实验四病源性球菌与杆菌讲稿.ppt

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1、关于实验四病源性球菌与杆菌第一页，讲稿共三十九页哦二、实验内容二、实验内容1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示示教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ss培培养基）的生化反应。养基）的生化反应。3.化脓性球菌的鉴定化脓性球菌的鉴定三种葡萄球菌的色素观察三种葡萄球菌的色素观察乙型链球菌的溶血现象观察乙型链球菌的溶血现象观察抗抗“O”实验。实验。第二页，讲稿共三十九页哦三、作业：1.镜下绘出4种形态图2.根据生化特性及产生色素，葡萄球菌分为哪几种类型

2、？第三页，讲稿共三十九页哦实验四实验四 病原性球菌病原性球菌1.1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性五类病原性球菌的形态、排列及染色性2.2.葡萄球菌、链球菌的培养物葡萄球菌、链球菌的培养物3.3.血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验-玻片法玻片法 4 4、抗链球菌溶血素、抗链球菌溶血素”O”O”（ASOASO）乳胶试验）乳胶试验示教示教示教示教（操作，（操作，1人人/组）组）示教示教示教示教示教示教示教示教示教示教示教示教第四页，讲稿共三十九页哦 G+球菌：球菌：金葡菌金葡菌链球菌链球菌肺炎双球菌肺炎双球菌1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性五类病原性球菌的形态、排列及染色性示教示教第五页，讲稿

3、共三十九页哦 G-球菌：球菌：淋球菌淋球菌 脑膜炎球菌脑膜炎球菌第六页，讲稿共三十九页哦2.葡萄球菌、链球菌的培养物葡萄球菌、链球菌的培养物示教示教 普通琼脂平板普通琼脂平板 血平板血平板 菌落形状菌落形状 色素色素 溶血性溶血性 金葡金葡 圆形凸起光滑中等大小圆形凸起光滑中等大小 金黄色金黄色 +柠葡柠葡 同上同上 柠檬色柠檬色 -白葡白葡 同上同上 白色白色 -表表1第七页，讲稿共三十九页哦 血平板血平板甲型链球菌甲型链球菌 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环乙型链球菌乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环针尖小菌落、透明宽大溶血环 巧克力血平板巧克力血平板脑膜炎双球

4、菌脑膜炎双球菌 菌落透明似露滴状菌落透明似露滴状 表表2 表表3第八页，讲稿共三十九页哦血浆凝固酶试验 ：凝固酶分类游离凝固酶：为分泌到菌体外的类似凝血酶原样物质，被血浆中的协同因子激活而作用于纤维蛋白原使血浆凝固。（试管法测定）结合凝固酶：是一种结合于菌体胞壁的凝固酶，是一种纤维蛋白原受体，使细菌凝聚成团成块块。（玻片法测定）第九页，讲稿共三十九页哦3.血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验-玻片法玻片法（操作，（操作，1人人/组）组）方法：方法：兔血浆兔血浆 兔血浆兔血浆 生理盐水生理盐水 123金葡金葡 白葡白葡 金葡金葡 +凝集（凝集（+）不凝集（不凝集（-）不凝集（不凝集（-）第十页，讲稿共三

5、十九页哦4、抗链球菌溶血素、抗链球菌溶血素“O”（ASO）快速胶乳法快速胶乳法 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平 的抗体后，还有多余的抗体后，还有多余ASOASO，这些多余抗体即与，这些多余抗体即与SLOSLO胶乳胶乳 试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。（操作，（操作，1人人/组）组）原理：原理：第十一页，讲稿共三十九页哦 阳性对照阳性对照 阴性对照阴性对照 待测血清待测血清 各加溶血素各加溶血素“O O”1 1滴轻摇滴轻摇1min1min 再加再加SLOSLO胶乳胶乳1 1滴轻摇滴轻摇3min3min 观察

6、结果观察结果 方法：方法：第十二页，讲稿共三十九页哦稀释度稀释度 ASO（IU/ml）1：15 4001：30 8001：60 1600ASO250 IU/ml 阴性阴性 结果判定：结果判定：第十三页，讲稿共三十九页哦注意事项：注意事项：1.液体量要一样，菌量一样。液体量要一样，菌量一样。2.血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点，血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点，不能干。不能干。3.涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂 凝集物可被涂散，变阴性。凝集物可被涂散，变阴性。第十四页，讲稿共三十九页哦肠道杆菌一、肠道杆菌的形态及染色性 二、肠道杆菌的培养特性 三、肠道杆

7、菌的生化反应特点 四、Widal实验第十五页，讲稿共三十九页哦肠道杆菌的形态及染色片第十六页，讲稿共三十九页哦肠道菌的菌落形态EMB 大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。伤寒 痢疾：菌落无色半透明。SS D大肠：大而不透明的红色菌落。伤寒 痢疾：中等大小淡黄色菌落。第十七页，讲稿共三十九页哦大肠杆菌（EMB培养基）第十八页，讲稿共三十九页哦肠道致病菌（SS培养基）第十九页，讲稿共三十九页哦粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定 第二十页，讲稿共三十九页哦生化反应1单糖发酵葡萄糖及乳糖发酵 一）实验目的与原理 了解糖发酵试验方法 二）实验材料 1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物 2、培养基：

8、乳糖及葡萄糖发酵管 三）实验方法、用接种环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种于葡萄糖及乳糖发酵管中（方法同前）。2、37孵育1824小时，取出观察结果。第二十一页，讲稿共三十九页哦动力检测第二十二页，讲稿共三十九页哦菌名 葡萄糖 甘露醇 乳糖靛基质 甲基红 VP 试验 枸椽 酸盐 硫化氢 尿素 分解 动力 福氏志贺菌+/+伤寒沙门菌+/+乙型副伤寒沙门菌 +大肠杆菌 +产气杆菌 +普通变形杆菌 +/+常见肠道杆菌的生化反应鉴别表常见肠道杆菌的生化反应鉴别表 第二十三页，讲稿共三十九页哦斜面 底部 H2S 初步鉴定+非病原菌 非病原菌 +/副伤寒杆菌及其他沙门氏菌 +伤寒杆菌 +痢疾杆菌 铁质双糖琼

9、脂基上各种肠道杆菌的生长情况铁质双糖琼脂基上各种肠道杆菌的生长情况 第二十四页，讲稿共三十九页哦肠道杆菌在KI培养基上的培养特性第二十五页，讲稿共三十九页哦Indol实验生化反应2Indol实验第二十六页，讲稿共三十九页哦2.肠道杆菌在肠道杆菌在SS培养基上的生长现象培养基上的生长现象示教示教 大肠杆菌大肠杆菌 伤寒杆菌伤寒杆菌SS平板平板 红色大菌落红色大菌落 无色透明小菌落无色透明小菌落 基础培养基，乳糖基础培养基，乳糖(底物底物)，胆盐、煌绿，胆盐、煌绿(抑制非致病菌抑制非致病菌)，中性红（指示剂）。，中性红（指示剂）。SS培养基：培养基：第二十七页，讲稿共三十九页哦3.五类肠道杆菌的生

10、化反应及动力五类肠道杆菌的生化反应及动力 示教示教大肠杆菌大肠杆菌 -+/变形杆菌变形杆菌 -+/-+-/乙型副伤乙型副伤寒杆菌寒杆菌 -+-+-/伤寒杆菌伤寒杆菌 +-+/-+-/+痢疾杆菌痢疾杆菌 +-+/-/+葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖 H2S 尿素尿素 靛基质靛基质 动力动力 双糖铁双糖铁第二十八页，讲稿共三十九页哦4.肠道杆菌未知菌肠道杆菌未知菌1和未知菌和未知菌2的鉴定的鉴定（操作，（操作，2人人/组）组）未知菌未知菌双糖铁培养基双糖铁培养基(乳糖乳糖/固体固体/上，葡萄糖上，葡萄糖/半固体半固体/下下)生化反应生化反应葡萄糖发酵葡萄糖发酵乳糖发酵乳糖发酵尿素酶试验尿素酶试验H2S试验

11、试验靛基质试验（靛基质试验（蛋白胨水液体培养基蛋白胨水液体培养基）动力试验（动力试验（半固体培养基半固体培养基）（微量发酵管微量发酵管）方法：方法：血清学鉴定（玻片凝集反应）血清学鉴定（玻片凝集反应）（371824h）第二十九页，讲稿共三十九页哦伤寒诊断血清伤寒诊断血清 伤寒诊断血清伤寒诊断血清 +未知菌未知菌1 未知菌未知菌2血清学鉴定（玻片凝集反应）血清学鉴定（玻片凝集反应）？第三十页，讲稿共三十九页哦 结果：结果：双糖铁双糖铁 葡葡 乳乳 尿尿 H2S 靛靛 动力动力 血清学血清学 未知菌未知菌1未知菌未知菌2 结论：结论：未知菌未知菌1：？：？未知菌未知菌2：？：？第三十一页，讲稿共三

12、十九页哦第三十二页，讲稿共三十九页哦 管号加入物12345血清（Ab）1：250血清0.25ml1:500血清0.25ml1:750血清0.25ml缓冲液0.25ml0.25ml溶血素“O”(Ag)0.25ml0.25ml0.25ml0.25ml2%兔RBC0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml结果第三十三页，讲稿共三十九页哦Salmonella-Shigella Mediun主要成分主要成分 基础营养基础营养 乳糖乳糖 指示剂指示剂 抑制剂抑制剂分解乳糖分解乳糖不分解乳糖不分解乳糖产酸产酸PH指示剂变红色指示剂变红色红色大菌落红色大菌落大肠杆菌等大肠杆菌等无明显变化无明显变化无色半透明小菌落无色半透明小菌落志贺菌等志贺菌等第三十四页，讲稿共三十九页哦大肠杆菌痢疾杆菌第三十五页，讲稿共三十九页哦第三十六页，讲稿共三十九页哦结核分枝杆菌抗酸染色第三十七页，讲稿共三十九页哦乙型溶血性链球菌溶血环第三十八页，讲稿共三十九页哦感谢大家观看第三十九页，讲稿共三十九页哦