发育毒性和致畸作用(2).ppt

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1、关于发育毒性与致畸作用(2)第一张，PPT共六十页，创作于2022年6月生殖是使种族延续的各种生理过程的总称。生殖是使种族延续的各种生理过程的总称。生殖过程一般是指从配子形成直到胎儿娩生殖过程一般是指从配子形成直到胎儿娩出的整个过程，因此具有广泛的含义，其出的整个过程，因此具有广泛的含义，其中包括精子的发生、卵的形成、配子的释中包括精子的发生、卵的形成、配子的释放、受精、卵裂和胚泡发育、着床、胚胎放、受精、卵裂和胚泡发育、着床、胚胎发生、胎儿发育、分娩。而胎儿的娩出也发生、胎儿发育、分娩。而胎儿的娩出也并不意味着胎儿发育成熟的终止，从广义并不意味着胎儿发育成熟的终止，从广义上说还应包括胎儿娩出

2、后的新生儿期、哺上说还应包括胎儿娩出后的新生儿期、哺乳期、直到性成熟的整个过程。乳期、直到性成熟的整个过程。第二张，PPT共六十页，创作于2022年6月化学品对生殖发育的损害不仅与妊娠母体化学品对生殖发育的损害不仅与妊娠母体有关，带有致畸因子的雄性也会使胎仔发有关，带有致畸因子的雄性也会使胎仔发生畸形。例如给雄鼠经口染毒反应停，使生畸形。例如给雄鼠经口染毒反应停，使之与未染毒的雌鼠交配，引起严重的胎仔之与未染毒的雌鼠交配，引起严重的胎仔畸形。接触二硫化碳男工的配偶发生流产，畸形。接触二硫化碳男工的配偶发生流产，早产或分娩畸胎儿增多。早产或分娩畸胎儿增多。第三张，PPT共六十页，创作于2022年

3、6月对生殖发育有害的化学品不仅能作用于妊娠对生殖发育有害的化学品不仅能作用于妊娠器官形成期，造成形态畸形，对妊娠前期的器官形成期，造成形态畸形，对妊娠前期的影响还可发生不育，对胎期的毒效应，可在影响还可发生不育，对胎期的毒效应，可在出生后观察到发育、行为、代谢功能的障碍出生后观察到发育、行为、代谢功能的障碍或子代肿瘤发生率增高。所以综合考虑有害或子代肿瘤发生率增高。所以综合考虑有害环境因素对母体和父体的影响，将形态致畸环境因素对母体和父体的影响，将形态致畸与行为致畸结合起来进行观察，将生殖毒性与行为致畸结合起来进行观察，将生殖毒性和发育毒性结合起来进行研究已是发展的趋和发育毒性结合起来进行研究

4、已是发展的趋势。势。第四张，PPT共六十页，创作于2022年6月第一节生殖发育毒性第一节生殖发育毒性和致畸性和致畸性第五张，PPT共六十页，创作于2022年6月一、基本概念一、基本概念1、生殖毒性：、生殖毒性：生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。生殖毒性既可发损害和对后代的有害影响。生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影

5、响，以及对生育力和妊娠结局的性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等。影响等。第六张，PPT共六十页，创作于2022年6月2、发育毒性、发育毒性(developmental toxicity)(developmental toxicity)指出生前经父体和指出生前经父体和(或或)母体接触外源性理化因母体接触外源性理化因素引起的在子代到达成体之前出现的有害作用。素引起的在子代到达成体之前出现的有害作用。具体表现可分为具体表现可分为:发育生物体死亡发育生物体死亡(death of the developing organism)：指指受精卵未发育即死亡，或胚泡未着床即死亡，或着床后受精卵未发育

6、即死亡，或胚泡未着床即死亡，或着床后生长发育到一定阶段死亡。早期死亡被吸收或自子宫排生长发育到一定阶段死亡。早期死亡被吸收或自子宫排出出(即自然流产即自然流产)，晚期死亡成为死胎。，晚期死亡成为死胎。第七张，PPT共六十页，创作于2022年6月生长改变生长改变(altered growth)：即生长迟缓即生长迟缓(growth retardation)。能引起胚胎死亡和。能引起胚胎死亡和畸形的毒物多数能引起生长迟缓。一般认为畸形的毒物多数能引起生长迟缓。一般认为胎儿的生长发育指标比正常对照的均值低胎儿的生长发育指标比正常对照的均值低2个标准差时，即可定为生长迟缓。胎鼠胸骨个标准差时，即可定为生

7、长迟缓。胎鼠胸骨及枕骨骨化迟缓及低出生体重等是生长迟缓及枕骨骨化迟缓及低出生体重等是生长迟缓的较敏感指标。生长迟缓造成的局部发育不的较敏感指标。生长迟缓造成的局部发育不全可视为畸形，如脑小畸形和眼小畸形等。全可视为畸形，如脑小畸形和眼小畸形等。第八张，PPT共六十页，创作于2022年6月功能缺陷功能缺陷(functional deficiency)：包括器官系统、生包括器官系统、生化、免疫等功能的变化。功能缺陷往往要在出生后经过相化、免疫等功能的变化。功能缺陷往往要在出生后经过相当时间才能诊断。如听力或视力异常、行为发育迟缓等。当时间才能诊断。如听力或视力异常、行为发育迟缓等。结构异常结构异常

8、(structural abnormality)：指胎儿形态结指胎儿形态结构异常，即畸形。致畸性构异常，即畸形。致畸性(teratogenicity)是指化学物是指化学物在胚胎发育期间引起永久的结构与功能异常的性质。致在胚胎发育期间引起永久的结构与功能异常的性质。致畸物畸物(teratogen)是指出生前接触，诱发永久的结构是指出生前接触，诱发永久的结构与功能异常的物质。与功能异常的物质。第九张，PPT共六十页，创作于2022年6月3 3、畸形、畸胎和致畸物、畸形、畸胎和致畸物 v畸形畸形(malformation)(malformation):器官形态的异常。器官形态的异常。v畸胎畸胎(te

9、rate)(terate):具有畸形的胚胎或胎仔。具有畸形的胚胎或胎仔。v致畸物或致畸原致畸物或致畸原(teratogen)(teratogen):凡在一定剂量下，能通过母凡在一定剂量下，能通过母体对胚胎或胎儿正常发育过程造成干扰，使子代出生后具有体对胚胎或胎儿正常发育过程造成干扰，使子代出生后具有畸形的化合物。畸形的化合物。v致畸试验致畸试验:评定外源化学物是否具有致畸作用的试验。评定外源化学物是否具有致畸作用的试验。第十张，PPT共六十页，创作于2022年6月胚胎毒性作用胚胎毒性作用(embryotoxicity)(embryotoxicity)外源化学物引起的胎仔生长发育迟缓和功能缺陷不

10、全的外源化学物引起的胎仔生长发育迟缓和功能缺陷不全的损害作用。其中不包括致畸和胚胎致死作用。损害作用。其中不包括致畸和胚胎致死作用。母体毒性作用母体毒性作用(maternal(maternaltoxicity)toxicity)母体毒性作用是指外源化学物在一定剂量下，对受母体毒性作用是指外源化学物在一定剂量下，对受孕母体产生的损害作用。具体表现包括体重减轻、出现孕母体产生的损害作用。具体表现包括体重减轻、出现某些临床症伏、直至死亡。某些临床症伏、直至死亡。第十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月母体毒性作用与致畸作用关系母体毒性作用与致畸作用关系v具有致畸作用，但无母体毒性出现。具有致畸

11、作用，但无母体毒性出现。v出现致畸作用的同时也表现母体毒性。出现致畸作用的同时也表现母体毒性。v不具有特定致畸作用机理，但可破坏母体正常生理稳态。不具有特定致畸作用机理，但可破坏母体正常生理稳态。v仅具有母体毒性，但不具有致畸作用。仅具有母体毒性，但不具有致畸作用。v在一定剂量下，既不呈现母体毒性，也未见致畸作用。在一定剂量下，既不呈现母体毒性，也未见致畸作用。第十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月畸形与变异畸形与变异v在胚胎或胎儿出现器官形态结构异常称为畸形。在胚胎或胎儿出现器官形态结构异常称为畸形。v机体的形态结构或生理功能，在同一物种的子代机体的形态结构或生理功能，在同一物种的子

12、代与亲代之间或子代的个体之间，有时出现不完全与亲代之间或子代的个体之间，有时出现不完全相同的现象，即为变异。相同的现象，即为变异。第十三张，PPT共六十页，创作于2022年6月二、致畸作用的毒理学特点二、致畸作用的毒理学特点 器官发生期的胚胎对致畸物最为敏感器官发生期的胚胎对致畸物最为敏感剂量与效应关系较为复杂剂量与效应关系较为复杂v剂量效应关系复杂的表现及原因v致畸作用的剂量反应曲线较为陡峭v致畸作用最大无作用剂量问题尚有不同意见 第十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月物种差异以及个体差异在致畸作用中较为明物种差异以及个体差异在致畸作用中较为明显显v在不同动物并不一定都具有致畸作用，

13、引起畸形的类型也不一致。v种间差异即同一物种中不同品系之间存在的差异，在致畸作用中也极明显。第十五张，PPT共六十页，创作于2022年6月三、致畸作用机理三、致畸作用机理 Wilsom(1977)Wilsom(1977)提出了畸形发生的提出了畸形发生的9 9种机制，包括种机制，包括突变、突变、染色体断裂、有丝分裂改变、改变核酸完整性或功能、染色体断裂、有丝分裂改变、改变核酸完整性或功能、减少前体或底物的补给、减少能源支持、改变膜特性、减少前体或底物的补给、减少能源支持、改变膜特性、渗透压不平衡和酶抑制作用渗透压不平衡和酶抑制作用。近年来在分子水平的研究。近年来在分子水平的研究有很大的进展，虽然

14、胚胎有代偿机制弥补外源性化学物有很大的进展，虽然胚胎有代偿机制弥补外源性化学物的影响，但是，是否产生畸形依赖于在致病过程中的每的影响，但是，是否产生畸形依赖于在致病过程中的每个步骤在损伤和修复之间的平衡。个步骤在损伤和修复之间的平衡。第十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月干扰基因干扰基因表达基因突变与染色体畸变表达基因突变与染色体畸变损伤细胞和分子水平的翻译损伤细胞和分子水平的翻译细胞调亡细胞调亡干扰细胞干扰细胞通过胎盘毒性引起发育毒性通过胎盘毒性引起发育毒性干扰母体稳态干扰母体稳态内分泌干扰作用内分泌干扰作用 第十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月四、生殖与发育毒性的特点及靶

15、器官四、生殖与发育毒性的特点及靶器官生殖与发育过程包括配子生殖与发育过程包括配子(精子与卵子精子与卵子)的发的发育与形成、交配、受精、合子形成与植入、育与形成、交配、受精、合子形成与植入、胚胎形成与发育、分娩等阶段。生殖与发育胚胎形成与发育、分娩等阶段。生殖与发育过程的每个阶段所涉及的细胞或器官都可能过程的每个阶段所涉及的细胞或器官都可能成为外源化学物毒作用的靶。外源化学物对成为外源化学物毒作用的靶。外源化学物对生殖与发育过程的损害主要有以下几个方面生殖与发育过程的损害主要有以下几个方面：第十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月1.亲性腺作用亲性腺作用(性腺毒性性腺毒性)某些化学物可作用

16、于性腺，某些化学物可作用于性腺，影响生殖器官的发育与性腺成熟，或造成性腺组织病理影响生殖器官的发育与性腺成熟，或造成性腺组织病理学改变。某些化学物可影响配子的发生、增殖和成熟，学改变。某些化学物可影响配子的发生、增殖和成熟，使生殖细胞数量减少，功能减退及突变。使生殖细胞数量减少，功能减退及突变。生殖细胞。生殖细胞突变造成的畸胎与妊娠期内接触毒物的致畸作用不同，突变造成的畸胎与妊娠期内接触毒物的致畸作用不同，前者突变发生于父体或母体的性细胞中，突变诱发的畸前者突变发生于父体或母体的性细胞中，突变诱发的畸形可传给后代。后者突变发生在胚胎的体细胞中，引起形可传给后代。后者突变发生在胚胎的体细胞中，引

17、起的畸形不具有遗传性。已知的亲性腺毒物有多种，包括的畸形不具有遗传性。已知的亲性腺毒物有多种，包括固醇类药物，化疗药物，有机磷和有机氯农药，镉、铅、固醇类药物，化疗药物，有机磷和有机氯农药，镉、铅、汞和二硫化碳等。汞和二硫化碳等。第十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月2.亲胚体作用亲胚体作用(胚体毒性胚体毒性embryotoxicity)某些化学某些化学物可作用于妊娠早期物可作用于妊娠早期(即从受孕到胚体形成阶段即从受孕到胚体形成阶段)，对，对胚体发育产生损害作用。某些化学物可以降低胚体胚体发育产生损害作用。某些化学物可以降低胚体对必需营养素的利用度，如对必需营养素的利用度，如EDTA

18、降低胚体对微量降低胚体对微量元素的利用度，氨基蝶呤降低胚体对叶酸的利用度。元素的利用度，氨基蝶呤降低胚体对叶酸的利用度。当给予母体这些化学物时，可导致与缺乏这些必需当给予母体这些化学物时，可导致与缺乏这些必需营养素相似的胚体毒性。胚体毒性、胎体毒性营养素相似的胚体毒性。胚体毒性、胎体毒性(fetotoxicity)和胚胎毒性和胚胎毒性(embryo-fetal toxicity)是是指由出生前接触引起对孕体的任何有害影响，包括结指由出生前接触引起对孕体的任何有害影响，包括结构和功能异常，或这种影响在出生后的表现。这些术构和功能异常，或这种影响在出生后的表现。这些术语与有害作用诱发的瞬间时期有关

19、，而不考虑检测语与有害作用诱发的瞬间时期有关，而不考虑检测的时间。的时间。第二十张，PPT共六十页，创作于2022年6月3.亲胎盘作用亲胎盘作用(胎盘毒性胎盘毒性placental toxicity)某些化学某些化学物可对胎盘造成损伤，改变胎盘血流量，降低胎盘物可对胎盘造成损伤，改变胎盘血流量，降低胎盘对营养物质的转运，特异地干扰胎盘功能对营养物质的转运，特异地干扰胎盘功能(如内分泌如内分泌和代谢功能和代谢功能)。例如。例如5-羟色胺使小鼠动、静脉狭窄，胎盘羟色胺使小鼠动、静脉狭窄，胎盘血流量减少，胎盘转运功能障碍，引起死胎和先天畸形；血流量减少，胎盘转运功能障碍，引起死胎和先天畸形；甲基汞改

20、变人胎盘滋养层微绒毛对不能代谢的氨基酸的摄甲基汞改变人胎盘滋养层微绒毛对不能代谢的氨基酸的摄取，而致功能致畸，即先天水俣病。患儿严重神经迟钝，取，而致功能致畸，即先天水俣病。患儿严重神经迟钝，共济失调，步行困难，语言、咀嚼，下咽困难和大发作性共济失调，步行困难，语言、咀嚼，下咽困难和大发作性癫痫。癫痫。第二十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月除上述外，化学物还可引起胎期毒性，哺乳除上述外，化学物还可引起胎期毒性，哺乳期毒性期毒性(通过乳汁致婴儿中毒，如铅中毒通过乳汁致婴儿中毒，如铅中毒)，和通过对中枢神经系统及全身机能状态的毒和通过对中枢神经系统及全身机能状态的毒作用来影响生殖过程。某

21、些化学物还能经胎作用来影响生殖过程。某些化学物还能经胎盘致癌盘致癌(transplacental carcinogenesis)即即致癌物由母血经胎盘进入胚胎，造成胚胎期致癌物由母血经胎盘进入胚胎，造成胚胎期接触，引发后代肿瘤。接触，引发后代肿瘤。第二十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月化学物的生殖发育毒性有两个显著的特点：一是生殖化学物的生殖发育毒性有两个显著的特点：一是生殖过程较机体的其他系统或功能对某些化学物的毒作用过程较机体的其他系统或功能对某些化学物的毒作用更为敏感，在成体系统毒性的未观察到有害作用的水更为敏感，在成体系统毒性的未观察到有害作用的水平平(no observed

22、ad-verse effect level，NOAEL)胎儿胎儿即可受到影响。例如妊娠期接触过不足以引起肿瘤即可受到影响。例如妊娠期接触过不足以引起肿瘤的低剂量二乙基亚硝胺的低剂量二乙基亚硝胺(diethyllnitrosamine)，仔鼠，仔鼠成年后再次接触，则肿瘤发生率增加。二是损害作用不仅成年后再次接触，则肿瘤发生率增加。二是损害作用不仅表现在接触化学物质的机体本身，还可影响其后代。例如表现在接触化学物质的机体本身，还可影响其后代。例如母鼠接触高浓度二硫化碳引起致畸作用，其子一代既使不母鼠接触高浓度二硫化碳引起致畸作用，其子一代既使不再接触二硫化碳，交配后所生的子二代仔鼠也出现与子一再接

23、触二硫化碳，交配后所生的子二代仔鼠也出现与子一代仔鼠几乎完全相同的畸变类型。代仔鼠几乎完全相同的畸变类型。第二十三张，PPT共六十页，创作于2022年6月第二节第二节 生殖与发育毒性试验的目的和生殖与发育毒性试验的目的和实验设计的要点实验设计的要点评价化学物对生殖和发育的毒性需要三方面评价化学物对生殖和发育的毒性需要三方面的资料，即环境流行病学，动物生殖与发育的资料，即环境流行病学，动物生殖与发育毒性试验和控制的临床研究。另外体外筛选毒性试验和控制的临床研究。另外体外筛选试验还可为发育毒性提供初筛和补充。但是试验还可为发育毒性提供初筛和补充。但是在一些新化学品和药品开发初期，显然不可在一些新化

24、学品和药品开发初期，显然不可能得到流行病学方面的资料，也不能直接对能得到流行病学方面的资料，也不能直接对人体做临床研究，首先要靠动物试验来预测人体做临床研究，首先要靠动物试验来预测它们对人生殖与发育的危险。它们对人生殖与发育的危险。第二十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月生殖与发育毒性研究的目的是揭示化学品生殖与发育毒性研究的目的是揭示化学品药品对哺乳动物生殖发育的任何有害影响，药品对哺乳动物生殖发育的任何有害影响，并将研究的结果与所有可以得到的其他药理并将研究的结果与所有可以得到的其他药理学和毒理学资料联系起来，以推测对人可能学和毒理学资料联系起来，以推测对人可能造成的生殖危险。研究

25、应包括成年动物和从造成的生殖危险。研究应包括成年动物和从受孕到子代性成熟的各个发育阶段接触受试受孕到子代性成熟的各个发育阶段接触受试物。为检测接触所致的即发和迟发效应，应物。为检测接触所致的即发和迟发效应，应连续通过一个完整的生命周期，即从亲代受连续通过一个完整的生命周期，即从亲代受孕到子一代受孕。为清楚地阐述各试验方案孕到子一代受孕。为清楚地阐述各试验方案的组合，现将完整的生殖发育过程细分为如的组合，现将完整的生殖发育过程细分为如下阶段。下阶段。第二十五张，PPT共六十页，创作于2022年6月A阶段阶段 交配前到受孕：检查成年雄性和雌性生殖功能，交配前到受孕：检查成年雄性和雌性生殖功能，配子

26、的发育与成熟，交配行为，受精。配子的发育与成熟，交配行为，受精。B阶段阶段 受孕到着床：检查成年雌性生殖功能，胚胎受孕到着床：检查成年雌性生殖功能，胚胎着床前发育、着床。着床前发育、着床。C阶段阶段 着床到硬腭闭合：检查成年雌性生殖功能，胎着床到硬腭闭合：检查成年雌性生殖功能，胎体发育，主要器官形成。体发育，主要器官形成。D阶段阶段 硬腭闭合到妊娠结束：检查成年雌性生殖功硬腭闭合到妊娠结束：检查成年雌性生殖功能、胎体的发育与生长，器官的发育与生长。能、胎体的发育与生长，器官的发育与生长。E阶段阶段 出生到断乳：检查成年雌性生殖功能，新生仔对出生到断乳：检查成年雌性生殖功能，新生仔对宫外生活的适

27、应，断乳前的发宫外生活的适应，断乳前的发育与生长。育与生长。F阶段阶段 断乳到性成熟：检查断乳后的发育与生长，对断乳到性成熟：检查断乳后的发育与生长，对独立生活的适应，达到完全的性功能。独立生活的适应，达到完全的性功能。第二十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月一、实验设计一、实验设计1、动物选择、动物选择 必须以哺乳动物为实验对象。一般要求使用与其他毒理学研必须以哺乳动物为实验对象。一般要求使用与其他毒理学研究中相同的物种与品系，以免必须进行另外的预试验。原则上实究中相同的物种与品系，以免必须进行另外的预试验。原则上实验动物对受试物的动力学、毒效学及其他有关参数应与人最接近，验动物对受

28、试物的动力学、毒效学及其他有关参数应与人最接近，如代谢过程与生物转化应与人相近、胎盘结构与人相似、健康、如代谢过程与生物转化应与人相近、胎盘结构与人相似、健康、生育力强、多产、孕期短、自发畸形率低、价廉、易得和操作方生育力强、多产、孕期短、自发畸形率低、价廉、易得和操作方便。首选啮齿类中的大鼠，因用大鼠获得的其他实验结果有可比便。首选啮齿类中的大鼠，因用大鼠获得的其他实验结果有可比性并积累了大量的背景资料。在胚体性并积累了大量的背景资料。在胚体胎体毒性研究中，传胎体毒性研究中，传统上要求用第二种哺乳动物进行试验。家兔因其也有较广泛统上要求用第二种哺乳动物进行试验。家兔因其也有较广泛的背景资料和

29、比大鼠更接近人的代谢类型而作为的背景资料和比大鼠更接近人的代谢类型而作为“非啮齿类非啮齿类”优选使用。但家兔孕期长短不定优选使用。但家兔孕期长短不定(3236天天)，有时缺乏毒性，有时缺乏毒性资料，对某些抗生素和消化道紊乱有易感性，在其他生殖毒性研究资料，对某些抗生素和消化道紊乱有易感性，在其他生殖毒性研究中较少用。中较少用。第二十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月2、接触选择、接触选择1）.剂量剂量 剂量选择应依据从所有已进行的药理学、急性和慢性毒性、以及动力学研剂量选择应依据从所有已进行的药理学、急性和慢性毒性、以及动力学研究中得到的资料。高剂量应该在母体中产生轻度的毒性，如体重增

30、长减少，体重增长究中得到的资料。高剂量应该在母体中产生轻度的毒性，如体重增长减少，体重增长速度改变速度改变(与扰乱了内环境稳定的机理有关与扰乱了内环境稳定的机理有关)、特异的靶器官毒性、药理学反应增强、特异的靶器官毒性、药理学反应增强(如镇静、惊厥如镇静、惊厥)、阴道出血、流产等。在研究中，要对所观察到的效应进行剂量、阴道出血、流产等。在研究中，要对所观察到的效应进行剂量反反应关系分析时，推荐至少用三个剂量水平和适当的对照组。低剂量不应有任何可归因应关系分析时，推荐至少用三个剂量水平和适当的对照组。低剂量不应有任何可归因于受试物的有害作用。中剂量组应在高、低剂量之间按等比级差定位，应引起最小的

31、于受试物的有害作用。中剂量组应在高、低剂量之间按等比级差定位，应引起最小的毒作用。如果对结果有怀疑，应增加第四个剂量组，以免剂量间隔过大。实验结果应毒作用。如果对结果有怀疑，应增加第四个剂量组，以免剂量间隔过大。实验结果应提供最高未观察到有害作用水平的剂量，否则应对该受试物进行进一步深入的研究。提供最高未观察到有害作用水平的剂量，否则应对该受试物进行进一步深入的研究。在大多数情况下，最高限量剂量为在大多数情况下，最高限量剂量为1g(kgd)假如仍未引起血浆和组织浓度增加假如仍未引起血浆和组织浓度增加时，可略微增加染毒剂量。在测试低毒物质时，假如剂量达到时，可略微增加染毒剂量。在测试低毒物质时，

32、假如剂量达到1g(kgd)仍不产生胚仍不产生胚胎毒性或致畸，则没有必要进行其他剂量水平的研究。假如在高剂量进行的初步胎毒性或致畸，则没有必要进行其他剂量水平的研究。假如在高剂量进行的初步研究中，有明显的母体毒性的证据而未显示对胚胎的有害作用，也没有必要进行研究中，有明显的母体毒性的证据而未显示对胚胎的有害作用，也没有必要进行其他剂量水平的研究其他剂量水平的研究。第二十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月2）.接触途径与频率接触途径与频率 应与人的接触途径相应与人的接触途径相同，如果采用其他接触途径，必须依据动力同，如果采用其他接触途径，必须依据动力学的资料。接触频率一般是一日一次，每日学

33、的资料。接触频率一般是一日一次，每日在相同时间染毒，并按体重调整染毒剂量。在相同时间染毒，并按体重调整染毒剂量。3）.对照组对照组 用与试验组相同的最大容量的用与试验组相同的最大容量的赋形剂。当赋形剂可能有不良影响赋形剂。当赋形剂可能有不良影响(如减少如减少食物的摄取和利用食物的摄取和利用)或影响受试物的作用时，或影响受试物的作用时，应再设未处理对照组。应再设未处理对照组。第二十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月二、三段生殖毒性试验三段生殖毒性试验 用一组试验研究全部生殖毒性的终点是不可能的，所以用一组试验研究全部生殖毒性的终点是不可能的，所以在决定适当的策略和选择研究设计时，应考虑该

34、受试物在决定适当的策略和选择研究设计时，应考虑该受试物和其类似物质所有可能得到的药理学、动力学和毒理学和其类似物质所有可能得到的药理学、动力学和毒理学资料。对大多数医药产品来说，三段生殖毒性试验设计资料。对大多数医药产品来说，三段生殖毒性试验设计通常是适当的。关键因素是各个生殖阶段之间不得有间通常是适当的。关键因素是各个生殖阶段之间不得有间隔，即在三个有关联的阶段接触受试物的时期至少有一隔，即在三个有关联的阶段接触受试物的时期至少有一天的重迭，并能直接或间接地评价生殖过程的所有阶段。天的重迭，并能直接或间接地评价生殖过程的所有阶段。三段生殖毒性试验由生育力和早期胚胎发育毒性试验，三段生殖毒性试

35、验由生育力和早期胚胎发育毒性试验，胚体胚体胎体毒性试验胎体毒性试验(致畸试验致畸试验)和出生前后发育毒和出生前后发育毒性试验性试验(围产期毒性试验围产期毒性试验)三部分组成三部分组成(下图下图)。三段的。三段的划分是按有害作用诱发的时期，而不考虑检测的时间。划分是按有害作用诱发的时期，而不考虑检测的时间。第三十张，PPT共六十页，创作于2022年6月生育力和早期胚胎发育毒性试验生育力和早期胚胎发育毒性试验 胚体胚体胎体毒性试验胎体毒性试验(致畸试验致畸试验)出生前后发育毒性试验出生前后发育毒性试验第三十一张，PPT共六十页，创作于2022年6月1、生育力和早期胚胎发育毒性试验 1）.研究目的研

36、究目的 评价化学物对配子成熟、交配行为、生育力、评价化学物对配子成熟、交配行为、生育力、胚胎着床前和着床的影响胚胎着床前和着床的影响(包括前述生殖发育过程包括前述生殖发育过程A和和B阶段的评阶段的评价价)。雌性包括对动情期、输卵管运输、着床和胚胎着床前阶。雌性包括对动情期、输卵管运输、着床和胚胎着床前阶段发育的影响。雄性包括检测对功能的影响段发育的影响。雄性包括检测对功能的影响(例如性欲、附睾例如性欲、附睾的精子成熟等的精子成熟等)。2）.动物动物 至少一种，首选大鼠。每组性别、每组的动物至少一种，首选大鼠。每组性别、每组的动物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每组性别各半、每数应足以对数据

37、进行有意义的解释。建议每组性别各半、每组组1620窝。窝。3）.给药期给药期 应说明交配前染毒时间的长度并提供依据。应说明交配前染毒时间的长度并提供依据。一般采取雄性交配前四周开始重复染毒，直至交配成功。若一般采取雄性交配前四周开始重复染毒，直至交配成功。若要保证雌性受孕成功，雄性也可继续染毒，仍同笼至处死。要保证雌性受孕成功，雄性也可继续染毒，仍同笼至处死。雌性交配前两周开始染毒雌性交配前两周开始染毒(可覆盖至少两个完整的动情期可覆盖至少两个完整的动情期)直至直至着床。着床。第三十二张，PPT共六十页，创作于2022年6月4）.交配及受孕检查交配及受孕检查 雄大鼠给药雄大鼠给药4周，雌大鼠给

38、药周，雌大鼠给药2周后开始同周后开始同笼。交配期笼。交配期23周，交配比例周，交配比例1 1。实验程序应能识别出各窝的。实验程序应能识别出各窝的2个个亲本，以避免不正确结果的分析和解释。亲本，以避免不正确结果的分析和解释。5）.终末处死终末处死 雌性一般在孕中期第雌性一般在孕中期第13-15天终止妊娠。雄性天终止妊娠。雄性在证实交配并受孕成功后处死检查。在证实交配并受孕成功后处死检查。6）.观察项目观察项目 染毒期间观察雌、雄亲代染毒期间观察雌、雄亲代(Po)体征和死亡体征和死亡(至少至少1次日次日)，体重和体重改变，体重和体重改变(至少至少2次周次周)，摄食量，摄食量(1次周次周)，镜检雌性

39、阴道涂片镜检雌性阴道涂片(交配期间交配期间1次天次天)和其他毒性研究中见到的靶和其他毒性研究中见到的靶效应。效应。7）.结果评定结果评定 综合对综合对F0代观察的各项指标和参数，用合适的统代观察的各项指标和参数，用合适的统计方法分析和评价。在分析对胎体计方法分析和评价。在分析对胎体(子一代，子一代，F1)的影响时，应的影响时，应考虑下述参数：各组受影响的窝数比；每窝受影响的胎体的考虑下述参数：各组受影响的窝数比；每窝受影响的胎体的组平均百分率；受影响胎体总数比。组平均百分率；受影响胎体总数比。第三十三张，PPT共六十页，创作于2022年6月2、胚体胎体毒性试验(致畸试验)1）.研究目的研究目的

40、 评价母体自胚泡着床到硬腭闭合期间接触受试物对妊评价母体自胚泡着床到硬腭闭合期间接触受试物对妊娠雌性和对胚体娠雌性和对胚体胎体发育的有害影响，即前述生殖发育过程中的胎体发育的有害影响，即前述生殖发育过程中的C和和D阶段，主要包括增强了与非妊娠雌性有关的毒性，胚体阶段，主要包括增强了与非妊娠雌性有关的毒性，胚体胎体胎体死亡、生长改变与结构异常。死亡、生长改变与结构异常。2）.动物动物 通常用两种，一种是啮齿类，首选大鼠，另一种是非通常用两种，一种是啮齿类，首选大鼠，另一种是非啮齿类，最好是兔。若仅用一种动物，需提出正当理由。每组动啮齿类，最好是兔。若仅用一种动物，需提出正当理由。每组动物数应足以

41、对数据进行有意义的解释。建议每组物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每组1620窝。雌性窝。雌性宜用性成熟的，未交配过的动物。宜用性成熟的，未交配过的动物。3）.给药期给药期 从着床期到硬腭闭合，即器官形成期，大、小鼠孕从着床期到硬腭闭合，即器官形成期，大、小鼠孕期的第期的第615天，兔孕期的天，兔孕期的618天。天。第三十四张，PPT共六十页，创作于2022年6月4）.终末处死与标本制作终末处死与标本制作 在分娩前一天处死怀孕母在分娩前一天处死怀孕母体，以防止自然分娩后，母体吞食畸形子。剖腹检查体，以防止自然分娩后，母体吞食畸形子。剖腹检查亲代受孕情况和胎体发育。除逐个检查所有胎体的存亲代

42、受孕情况和胎体发育。除逐个检查所有胎体的存活和畸形外，尚需分别检查软组织和骨骼的异常。将活和畸形外，尚需分别检查软组织和骨骼的异常。将每窝每窝50胎仔经茜素红染色后，作骨骼检查。另外胎仔经茜素红染色后，作骨骼检查。另外50胎仔经胎仔经Bouins固定后，作内脏检查。当使用新鲜标本固定后，作内脏检查。当使用新鲜标本的显微解剖技术的显微解剖技术(microdissec-tiontechniques)检查软检查软组织改变时组织改变时(对家兔胎体检查的最好方法对家兔胎体检查的最好方法)，100的家兔的家兔胎体均作软组织和骨骼检查。胎体均作软组织和骨骼检查。第三十五张，PPT共六十页，创作于2022年6

43、月5）.观察项目观察项目 染毒期观察妊娠动物的体征和死亡染毒期观察妊娠动物的体征和死亡(1次日次日)，体重和体重改变，体重和体重改变(2次周次周)，摄食量，摄食量(1次次周周)和在其他毒性研究中已证实的重要靶效应。有流和在其他毒性研究中已证实的重要靶效应。有流产和早产征兆者处死并进行肉眼检查。产和早产征兆者处死并进行肉眼检查。处死时对所有妊娠动物进行尸体解剖和肉眼检查任处死时对所有妊娠动物进行尸体解剖和肉眼检查任何结构异常或病理改变。保存肉眼发现有改变的脏器，以何结构异常或病理改变。保存肉眼发现有改变的脏器，以便进行组织学评价，亦保存足够的对照组的相应脏器，以便进行组织学评价，亦保存足够的对照

44、组的相应脏器，以供比较。取出子宫，称带有胎体的子宫重，以得出妊娠雌供比较。取出子宫，称带有胎体的子宫重，以得出妊娠雌性动物的净增重。计数黄体数，吸收胎数，活胎数与死胎性动物的净增重。计数黄体数，吸收胎数，活胎数与死胎数及着床点，称胎盘重并作肉眼评价，必要时可作组织学数及着床点，称胎盘重并作肉眼评价，必要时可作组织学检查。称活胎体重，检查胎体性别，以及外观、内脏和骨检查。称活胎体重，检查胎体性别，以及外观、内脏和骨骼畸形。骼畸形。第三十六张，PPT共六十页，创作于2022年6月6）.结果评定结果评定 致畸研究的发现应根据观察到的效致畸研究的发现应根据观察到的效应和产生效应的剂量水平进行评价。有必

45、要考虑所应和产生效应的剂量水平进行评价。有必要考虑所用试验动物的物种品系的历史的致畸性资料。致用试验动物的物种品系的历史的致畸性资料。致畸研究进行适当，应提供一个符合要求的畸研究进行适当，应提供一个符合要求的NOAEL(未观察到有害作用水平未观察到有害作用水平)的估计。虽然将实验结果外的估计。虽然将实验结果外推到人的可靠性有限，然而推到人的可靠性有限，然而NOAEL的建立，使得能的建立，使得能以采取适当的安全系数。以采取适当的安全系数。对母体的终点评价指标包括：体重、体重变化、食物对母体的终点评价指标包括：体重、体重变化、食物消耗量和母体毒性体征及母体畸胎出现率等。对胎体影消耗量和母体毒性体征

46、及母体畸胎出现率等。对胎体影响的评价应包括：受影响的窝数比、每窝受影响胎体数响的评价应包括：受影响的窝数比、每窝受影响胎体数的组间均数、受影响的胎体总数比、畸胎率和某单项畸的组间均数、受影响的胎体总数比、畸胎率和某单项畸胎率等。胎率等。第三十七张，PPT共六十页，创作于2022年6月 7）.影响致畸作用的因素影响致畸作用的因素 致畸作用受多种因素影响，主要致畸作用受多种因素影响，主要包括敏感期、遗传类型、剂量和母体毒性等。包括敏感期、遗传类型、剂量和母体毒性等。(1)致畸敏感期致畸敏感期 实验证明器官形成期实验证明器官形成期(organogenesis period)是发生形态结构畸形是发生形

47、态结构畸形(malformation)的关键期的关键期(critical period)。迅速改变细胞分裂速度对畸形发生是极为重要的，因。迅速改变细胞分裂速度对畸形发生是极为重要的，因为增加复制速度即增强了突变的可能性。器官形成期正是细胞为增加复制速度即增强了突变的可能性。器官形成期正是细胞分裂极旺盛的时期。大多数器官又都有其对致畸作用的特殊敏分裂极旺盛的时期。大多数器官又都有其对致畸作用的特殊敏感期，即感期，即“靶窗靶窗(target windows)”。形态畸形和功能缺陷的。形态畸形和功能缺陷的敏感期也不同。致畸实验的染毒时间，必须安排在器官形成敏感期也不同。致畸实验的染毒时间，必须安排在

48、器官形成期，才有可能观察到形态畸形的致畸效应。由于各物种妊娠期，才有可能观察到形态畸形的致畸效应。由于各物种妊娠期长短不同，敏感期的长短也不同，致畸试验的染毒时间需期长短不同，敏感期的长短也不同，致畸试验的染毒时间需随动物种属而易。随动物种属而易。第三十八张，PPT共六十页，创作于2022年6月(2)遗传类型遗传类型 致畸作用存在明显的物种差异，这种致畸作用存在明显的物种差异，这种差异是因代谢变化、胎盘种类、胚胎发育的速度和差异是因代谢变化、胎盘种类、胚胎发育的速度和方式引起的。致畸物各有其易感物种和品系，易感方式引起的。致畸物各有其易感物种和品系，易感性取决于机体的基因型。推测化学物生物转化

49、成活性取决于机体的基因型。推测化学物生物转化成活性中间产物的速度和途径与遗传因子有关，而畸形性中间产物的速度和途径与遗传因子有关，而畸形仅发生在那些形成恰当代谢物的物种中。所以一个仅发生在那些形成恰当代谢物的物种中。所以一个化学物在某些物种中是致畸的，在其他物种中产生化学物在某些物种中是致畸的，在其他物种中产生很小或不产生影响，或是一个物种产生的畸形，可很小或不产生影响，或是一个物种产生的畸形，可完全不同于在另一个物种中诱发的畸形。所以在筛完全不同于在另一个物种中诱发的畸形。所以在筛选致畸物时，强调采用包括非啮齿类在内的两种动选致畸物时，强调采用包括非啮齿类在内的两种动物中进行试验，可以减少因

50、动物不敏感而出现的假物中进行试验，可以减少因动物不敏感而出现的假阴性。阴性。第三十九张，PPT共六十页，创作于2022年6月(3)化学物的剂量化学物的剂量 各种致畸物都有其引发各种致畸物都有其引发致畸作用的阈剂量。不同致畸物又有不同类致畸作用的阈剂量。不同致畸物又有不同类型的剂量型的剂量效应关系，反映了不同外源化学效应关系，反映了不同外源化学物胚胎毒性作用的特点。一般地说，所用的物胚胎毒性作用的特点。一般地说，所用的剂量高于该化学物致畸作用的阈剂量时，可剂量高于该化学物致畸作用的阈剂量时，可使致畸范围扩大、程度加重、靶窗延长，再使致畸范围扩大、程度加重、靶窗延长，再增大则出现胚胎死亡。而由于有