸附固定相，即吸附固定相，即吸附剂剂的吸附表面的吸附表面的吸附表面的吸附表面积积，也可以用吸附也可以用吸附也可以用吸附也可以用吸附剂剂的量来表示。的量来表示。的量来表示。的量来表示。M在吸附在吸附剂上存在着吸附平衡，即吸附上存在着吸附平衡，即吸附 解吸附；解吸附；M若若组分的吸附能力分的吸附能力强，则在吸附状在吸附状态时间长，解吸附状，解吸附状态时间短，即短，即tR大，保留大，保留时间长，K(K)大。大。现

3、在学习的是第3页，共39页分离机制：分离机制：吸附系数吸附系数注：注：K Ka与与组组分的性分的性质质、吸附、吸附剂剂的活性、流的活性、流动动相的性相的性质质 及温度有关及温度有关 nextnext吸附平衡吸附平衡 X Xmm+nYa a X Xa a+nYmm 现在学习的是第4页，共39页分离机制：分离机制：注：注：Ka与与组分的性分的性质、吸附、吸附剂的活性、流的活性、流动相的性相的性质 及温度有关及温度有关M分离机制：分离机制：各各组分与流分与流动相分子争相分子争夺吸附吸附剂表面活性中心表面活性中心 利用吸附利用吸附剂对不同不同组分的吸附能力差异而分的吸附能力差异而实现分离分离吸附吸附解

4、吸解吸再吸附再吸附再解吸再解吸无数次洗脱无数次洗脱分开分开 m.流流动相；相；a.吸附吸附剂；Xm.流流动相中溶相中溶质分子；分子；Ym.流流动相分子；相分子；Xa.被吸附的溶被吸附的溶质分子分子 现在学习的是第5页，共39页二、吸附等温线二、吸附等温线 吸附等温吸附等温线可用来描述分配系数可用来描述分配系数K（吸附平衡常（吸附平衡常数）随数）随组分分浓度度变化的化的规律。即在一定温度下，律。即在一定温度下，组分在吸附分在吸附剂上达到平衡上达到平衡时，用，用组分在固定相中的量分在固定相中的量（在固定相上被吸附着的（在固定相上被吸附着的浓度）度）对组分在流分在流动相中相中的的浓度（未被吸附）作度

5、（未被吸附）作图，即得吸附等温，即得吸附等温线。现在学习的是第6页，共39页1、线性等温性等温线TT K=tg=CK=tg=CS S/C/Cmm M特点特点：TT 组组分的分的分的分的K K为为一常数，不随一常数，不随一常数，不随一常数，不随组组分的分的分的分的浓浓度而度而度而度而变变化；化；化；化；TT虽虽然然然然组组分的前沿、中心、尾分的前沿、中心、尾分的前沿、中心、尾分的前沿、中心、尾部部部部浓浓度不等，但由于度不等，但由于度不等，但由于度不等，但由于K K与与与与浓浓度度度度无关，是常数，所以无关，是常数，所以无关，是常数，所以无关，是常数，所以组组分的分分的分分的分分的分子以相同的速

6、度迁移，得到完子以相同的速度迁移，得到完子以相同的速度迁移，得到完子以相同的速度迁移，得到完全全全全对对称的峰；称的峰；称的峰；称的峰；TT组组分的保留分的保留分的保留分的保留时间时间，不随，不随，不随，不随样样品的品的品的品的浓浓度而度而度而度而变变化。化。化。化。三种吸附等温线三种吸附等温线三种吸附等温线三种吸附等温线 现在学习的是第7页，共39页2、凸型等温、凸型等温线（Langmuir型等温型等温线）M特点：特点：TTK K是是是是浓浓度的函数，随度的函数，随度的函数，随度的函数，随浓浓度而度而度而度而变变化；化；化；化；TT当当当当组组分分分分浓浓度增大度增大度增大度增大时时，K K

7、减小，减小，减小，减小，组组分更分更分更分更多地分配于流多地分配于流多地分配于流多地分配于流动动相中；相中；相中；相中；TT对对于于于于组组分分分分谱带谱带中，不同中，不同中，不同中，不同浓浓度区域度区域度区域度区域的分子（前、中、后），因的分子（前、中、后），因的分子（前、中、后），因的分子（前、中、后），因浓浓度度度度不同，不同，不同，不同，K K不同；中心的不同；中心的不同；中心的不同；中心的浓浓度高，度高，度高，度高，K K小，迁移快；两小，迁移快；两小，迁移快；两小，迁移快；两头浓头浓度低，度低，度低，度低，K K大，大，大，大，迁移慢，形成拖尾峰；迁移慢，形成拖尾峰；迁移慢，形成拖

8、尾峰；迁移慢，形成拖尾峰；TT造成造成造成造成谱带谱带不不不不对对称，称，称，称，t tR R值值偏移，偏移，偏移，偏移，谱带谱带展展展展宽宽。现在学习的是第8页，共39页M原因：原因：TT吸附吸附吸附吸附剂剂上常存在一些上常存在一些上常存在一些上常存在一些强强烈的活性中心，当烈的活性中心，当烈的活性中心，当烈的活性中心，当组组分在吸附分在吸附分在吸附分在吸附剂剂上被吸上被吸上被吸上被吸附附附附时时，先占据活性能力最，先占据活性能力最，先占据活性能力最，先占据活性能力最强强的活性中心，然后占据次的活性中心，然后占据次的活性中心，然后占据次的活性中心，然后占据次强强的、弱的、弱的、弱的、弱的、最

9、弱的，的、最弱的，的、最弱的，的、最弱的，这样这样，当，当，当，当样样品量大品量大品量大品量大时时，少部分占据，少部分占据，少部分占据，少部分占据强强吸附中心；吸附中心；吸附中心；吸附中心；其它的在弱吸附中心，其它的在弱吸附中心，其它的在弱吸附中心，其它的在弱吸附中心，则则移移移移动动快，快，快，快，K K值值小，所以随小，所以随小，所以随小，所以随浓浓度的增大，度的增大，度的增大，度的增大，K K减小，移减小，移减小，移减小，移动动快。快。快。快。M克服方法：克服方法：TTa a、减少上减少上减少上减少上样样量，使之在量，使之在量，使之在量，使之在线线性容量内（性容量内（性容量内（性容量内（

10、线线性容量，即吸附等温性容量，即吸附等温性容量，即吸附等温性容量，即吸附等温线为线为线线性的区性的区性的区性的区间间所所所所对应对应的的的的组组分的分的分的分的浓浓度区度区度区度区间间）。）。）。）。TTb b、覆盖、覆盖、覆盖、覆盖强强活性中心（用极性物活性中心（用极性物活性中心（用极性物活性中心（用极性物质质），增大），增大），增大），增大线线性容量性容量性容量性容量TT用某种物用某种物用某种物用某种物质质覆盖覆盖覆盖覆盖强强活性中心，减低其吸附能力的活性中心，减低其吸附能力的活性中心，减低其吸附能力的活性中心，减低其吸附能力的过过程，叫程，叫程，叫程，叫减活。减活。减活。减活。现在学习的

11、是第9页，共39页3、凹型等温凹型等温线（反（反langmuir型等型等温温线）TT随随随随浓浓度大，度大，度大，度大，K K大；大；大；大；TT则浓则浓度大的区域移度大的区域移度大的区域移度大的区域移动动慢，形成慢，形成慢，形成慢，形成伸舌伸舌伸舌伸舌头头峰。峰。峰。峰。M原因：原因：TTa a、化学吸附、化学吸附、化学吸附、化学吸附TTb b、相、相、相、相对对于流于流于流于流动动相超相超相超相超载载，即当，即当，即当，即当样样品量品量品量品量过过大大大大时时，局部，局部，局部，局部浓浓度度度度过过高，流高，流高，流高，流动动相相相相对对其溶液能力有限，只能洗其溶液能力有限，只能洗其溶液能

12、力有限，只能洗其溶液能力有限，只能洗脱少量，所以脱少量，所以脱少量，所以脱少量，所以浓浓度低度低度低度低处处移移移移动动快。快。快。快。M克服：克服：TT减少上减少上减少上减少上样样量。量。量。量。现在学习的是第10页，共39页（一）吸附（一）吸附剂的的类型型M1、极性吸附、极性吸附剂TT吸附吸附吸附吸附剂剂表面是极性的，表面是极性的，表面是极性的，表面是极性的，选择选择性吸附极性大的化合物。性吸附极性大的化合物。性吸附极性大的化合物。性吸附极性大的化合物。极性极性极性极性强强，则则保留能力保留能力保留能力保留能力强强。M2、非极性吸附、非极性吸附剂TT吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、

13、易极化的吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易极化的吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易极化的吸附力主要靠色散力，即大分子量的化合物、易极化的化合物。化合物。化合物。化合物。三、常用吸附剂三、常用吸附剂 多孔、微粒状物质多孔、微粒状物质多孔、微粒状物质多孔、微粒状物质现在学习的是第11页，共39页（二）吸附（二）吸附剂的吸附能力（活性）的吸附能力（活性）M1、影响吸附、影响吸附剂吸附能力的因素：吸附能力的因素：TT吸附吸附剂的表面的表面积TT吸附吸附剂表面的化学表面的化学组成及表面原子或基成及表面原子或基团的的几何排列几何排列TT含水量（含水量（对极性吸附极性吸附剂来来讲）含水量越多

14、，含水量越多，含水量越多，含水量越多，则则吸附能力越弱吸附能力越弱吸附能力越弱吸附能力越弱现在学习的是第12页，共39页M2、吸附能力的定量指、吸附能力的定量指标活度活度TT活度：使吸附活度：使吸附活度：使吸附活度：使吸附剂剂的活性的活性的活性的活性标标准化，它反映了吸附准化，它反映了吸附准化，它反映了吸附准化，它反映了吸附剂剂的活性的活性的活性的活性与含水量的关系。与含水量的关系。与含水量的关系。与含水量的关系。TT方法：方法：方法：方法：BrockmanBrockman法法法法样样品：六种品：六种品：六种品：六种标标准染料（准染料（准染料（准染料（0.040.04 w/vw/v）10ml1

15、0ml（石油（石油（石油（石油醚醚溶解）溶解）溶解）溶解）色色色色谱谱柱：干法装柱，柱柱：干法装柱，柱柱：干法装柱，柱柱：干法装柱，柱长长5cm5cm将将将将样样品上柱，用品上柱，用品上柱，用品上柱，用20ml20ml洗脱洗脱洗脱洗脱剂剂（石油（石油（石油（石油醚醚苯苯苯苯 =4:1=4:1）洗）洗）洗）洗脱，用染料在柱上位置来确定吸附脱，用染料在柱上位置来确定吸附脱，用染料在柱上位置来确定吸附脱，用染料在柱上位置来确定吸附剂剂的活度。的活度。的活度。的活度。现在学习的是第13页，共39页现在学习的是第14页，共39页M3、活度、活度级别 I I 级级 V V 级级含水量含水量含水量含水量 增

16、大增大增大增大吸附能力吸附能力吸附能力吸附能力 降低降低降低降低活活活活 性性性性 下降下降下降下降现在学习的是第15页，共39页M4、活化、活化TT将吸附将吸附剂加加热，去除其吸附的水的，去除其吸附的水的过程。程。M5、减活、减活TT加入减活加入减活剂，降低吸附，降低吸附剂活性活性现在学习的是第16页，共39页（三）常用吸附（三）常用吸附剂硅胶、氧化硅胶、氧化铝 1、硅胶（、硅胶（SiO2xH2O）结构：内部构：内部硅氧交硅氧交联结构构多孔多孔结构构表面表面有硅醇基有硅醇基氢键作用作用吸附活性中心吸附活性中心 游离游离羟基基 键合合羟基基 硅硅醚结构（非极性，构（非极性，对极极性化合物不保留

17、）性化合物不保留）现在学习的是第17页，共39页特性：特性：1）与极性物）与极性物质或不或不饱和化合物形成和化合物形成氢键 物物质极性极性，吸附能力，吸附能力强极性吸附中心，不易洗脱极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水）吸水失活失活 105110OC烘干烘干30分分钟(可逆失水可逆失水)吸附力最大吸附力最大 500OC烘干烘干(不可逆失水不可逆失水)活性活性丧失，无吸附力失，无吸附力适用：适用：分析酸性或中性物分析酸性或中性物质 现在学习的是第18页，共39页 含水量含水量%硅胶的活性硅胶的活性 0 I 级级 5 II 级级 15 III 级级 25 IV 级级 38 V 级级 现在学习的是第19

18、页，共39页续前续前续前续前2、氧化、氧化铝：分离分离亲脂性成分脂性成分 活化：活化：400，6h 级 加入相加入相应的水的水 级TT 碱性氧化碱性氧化碱性氧化碱性氧化铝铝 pH 9pH 910 10 适于分析碱性、中性物适于分析碱性、中性物适于分析碱性、中性物适于分析碱性、中性物质质TT 中性氧化中性氧化中性氧化中性氧化铝铝 pHpH7.5 7.5 适于分析酸性碱性和中性物适于分析酸性碱性和中性物适于分析酸性碱性和中性物适于分析酸性碱性和中性物质质TT 酸性氧化酸性氧化酸性氧化酸性氧化铝铝 pH 4pH 45 5 适于分析酸性、中性物适于分析酸性、中性物适于分析酸性、中性物适于分析酸性、中性

19、物质质现在学习的是第20页，共39页 含水量含水量%氧化铝的活性氧化铝的活性 0 0 I I 级级级级 3 3 II 级级级级 6 III III 级级级级 10 IV 级级级级 15 15 V V 级级级级 现在学习的是第21页，共39页（四）极性吸附（四）极性吸附剂对化合物的化合物的选择性性M1、极性吸附、极性吸附剂选择性吸附极性大的化合物性吸附极性大的化合物M2、化合物的极性大小，由化合物的官能、化合物的极性大小，由化合物的官能团决定决定TT常常常常见见官能官能官能官能团团的极性大小：的极性大小：的极性大小：的极性大小：烷烷烯烯醚醚硝基化合物（二甲胺）硝基化合物（二甲胺）硝基化合物（二甲

20、胺）硝基化合物（二甲胺）酯类酯类 酮酮 醛醛硫醇胺硫醇胺硫醇胺硫醇胺类类酰酰胺胺胺胺醇酚醇酚醇酚醇酚羧羧酸酸酸酸TT判断化合物极性大小判断化合物极性大小判断化合物极性大小判断化合物极性大小时时：1.1.1.1.基基基基团团母核相同母核相同母核相同母核相同时时，则则分子中基分子中基分子中基分子中基团团的极性大，整个分子的极性大；极性基的极性大，整个分子的极性大；极性基的极性大，整个分子的极性大；极性基的极性大，整个分子的极性大；极性基团团多，极性大多，极性大多，极性大多，极性大2.2.2.2.分子中双分子中双分子中双分子中双键键多，吸附力多，吸附力多，吸附力多，吸附力强强；共；共；共；共轭轭双双

21、双双键键多，吸附力多，吸附力多，吸附力多，吸附力强强3.3.3.3.取代基的空取代基的空取代基的空取代基的空间间排列：排列：排列：排列：同一母核中，同一母核中，同一母核中，同一母核中，羟羟基基基基处处于能形成分子内于能形成分子内于能形成分子内于能形成分子内氢键氢键的位置，的位置，的位置，的位置，则则吸吸吸吸附力弱于不能形成分子内附力弱于不能形成分子内附力弱于不能形成分子内附力弱于不能形成分子内氢键氢键的位置。的位置。的位置。的位置。M3、非极性吸附、非极性吸附剂给出相反出相反顺序。序。现在学习的是第22页，共39页四、洗脱剂（流动相、溶剂）四、洗脱剂（流动相、溶剂）（一）洗脱（一）洗脱剂的洗脱

22、的洗脱强度（度（对组分分K值的影响）的影响）（二）洗脱（二）洗脱剂的的选择性性现在学习的是第23页，共39页（一）洗脱（一）洗脱剂（流（流动相）相）对组分分K值的影响的影响M1、在固定相上与、在固定相上与组分分子的分分子的竞争作用争作用TT溶溶溶溶剂剂极性极性极性极性强强 洗脱能力洗脱能力洗脱能力洗脱能力强强 溶溶溶溶剂强剂强度（度（度（度（0 0）大）大）大）大洗脱洗脱洗脱洗脱剂剂极性极性极性极性强强，易被吸附，易被吸附，易被吸附，易被吸附剂剂所吸附，即易将所吸附，即易将所吸附，即易将所吸附，即易将组组分分子从吸附分分子从吸附分分子从吸附分分子从吸附剂剂上置上置上置上置换换下下下下来，即洗脱

23、能力来，即洗脱能力来，即洗脱能力来，即洗脱能力强强，称之，称之，称之，称之为强为强洗脱洗脱洗脱洗脱剂剂或溶或溶或溶或溶剂强剂强度大。度大。度大。度大。M2、流、流动相相对组分的溶解能力分的溶解能力TT对组对组分溶解度大分溶解度大分溶解度大分溶解度大 洗脱能力洗脱能力洗脱能力洗脱能力强强 溶溶溶溶剂强剂强度（度（度（度（0 0）大）大）大）大吸附吸附吸附吸附剂对组剂对组分的吸附能力一定分的吸附能力一定分的吸附能力一定分的吸附能力一定时时，则则流流流流动动相相相相对组对组分的溶解能力越分的溶解能力越分的溶解能力越分的溶解能力越强强，组组分溶解在流分溶解在流分溶解在流分溶解在流动动相中越多，相中越多

24、，相中越多，相中越多，组组分的分的分的分的K K值值越小，移越小，移越小，移越小，移动动越快。越快。越快。越快。现在学习的是第24页，共39页M3、各种溶、各种溶剂的极性的极性顺序（即序（即强度度顺序）序）TT根据溶根据溶剂剂的极性判断（如前）的极性判断（如前）TT根据文献中根据文献中 0 0值值比比较较TT实验实验确定确定M4、混合溶、混合溶剂的的强度。度。TTP=aPa+bPb其中其中 为为体体积积分数；分数；P P为为极性参数极性参数现在学习的是第25页，共39页（二）洗脱（二）洗脱剂（流（流动相）的相）的选择性性M1、溶、溶剂与与组分分子之分分子之间的作用力的作用力TT色散作用、偶极作

25、用、色散作用、偶极作用、色散作用、偶极作用、色散作用、偶极作用、氢键氢键作用、介作用、介作用、介作用、介电电作用作用作用作用M2、溶、溶剂的分的分类TT以上四种作用力中，主要考以上四种作用力中，主要考以上四种作用力中，主要考以上四种作用力中，主要考虑虑偶极、偶极、偶极、偶极、氢键氢键作用力，作用力，作用力，作用力，按它按它按它按它们们的大小，把常用的溶的大小，把常用的溶的大小，把常用的溶的大小，把常用的溶剂剂分分分分类类 现在学习的是第26页，共39页常用溶常用溶剂分分类组别组别溶剂名称溶剂名称I I脂肪族醚、三烷基胺脂肪族醚、三烷基胺IIII脂肪醇脂肪醇IIIIII吡啶衍生物、吡啶衍生物、T

26、HFTHF、酰胺（除甲酰胺外）、乙二醇醚、亚砜、酰胺（除甲酰胺外）、乙二醇醚、亚砜IVIV乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸V VCHCH2 2ClCl2 2、二氯乙烷、二氯乙烷VIVI酮、酯、腈、聚酯酮、酯、腈、聚酯VIIVII卤代芳氢、芳氢、芳香醚、硝基化合物卤代芳氢、芳氢、芳香醚、硝基化合物VIIIVIII水、氯仿、间甲苯酚、氟烷醇水、氯仿、间甲苯酚、氟烷醇现在学习的是第27页，共39页现在学习的是第28页，共39页M3、溶、溶剂选择性性TT处处于同一于同一于同一于同一组组的溶的溶的溶的溶剂剂，在色，在色，在色，在色谱谱分离中具有相似的分离中具有相似的分离中具有相似

27、的分离中具有相似的选择选择性；性；性；性；TT在分在分在分在分组组三角形中相差三角形中相差三角形中相差三角形中相差较远较远的的的的组组中的溶中的溶中的溶中的溶剂剂，其，其，其，其选择选择性相差性相差性相差性相差较较大：大：大：大：组组：良好的：良好的：良好的：良好的质质子受体（子受体（子受体（子受体（醚醚、胺等），、胺等），、胺等），、胺等），优优先与含先与含先与含先与含羟羟基化合物（如酚、基化合物（如酚、基化合物（如酚、基化合物（如酚、羧羧酸等）作用；酸等）作用；酸等）作用；酸等）作用；组组：既可作：既可作：既可作：既可作为质为质子受体，又可作子受体，又可作子受体，又可作子受体，又可作为质为

28、质子子子子给给体；体；体；体；组组：良好的：良好的：良好的：良好的质质子子子子给给体溶体溶体溶体溶剂剂（HH2 2OO、CHClCHCl3 3等），与碱性等），与碱性等），与碱性等），与碱性样样品品品品优优先作用。先作用。先作用。先作用。组组（硝基化合物、（硝基化合物、（硝基化合物、（硝基化合物、腈腈、胺等）：与偶极矩大的、胺等）：与偶极矩大的、胺等）：与偶极矩大的、胺等）：与偶极矩大的组组分之分之分之分之间间的作用的作用的作用的作用力大。力大。力大。力大。M4、改善、改善选择性性TT根据根据根据根据组组分的性分的性分的性分的性质质，选择选择合适的溶合适的溶合适的溶合适的溶剂剂。TT利用多元溶

29、利用多元溶利用多元溶利用多元溶剂剂，既可，既可，既可，既可调节调节K K值值，又可，又可，又可，又可调节选择调节选择性。性。性。性。现在学习的是第29页，共39页M3、溶、溶剂选择性性TT处处于同一于同一于同一于同一组组的溶的溶的溶的溶剂剂，在色，在色，在色，在色谱谱分离中具有相似的分离中具有相似的分离中具有相似的分离中具有相似的选择选择性；性；性；性；M4、改善、改善选择性性TT根据根据根据根据组组分的性分的性分的性分的性质质，选择选择合适的溶合适的溶合适的溶合适的溶剂剂。TT利用多元溶利用多元溶利用多元溶利用多元溶剂剂，既可，既可，既可，既可调节调节K K值值，又可，又可，又可，又可调节选

30、择调节选择性。性。性。性。现在学习的是第30页，共39页吸附吸附剂、被分离物、被分离物质、流、流动相的相的选择原原则现在学习的是第31页，共39页五、吸附色谱分离体系的系统选择五、吸附色谱分离体系的系统选择（一）（一）选择固定相（吸附固定相（吸附剂）（二）洗脱（二）洗脱剂的的选择（流（流动相的相的选择）现在学习的是第32页，共39页（一）（一）选择固定相（吸附固定相（吸附剂）M1、固定相的吸附能力、固定相的吸附能力：TT极性固定相：极性固定相：组分分子极性官能分分子极性官能团多，多，则吸附作用吸附作用强。分离极性分离极性组分分TT非极性固定相：分离非极性非极性固定相：分离非极性组分分M3、固定

31、相的、固定相的预处理理TT活度活度级别、活化、减活、活化、减活 现在学习的是第33页，共39页（二）洗脱（二）洗脱剂的的选择（流（流动相的相的选择）选择选择流流流流动动相相相相时时，需同，需同，需同，需同时对时对固定相、流固定相、流固定相、流固定相、流动动相及相及相及相及组组分的性分的性分的性分的性质质全面考全面考全面考全面考虑虑。M1、对溶溶剂的要求的要求:TT稳稳定、粘度低、能溶解定、粘度低、能溶解定、粘度低、能溶解定、粘度低、能溶解样样品，浸品，浸品，浸品，浸润润固定相、高固定相、高固定相、高固定相、高纯纯度、度、度、度、挥发挥发性好、性好、性好、性好、安全价廉安全价廉安全价廉安全价廉M

32、2、一般步、一般步骤根据固定相和根据固定相和根据固定相和根据固定相和组组分的性分的性分的性分的性质质，选择选择一合适一合适一合适一合适强强度的溶度的溶度的溶度的溶剂剂，使，使，使，使K K 值值在在在在2 25 5范范范范围围内，即内，即内，即内，即选选用不同溶用不同溶用不同溶用不同溶剂调节剂调节K K=2=25 5。若在一定若在一定若在一定若在一定n n下，不能很好分离，下，不能很好分离，下，不能很好分离，下，不能很好分离，则则需改善系需改善系需改善系需改善系统统的的的的选择选择性，此性，此性，此性，此时时可根据可根据可根据可根据组组分的性分的性分的性分的性质质，选选用二元溶用二元溶用二元溶

33、用二元溶剂剂系系系系统统来改善来改善来改善来改善选择选择性，同性，同性，同性，同时时保保保保持一定的溶持一定的溶持一定的溶持一定的溶剂强剂强度，即使度，即使度，即使度，即使K K 在在在在2 25 5。可通可通可通可通过实验选择过实验选择不同不同不同不同组别组别的溶的溶的溶的溶剂剂来来来来筛选筛选。若二元溶若二元溶若二元溶若二元溶剂剂仍不凑效，可仍不凑效，可仍不凑效，可仍不凑效，可试试用三元溶用三元溶用三元溶用三元溶剂剂。现在学习的是第34页，共39页六、实验操作基本技术六、实验操作基本技术 经经典柱色典柱色典柱色典柱色谱谱 图图示示示示M1、装柱：将固定相装入柱管内、装柱：将固定相装入柱管内

34、柱管：玻璃柱、石英柱、尼柱管：玻璃柱、石英柱、尼柱管：玻璃柱、石英柱、尼柱管：玻璃柱、石英柱、尼龙龙柱，柱，柱，柱，柱径柱径柱径柱径:柱柱柱柱长长1:101:102020TT方法：方法：方法：方法：干法装柱干法装柱干法装柱干法装柱湿法装柱湿法装柱湿法装柱湿法装柱TT注意事注意事注意事注意事项项:倾倾入入入入时时，一次性，一次性，一次性，一次性连续倾连续倾入柱子，以免由于入柱子，以免由于入柱子，以免由于入柱子，以免由于颗颗粒大小不粒大小不粒大小不粒大小不同，沉降速度不同，引起柱子出同，沉降速度不同，引起柱子出同，沉降速度不同，引起柱子出同，沉降速度不同，引起柱子出现现的分的分的分的分层层。搅搅拌

35、要均匀（除气泡），洗脱拌要均匀（除气泡），洗脱拌要均匀（除气泡），洗脱拌要均匀（除气泡），洗脱过过程中不能有气泡。程中不能有气泡。程中不能有气泡。程中不能有气泡。固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定固定相粒度要均匀，即装成的柱子密度要均匀，固定相粒度大小要均匀。相粒度大小要均匀。相粒度大小要均匀。相粒度大小要均匀。现在学习的是第35页，共39页M2、上、上样：TT方法：方法：液体上液体上液体上液体上样样：即将：即将：即将：即将样样品溶液加到色品溶液加到色品溶液加到色品溶液加到色谱谱柱柱柱柱顶顶

36、即可。即可。即可。即可。固体上固体上固体上固体上样样：用一定的固定相与：用一定的固定相与：用一定的固定相与：用一定的固定相与样样品溶液拌匀，品溶液拌匀，品溶液拌匀，品溶液拌匀，挥挥干干干干溶溶溶溶剂剂，将，将，将，将带样带样品的固定相均匀地加到柱品的固定相均匀地加到柱品的固定相均匀地加到柱品的固定相均匀地加到柱顶顶。适用于。适用于。适用于。适用于干柱或大量干柱或大量干柱或大量干柱或大量样样品分离（粗柱子）品分离（粗柱子）品分离（粗柱子）品分离（粗柱子）TT注意事注意事项：要使要使要使要使样样品品品品谱带谱带窄、均匀、平整窄、均匀、平整窄、均匀、平整窄、均匀、平整不能使柱内不能使柱内不能使柱内不

37、能使柱内产产生气泡生气泡生气泡生气泡 现在学习的是第36页，共39页M3、洗脱、洗脱TT方法：方法：固定洗脱固定洗脱固定洗脱固定洗脱剂剂洗脱洗脱洗脱洗脱分分分分级级洗脱洗脱洗脱洗脱梯度洗脱梯度洗脱梯度洗脱梯度洗脱TT注意：注意：洗脱洗脱洗脱洗脱过过程中不能使柱子流干，即不能使柱子程中不能使柱子流干，即不能使柱子程中不能使柱子流干，即不能使柱子程中不能使柱子流干，即不能使柱子产产生气泡。生气泡。生气泡。生气泡。分分分分级级或梯度洗脱或梯度洗脱或梯度洗脱或梯度洗脱时应时应先用弱洗脱先用弱洗脱先用弱洗脱先用弱洗脱剂剂，后用，后用，后用，后用强强洗脱洗脱洗脱洗脱剂剂。控制流速控制流速控制流速控制流速 现在学习的是第37页，共39页M4、收集与、收集与鉴定定TT收集收集时应注意：注意：不不不不污污染染染染分段收集分段收集分段收集分段收集回收溶回收溶回收溶回收溶剂时剂时注意保注意保注意保注意保护护分子分子分子分子结结构构构构现在学习的是第38页，共39页Column Chromatography图示图示图示图示back现在学习的是第39页，共39页