单克隆抗体讲稿.ppt

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1、关于单克隆抗体第一页，讲稿共二十七页哦发明单克隆抗体技术发明单克隆抗体技术Nobel Prize in 1984Nobel Prize in 1984第二页，讲稿共二十七页哦抗体发展的三个阶段抗体发展的三个阶段单克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体基因工程抗体多克隆抗血清多克隆抗血清第三页，讲稿共二十七页哦传统传统抗血清抗血清抗抗 原原免免 疫疫所有抗所有抗体体混合混合1 23412341 234脾脾脾脾 脏脏脏脏淋巴結淋巴結淋巴結淋巴結B B B B 細胞細胞細胞細胞第四页，讲稿共二十七页哦细胞工程杂交瘤技术鼠鼠单单抗抗人人单单抗抗大鼠大鼠小鼠小鼠产量高、操作比小产量高、操作比小鼠麻烦鼠麻烦 少用

2、少用易操作、多用易操作、多用HAMAHAMA反应反应人人杂交瘤人人杂交瘤人人B B细胞、骨髓瘤细细胞、骨髓瘤细胞融合胞融合人鼠杂交瘤人鼠杂交瘤人人B B细胞、鼠骨髓瘤细胞、鼠骨髓瘤细胞融合细胞融合杂交瘤制备人单抗的问题：染色体易丢失、抗体分泌不稳定杂交瘤制备人单抗的问题：染色体易丢失、抗体分泌不稳定第五页，讲稿共二十七页哦美国已上市美国已上市16种单克隆抗体药物种单克隆抗体药物 2002年销售额年销售额 29亿美元亿美元 2005年年 90亿美元亿美元我国的单克隆抗体药物市场还处于起步阶我国的单克隆抗体药物市场还处于起步阶段。段。第六页，讲稿共二十七页哦抗体药物销售趋势图抗体药物销售趋势图第七

3、页，讲稿共二十七页哦抗抗体体 是是对对其抗原有其抗原有极强专极强专一性一性 的的魔魔弹弹 或或 巡弋巡弋飞弹飞弹研研研研 究究究究以以以以免免免免疫疫疫疫转转转转印法印法印法印法检测检测检测检测 特定抗原特定抗原特定抗原特定抗原医医医医 疗疗疗疗以毒素以毒素以毒素以毒素连结连结连结连结抗体攻抗体攻抗体攻抗体攻击击击击 病病病病变变变变細胞細胞細胞細胞检检检检 验验验验以以以以 ELISA ELISA ELISA ELISA 侦测侦测侦测侦测特定特定特定特定 病原体病原体病原体病原体第八页，讲稿共二十七页哦SDA批准进入临床的治疗用单抗批准进入临床的治疗用单抗抗抗T细胞免疫毒素细胞免疫毒素抗抗C

4、-ALL免疫毒素免疫毒素131I-抗肝癌单克隆抗体抗肝癌单克隆抗体抗人抗人CD25单克隆抗体单克隆抗体抗乙脑单克隆抗体抗乙脑单克隆抗体抗流行性出血热抗体抗流行性出血热抗体抗人抗人CD3单克隆抗体单克隆抗体抗人抗人IL-8单克隆抗体单克隆抗体第九页，讲稿共二十七页哦抗体治疗疾病的机制抗体治疗疾病的机制抗原失活免疫效应细胞吞噬抗原表面弱化易受补体破坏第十页，讲稿共二十七页哦单抗研发的演变历程单抗研发的演变历程鼠单抗鼠单抗100%鼠源鼠源OKT-3PanorexZevalin鼠鼠/人嵌合单抗人嵌合单抗(66-75%人源人源)ReoPro,RituxanRemicadeSimulect人源化单抗人源化

5、单抗(90-95%人源人源)Zenapax,Mylotarg,Herceptin,CampathSynagis100%人源人源 第十一页，讲稿共二十七页哦抗体攻击病毒抗体攻击病毒第十二页，讲稿共二十七页哦凝凝集集细细菌菌第十三页，讲稿共二十七页哦抗抗 SARS 的的单单抗抗SARS-CoV第十四页，讲稿共二十七页哦第十五页，讲稿共二十七页哦Epitope,Antigenic determinantEpitope,Antigenic determinant抗原決定基 一一个个抗原分子上可能抗原分子上可能有有数个数个抗原決定基抗原決定基 每個每個 抗原決定基抗原決定基 至少誘生一種至少誘生一種專一

6、性抗体專一性抗体 蛋白蛋白质质性性 抗原決定基抗原決定基 含有含有六六个个以上以上氨氨基酸基酸第十六页，讲稿共二十七页哦1 多克隆抗血清多克隆抗血清对健康人用疫苗进行主动免疫，对健康人用疫苗进行主动免疫，免疫前（免疫前（a a）和免疫后）和免疫后1010天天 （b b）分别采血并对血清蛋）分别采血并对血清蛋白进行凝胶电泳分析。免白进行凝胶电泳分析。免疫前血清中的疫前血清中的g g 球蛋白条带球蛋白条带较宽，免疫之后则相对集较宽，免疫之后则相对集中。中。Bruton Bruton 氏病患者血清氏病患者血清蛋白中的蛋白中的 球蛋白条带缺失球蛋白条带缺失（c c）。）。a a1 a a2b b 白蛋

7、白白蛋白球蛋白球蛋白（c）（a）（b）第十七页，讲稿共二十七页哦 绵羊红细胞的制备流程图绵羊红细胞的制备流程图 摇动摇动15-20min15-20min 44可可保保存存3 3周周 取适量取适量 NSNS洗涤洗涤3 3次次2000r/min2000r/min 10min 10minNSNS稀释至稀释至 2 25%5%第十八页，讲稿共二十七页哦 细菌细胞抗原的制备流程图细菌细胞抗原的制备流程图液体培养或液体培养或 斜面培养斜面培养 3724h3724h100100水浴水浴 2 22.5h2.5h 杀菌杀菌无菌试验无菌试验NSNS稀释成稀释成8 81010亿亿/ml/mlO O菌体抗原菌体抗原第十

8、九页，讲稿共二十七页哦杂交瘤技术过程杂交瘤技术过程第二十页，讲稿共二十七页哦第二十一页，讲稿共二十七页哦可生可生产产有用抗有用抗体体的的 淋巴細胞淋巴細胞 若若与与 癌癌细细胞胞融合，融合，则则形成形成稳稳定而可培定而可培养养的的细细胞胞株株。癌细胞可培养生长浆细胞B cell可分泌抗体融合瘤HybridomaYYYYYYYYYYYYYYYYYY细胞融合两组两组染色体混在一起染色体混在一起也可以培也可以培养养生長生長产产生生专专一性抗一性抗体体一個個 B cell 只只产产生一生一种种抗抗体体第二十二页，讲稿共二十七页哦1234mmmm12341234单单抗抗细细胞融合胞融合取出脾細胞取出脾細

9、胞+癌細胞癌細胞各抗各抗体体分分开开第二十三页，讲稿共二十七页哦(3)(3)鼠单抗人源化鼠单抗人源化将小鼠将小鼠IgIg基因敲除，转染人基因敲除，转染人IgIg基因，在小基因，在小鼠体内产生人鼠体内产生人AbAb，再经杂交瘤技术，产生，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体大量完全人源化抗体恒定区人源化恒定区人源化人人-鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体可变区人源化可变区人源化人改型抗体人改型抗体用抗体库技术进行人源化用抗体库技术进行人源化第二十四页，讲稿共二十七页哦鼠单抗人源化鼠单抗人源化第二十五页，讲稿共二十七页哦Pr 鼠鼠VH 人人 CH Pr 鼠鼠VL 人人 CL免疫球蛋白免疫球蛋白基因载体的构建基

10、因载体的构建H链嵌合载体链嵌合载体L 链嵌合载体链嵌合载体共转染细胞共转染细胞启动子启动子人人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略鼠嵌合抗体基因工程改造策略 第二十六页，讲稿共二十七页哦定义：定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V V）中互）中互补决定簇（补决定簇（CDRCDR）序列改换成鼠源单抗）序列改换成鼠源单抗CDRCDR序列。重构成序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAbRAb亦叫亦叫“重构型抗体重构型抗体”，因其主要涉及，因其主要涉及CDRCDR的的“移植移植”，又可称为，又可称为“CDRCDR移植抗体移植抗体意义：意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗人改型抗体（人改型抗体（CDRCDR移植）移植）人源化抗体又称人源化抗体又称CDRCDR移植抗体移植抗体第二十七页，讲稿共二十七页哦