大肠菌群能力验证.pdf

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1、大肠菌群能力验证 一、实验前期准备：1、检测项目：大肠菌群、大肠杆菌 2、检测依据标准：GB 4789.3-2016 3 3、确认实验方案：把所涉及的试剂进行排查，查询是否缺某种试剂；根据检验标准，整理实验流程图，便于记录实验结果。4、配置所需培养基：无菌生理盐水、结晶紫中性红胆盐琼脂、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)肉汤等。二、实验操作：1、收到样品后，确认样品包装是否完好，并将其保存在 28冰箱中。2、实验步骤 2.1、样品接种 方法选择和人员比对的探讨。根据对能力比对的样品的评估，尽量选择稀释度范围较大一些，样品稀释梯度到 10-6，选择 GB4789.3-2016 中第二法平板计数法；人员

2、比对为两人。2.2、进行实验：将样品从冰箱中取出达到室温后开启使用，在无菌室或生物安全柜下先用 5mL 稀释液（选取的生理盐水）进行水化后吸入无菌瓶或袋中，再用剩余的 35mL 稀释液进行洗涤并转入无菌瓶或袋中，即为原液。注：1、按照说明书，水化冻干粉收集共 40mL 混匀作为原液备用 2、开取西林瓶时，注意安全，以及观察能力比对样品状态是否完好。2.2.1、再取 25mL 到 225mL 稀释液中混匀，制成 10 倍梯度样品匀液，稀释液手动混匀，混匀时注意观察是否有气泡产生。2.2.2、用 1mL 无菌吸管取 10 倍的样液到 9ml 生理盐水试管中，制成 100 倍的样液，以此类推。再将几

3、个稀释度的样液接种 1ml 到平皿内，注入 461的 VRBA 琼脂并摇匀。从样品的制备到接种全程应不超过 15 分钟，然后在 361中培养 1824h。2.2.3、在培养 24h 时后，观察平皿内菌落生长情况，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。3、大肠菌群证实试验：3.1、用接种环从 VRBA 平板上挑取 10 个不同类型的典型和可疑菌落，少于 10 个菌落的挑取全部典型和可疑的菌落，分别接种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中,361 培养 2448 小时,观察产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管。BGLG 阳性结果图片 大肠菌群能力验证试验记录 检测方法 GB 4789.3-20

4、16 平板计数法 培养温度及时间 361 培养 1824h 试验 组别 稀释倍数 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 VRBA平板计数 1 典型 可疑 2 典型 可疑 平均值 典型 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 可疑 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 证实试验（10个）（BGLB 肉汤产气）典型 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 可疑 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 空白试验 结果 CFU/g（mL）检验员 日期 审核人