第01章蛋白质的结构与功能PPT讲稿.ppt

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1、第01章蛋白质的结构与功能第1页，共105页，编辑于2022年，星期一学习要求学习要求掌握：生物化学、生物大分子和分子生物学的概念。蛋白质元素组成及掌握：生物化学、生物大分子和分子生物学的概念。蛋白质元素组成及其特点；蛋白质基本组成单位其特点；蛋白质基本组成单位-氨基酸的种类、基本结构及主要特点；氨基酸的种类、基本结构及主要特点；蛋白质的分子结构；蛋白质结构与功能的关系；蛋白质的主要理化性质蛋白质的分子结构；蛋白质结构与功能的关系；蛋白质的主要理化性质及其应用；蛋白质分离纯化的方法及其基本原理。及其应用；蛋白质分离纯化的方法及其基本原理。熟悉：当代生物化学研究的主要内容。各种氨基酸的结构；蛋白

2、熟悉：当代生物化学研究的主要内容。各种氨基酸的结构；蛋白质的分类。质的分类。了解：生物化学的发展简史、生物化学与医学的关系。多肽链氨了解：生物化学的发展简史、生物化学与医学的关系。多肽链氨基酸序列分析；蛋白质空间结构测定。基酸序列分析；蛋白质空间结构测定。第2页，共105页，编辑于2022年，星期一n什么是蛋白质什么是蛋白质?蛋蛋白白质质(protein)(protein)是是由由许许多多氨氨基基酸酸(amino(amino acids)acids)通通过过肽肽键键(peptide(peptide bond)bond)相相连连形形成成的的高高分子含氮化合物。分子含氮化合物。第3页，共105页，

3、编辑于2022年，星期一n蛋白质研究的历史蛋白质研究的历史18331833年年，从从麦麦芽芽中中分分离离淀淀粉粉酶酶；随随后后从从胃胃液液中中分分离到类似胃蛋白酶的物质。离到类似胃蛋白酶的物质。18641864年，血红蛋白被分离并结晶。年，血红蛋白被分离并结晶。1919世世纪纪末末，证证明明蛋蛋白白质质由由氨氨基基酸酸组组成成，并并合合成成了了多种短肽。多种短肽。2020世世纪纪初初，发发现现蛋蛋白白质质的的二二级级结结构构；完完成成胰胰岛岛素素一一级结构测定。级结构测定。第4页，共105页，编辑于2022年，星期一2020世世纪纪中中叶叶，各各种种蛋蛋白白质质分分析析技技术术相相继继建建立立

4、，促促进进了了蛋蛋白质研究迅速发展；白质研究迅速发展；19621962年，确定了血红蛋白的四级结构。年，确定了血红蛋白的四级结构。2020世纪世纪9090年代，功能基因组与蛋白质组研究地展开。年代，功能基因组与蛋白质组研究地展开。第5页，共105页，编辑于2022年，星期一n蛋白质的生物学重要性蛋白质的生物学重要性分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80。1.1.蛋白质是生物体重要组成成分蛋白质是生物体重要组成成分第6页，共105页，编辑于2022年，星期一作为生物催

5、化剂（酶）作为生物催化剂（酶）代谢调节作用代谢调节作用免疫保护作用免疫保护作用物质的转运和存储物质的转运和存储运动与支持作用运动与支持作用参与细胞间信息传递参与细胞间信息传递2.蛋白质具有重要的生物学功能蛋白质具有重要的生物学功能3.氧化供能氧化供能第7页，共105页，编辑于2022年，星期一蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein第一节第一节第8页，共105页，编辑于2022年，星期一n组成蛋白质的元素组成蛋白质的元素主要有主要有C C、H H、O O、N N和和 S S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、有些蛋白质含有少量磷或

6、金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘 。第9页，共105页，编辑于2022年，星期一 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16。由由于于体体内内的的含含氮氮物物质质以以蛋蛋白白质质为为主主，因因此此，只只要要测测定定生生物物样样品品中中的的含含氮氮量量，就就可可以以根根据据以以下公式推算出蛋白质的大致含量：下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含量克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数每克样品含氮克数 6.251001/16%n蛋白质元素组成的特点蛋白质元素组成的特点第10页，共105页，编辑于2

7、022年，星期一一、组成人体蛋白质的一、组成人体蛋白质的20种氨基酸均种氨基酸均属于属于L-氨基酸氨基酸 存存在在自自然然界界中中的的氨氨基基酸酸有有300300余余种种，但但组组成成人人体体蛋蛋白白质质的的氨氨基基酸酸仅仅有有2020种种，且且均均属属 L-L-氨基酸氨基酸（甘氨酸除外）。（甘氨酸除外）。第11页，共105页，编辑于2022年，星期一H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RC+NH3COO-H第12页，共105页，编辑于2022年，星期一非极性脂肪族氨基酸非极性脂肪族氨基酸极性中性氨基酸极性中性氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸碱性氨

8、基酸碱性氨基酸二、氨基酸二、氨基酸可根据侧链结构和理化性质进可根据侧链结构和理化性质进行分类行分类第13页，共105页，编辑于2022年，星期一(一一)侧链含烃链的氨基酸属于非极性脂肪族氨基酸侧链含烃链的氨基酸属于非极性脂肪族氨基酸第14页，共105页，编辑于2022年，星期一(二二)侧链有极性但不带电荷的氨基酸是极性中侧链有极性但不带电荷的氨基酸是极性中性氨基酸性氨基酸第15页，共105页，编辑于2022年，星期一(三三)侧链含芳香基团的氨基酸是芳香族氨基酸侧链含芳香基团的氨基酸是芳香族氨基酸第16页，共105页，编辑于2022年，星期一(四四)侧链含负性解离基团的氨基酸是酸性氨基酸侧链含负

9、性解离基团的氨基酸是酸性氨基酸第17页，共105页，编辑于2022年，星期一(五五)侧链含正性解离基团的氨基酸属于碱性氨侧链含正性解离基团的氨基酸属于碱性氨基酸基酸第18页，共105页，编辑于2022年，星期一n几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸（亚氨基酸）（亚氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2第19页，共105页，编辑于2022年，星期一 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-C

10、H-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3第20页，共105页，编辑于2022年，星期一三、三、20种氨基酸具有共同或特异的理化性质种氨基酸具有共同或特异的理化性质n两性解离及等电点两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。的酸碱度。等电点等电点(isoelectric point,pI)在在某某一一pH的的溶溶液液中中，氨氨基基酸酸解解离离成成阳阳离离子子和和阴阴离离子子的的趋趋势势及及程程度度相相等等，成成为为兼兼性性离离子子，呈

11、呈电电中中性性。此此时时溶溶液的液的pH值值称为该氨基酸的称为该氨基酸的等电点等电点。（一）氨基酸具有两性解离的性质（一）氨基酸具有两性解离的性质第21页，共105页，编辑于2022年，星期一pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性离子氨基酸的兼性离子 阳离子阳离子阴离子阴离子第22页，共105页，编辑于2022年，星期一（二）含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质（二）含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质色氨酸、酪氨酸的色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在最大吸收峰在 280 nm 附近。附近。大大多多数数蛋蛋白白质质含含有有这这两两种种氨氨基基酸酸残残基基，所所以以测测定定蛋蛋白

12、白质质溶溶液液280nm的的光光吸吸收收值值是是分分析析溶溶液液中中蛋蛋白白质质含含量量的的快快速速简简便便的的方法。方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收第23页，共105页，编辑于2022年，星期一（三）氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物（三）氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物氨氨基基酸酸与与茚茚三三酮酮水水合合物物共共热热，可可生生成成蓝蓝紫紫色色化化合物，其最大吸收峰在合物，其最大吸收峰在570nm处。处。由由于于此此吸吸收收峰峰值值与与氨氨基基酸酸的的含含量量存存在在正正比比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。第24页，共105页，编辑

13、于2022年，星期一四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成 的多肽链的多肽链肽肽键键(peptide bond)是是由由一一个个氨氨基基酸酸的的-羧羧基基与另一个氨基酸的与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。氨基脱水缩合而形成的化学键。（一）（一）氨基酸通过肽键连接而形成肽氨基酸通过肽键连接而形成肽(peptide)第25页，共105页，编辑于2022年，星期一+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键第26页，共105页，编辑于2022年，星期一肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。两两分分子子氨氨基基酸酸缩缩合合形形成

14、成二二肽肽，三三分分子子氨氨基基酸缩合则形成三肽酸缩合则形成三肽肽肽链链中中的的氨氨基基酸酸分分子子因因为为脱脱水水缩缩合合而而基基团团不不全全，被称为被称为氨基酸残基氨基酸残基(residue)。由由十十个个以以内内氨氨基基酸酸相相连连而而成成的的肽肽称称为为寡寡肽肽(oligopeptide)，由由更更多多的的氨氨基基酸酸相相连连形形成成的的肽肽称称多多肽肽(polypeptide)。第27页，共105页，编辑于2022年，星期一N 末端：多肽链中有末端：多肽链中有游离游离-氨基氨基的一端的一端C 末端：多肽链中有末端：多肽链中有游离游离-羧基羧基的一端的一端n多肽链有两端及其方向性多肽链

15、有两端及其方向性：多多肽肽链链(polypeptide chain)是是指指许许多多氨氨基基酸酸之间以肽键连接而成的一种结构。之间以肽键连接而成的一种结构。第28页，共105页，编辑于2022年，星期一N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶第29页，共105页，编辑于2022年，星期一（二）（二）体内存在多种重要的生物活性肽体内存在多种重要的生物活性肽 1.谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione,GSH)第30页，共105页，编辑于2022年，星期一GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶还原酶NADPH+H+NADP+nGSH与与GSSG间的转换

16、间的转换 第31页，共105页，编辑于2022年，星期一 体内许多激素属寡肽或多肽体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素及神经肽多肽类激素及神经肽第32页，共105页，编辑于2022年，星期一蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 第二节第二节第33页，共105页，编辑于2022年，星期一n蛋白质的分子结构包括蛋白质的分子结构包括:高级高级结构结构一级结构一级结构(primary structure)二级结构二级结构(secondary structure)三级结构三级结构(tertiary

17、 structure)四级结构四级结构(quaternary structure)第34页，共105页，编辑于2022年，星期一定义定义:蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构指在蛋白质分子从指在蛋白质分子从N-端至端至C-端端的的氨基酸排列顺序氨基酸排列顺序。一、一、蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构n主要的化学键主要的化学键:肽键肽键，有些蛋白质还包括二硫键。，有些蛋白质还包括二硫键。第35页，共105页，编辑于2022年，星期一一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础功能的基础，但不是决定蛋白质空间构象的但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素唯一因素。第36

18、页，共105页，编辑于2022年，星期一二、二、蛋白质二级结构蛋白质二级结构蛋蛋白白质质分分子子中中某某一一段段肽肽链链的的局局部部空空间间结结构构，即即该该段段肽肽链链主主链链骨骨架架原原子子的的相相对对空空间间位位置置，并并不不涉涉及及氨氨基基酸酸残残基基侧侧链链的的构构象象。n定义定义:n主要的化学键主要的化学键：氢键氢键 第37页，共105页，编辑于2022年，星期一（一）参与肽键形成的（一）参与肽键形成的6个原子在同一平面上个原子在同一平面上参参与与肽肽键键的的6个个原原子子C 1、C、O、N、H、C 2位位于于同同一一平平面面，C 1和和C 2在在平平面面上上所所处处的的位位置置为

19、为反反式式(trans)构构型型，此此同同一一平平面面上上的的6个原子构成了所谓的个原子构成了所谓的肽单元肽单元(peptide unit)。第38页，共105页，编辑于2022年，星期一（一）参与肽键形成的（一）参与肽键形成的6个原子在同一平面上个原子在同一平面上参参与与肽肽键键的的6个个原原子子C 1、C、O、N、H、C 2位位于于同同一一平平面面，C 1和和C 2在在平平面面上上所所处处的的位位置置为为反反式式(trans)构构型型，此此同同一一平平面面上上的的6个原子构成了所谓的个原子构成了所谓的肽单元肽单元(peptide unit)。第39页，共105页，编辑于2022年，星期一

20、-螺旋螺旋 (-helix)-折叠折叠 (-pleated sheet)-转角转角 (-turn)无规卷曲无规卷曲 (random coil)（二）（二）-螺旋结构是常见的蛋白质二级结构螺旋结构是常见的蛋白质二级结构n蛋白质二级结构蛋白质二级结构第40页，共105页，编辑于2022年，星期一n-螺旋螺旋第41页，共105页，编辑于2022年，星期一（三）（三）-折叠使多肽链形成片层结构折叠使多肽链形成片层结构第42页，共105页，编辑于2022年，星期一（四）（四）-转角和无规卷曲在蛋白质分子中转角和无规卷曲在蛋白质分子中普遍存在普遍存在-转角转角无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽无规

21、卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。链结构。第43页，共105页，编辑于2022年，星期一（五）模体（五）模体是具有特殊功能的超二级结构是具有特殊功能的超二级结构在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个有规则的二有规则的二级结构组合，被称为级结构组合，被称为超二级结构超二级结构。二级结构组合形式有二级结构组合形式有3 3种：种：，。第44页，共105页，编辑于2022年，星期一二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，

22、形成一个特殊的空间构象，称为相互接近，形成一个特殊的空间构象，称为模体模体(motif)。模体是具有特殊功能的超二级结构。模体是具有特殊功能的超二级结构。第45页，共105页，编辑于2022年，星期一钙结合蛋白中结合钙离钙结合蛋白中结合钙离子的模体子的模体锌指结构锌指结构-螺旋螺旋-转角（或环）转角（或环）-螺旋模体螺旋模体链链-转角转角-链模体链模体链链-转角转角-螺旋螺旋-转转角角-链模体链模体n模体常见的形式模体常见的形式第46页，共105页，编辑于2022年，星期一（六）氨基酸残基的（六）氨基酸残基的侧链对侧链对二二级结级结构形成的影响构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一

23、蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成-螺旋或螺旋或-折折叠，它就会出现相应的二级结构。叠，它就会出现相应的二级结构。第47页，共105页，编辑于2022年，星期一三、三、蛋白质三级结构蛋白质三级结构疏水键、离子键、氢键和疏水键、离子键、氢键和 Van der Waals力力等。等。n主要的化学键主要的化学键:整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。链中所有原子在三维空间的排布位置。n定义定义:（一）三级结构是指整条肽链中全部氨基酸残（一）三级结构是

24、指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置基的相对空间位置第48页，共105页，编辑于2022年，星期一第49页，共105页，编辑于2022年，星期一 肌红蛋白肌红蛋白(Mb)N 端端 C端端第50页，共105页，编辑于2022年，星期一纤连蛋白分子的结构域纤连蛋白分子的结构域（二）结构域（二）结构域是三级结构层次上的局部折叠区是三级结构层次上的局部折叠区分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧密的区域，并各行其功能，称为密的区域，并各行其功能，称为结构域结构域(domain)。第51页，共105页，编辑于2022年，星期一（三）分子伴侣（三）分子伴侣

25、参与蛋白质折叠参与蛋白质折叠分子伴侣分子伴侣(chaperon)通过提供一个保护环境从而加速蛋通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。白质折叠成天然构象或形成四级结构。分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。确折叠。分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。诱导其正确折叠。分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成起分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二

26、硫键的正确形成起了重要的作用。了重要的作用。第52页，共105页，编辑于2022年，星期一伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用第53页，共105页，编辑于2022年，星期一亚基之间的结合主要是亚基之间的结合主要是氢键和离子键氢键和离子键。四、四、蛋白质的四级结构蛋白质的四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结蛋白质的四级结构构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的多肽链都有完整的三

27、级结构，称为蛋白质的亚基亚基 (subunit)。第54页，共105页，编辑于2022年，星期一由由2个个亚亚基基组组成成的的蛋蛋白白质质四四级级结结构构中中，若若亚亚基基分分子子结结构构相相同同，称称之之为为同同二二聚聚体体(homodimer)，若若亚亚基基分分子子结结构构不不同同，则称之为则称之为异二聚体异二聚体(heterodimer)。血红蛋白的四血红蛋白的四级结构级结构第55页，共105页，编辑于2022年，星期一五、蛋白质的分类五、蛋白质的分类n根据蛋白质组成成分根据蛋白质组成成分:单纯蛋白质单纯蛋白质结合蛋白质结合蛋白质=蛋白质部分蛋白质部分+非蛋白质部分非蛋白质部分n根据蛋白

28、质形状根据蛋白质形状:纤维状蛋白质纤维状蛋白质球状蛋白质球状蛋白质第56页，共105页，编辑于2022年，星期一六、蛋白质组学六、蛋白质组学（一）蛋白质组学基本概念（一）蛋白质组学基本概念蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质，即的全部蛋白质，即“一种基因组所表达的全套一种基因组所表达的全套蛋白质蛋白质”。第57页，共105页，编辑于2022年，星期一（二）蛋白质组学研究技术平台（二）蛋白质组学研究技术平台 蛋白质组学是高通量，高效率的研究蛋白质组学是高通量，高效率的研究:双向电泳分离样品蛋白质双向电泳分离样品蛋白质 蛋白质点的定位、切取蛋白质点的

29、定位、切取 蛋白质点的质谱分析蛋白质点的质谱分析 （三）蛋白质组学研究的科学意义（三）蛋白质组学研究的科学意义第58页，共105页，编辑于2022年，星期一蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第三节第三节第59页，共105页，编辑于2022年，星期一（一）一级结构是空间构象的基础（一）一级结构是空间构象的基础一、蛋白质一级结构一、蛋白质一级结构是高级结构是高级结构与功能的基础与功能的基础牛核糖核酸酶的牛核糖核酸酶的一级结构一级结构二二硫硫键键第60页，共105页，编辑于2022年，星期一

30、天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性第61页，共105页，编辑于2022年，星期一（二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结（二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能构与功能胰岛素胰岛素氨基酸残基序号氨基酸残基序号A5A6A10B30人人ThrSerIleThr猪猪ThrSerIleAla狗狗ThrSerIleAla兔兔ThrGlyIleSer牛牛AlaGlyValAla羊羊AlaSerValAla马马ThrSerIleAla第62页，共105页，编辑于2022年，星期一（三

31、）（三）氨基酸序列提供重要的生物化学信息氨基酸序列提供重要的生物化学信息一些广泛存在于生物一些广泛存在于生物界的蛋白质如细胞色素界的蛋白质如细胞色素(cytochrome C)，比较它们，比较它们的一级结构，可以帮助了的一级结构，可以帮助了解物种进化间的关系。解物种进化间的关系。第63页，共105页，编辑于2022年，星期一（四）重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病（四）重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病n例：镰刀形红细胞贫血例：镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽链肽链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro

32、 val glu C(146)这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为为“分子病分子病”。第64页，共105页，编辑于2022年，星期一n肌红蛋白肌红蛋白/血红蛋白含血红蛋白含有血红素辅基有血红素辅基血红素结构血红素结构 二、二、蛋白质的功能依赖特定空间结构蛋白质的功能依赖特定空间结构（一）（一）血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似第65页，共105页，编辑于2022年，星期一n肌红蛋白肌红蛋白(myoglobin，Mb)肌肌红红蛋蛋白白是是一一个个只只有有三三级级结结构的单链蛋白质，有构的单链蛋白质，有8 8段段-螺旋结构。螺

33、旋结构。血血红红素素分分子子中中的的两两个个丙丙酸酸侧侧链链以以离离子子键键形形式式与与肽肽链链中中的的两两个个碱碱性性氨氨基基酸酸侧侧链链上上的的正正电电荷荷相相连连，加加之之肽肽链链中中的的F8F8组组氨氨酸酸残残基基还还与与FeFe2+2+形形成成配配位位结结合合，所所以以血血红红素素辅基与蛋白质部分稳定结合。辅基与蛋白质部分稳定结合。第66页，共105页，编辑于2022年，星期一n血红蛋白血红蛋白(hemoglobin，Hb)血血红红蛋蛋白白具具有有4个个亚亚基基组组成成的的四四级级结结构构，每每个个亚亚基基可可结结合合1 1个个血血红红素素并并携带携带1 1分子氧分子氧。Hb亚亚基基

34、之之间间通通过过8对对盐盐键键，使使4个个亚亚基基紧紧密密结结合合而而形成亲水的球状蛋白。形成亲水的球状蛋白。第67页，共105页，编辑于2022年，星期一Hb与与Mb一一样样能能可可逆逆地地与与O2结结合合，Hb与与O2 2结结合合后后称称为为氧氧合合Hb。氧氧合合Hb占占总总Hb的的百百分分数数（称（称百分饱和度百分饱和度）随）随O2 2浓度变化而改变。浓度变化而改变。（二）血红蛋白亚基构象变化可影响亚基与（二）血红蛋白亚基构象变化可影响亚基与氧结合氧结合第68页，共105页，编辑于2022年，星期一肌红蛋白肌红蛋白(Mb)和血红蛋白和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线的氧解离曲线第69页，共1

35、05页，编辑于2022年，星期一n协同效应协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为合能力的现象，称为协同效应协同效应。如果是促进作用则称为如果是促进作用则称为正协同效应正协同效应 (positive cooperativity)如果是抑制作用则称为如果是抑制作用则称为负协同效应负协同效应(negative cooperativity)第70页，共105页，编辑于2022年，星期一第71页，共105页，编辑于2022年，星期一O2

36、血血红红素素与与氧氧结结合合后后，铁铁原原子子半半径径变变小小，就就能能进进入入卟卟啉啉环环的的小小孔孔中中，继继而而引引起起肽肽链链位位置置的的变动。变动。第72页，共105页，编辑于2022年，星期一n变构效应变构效应(allosteric effect)蛋蛋白白质质空空间间结结构构的的改改变变伴伴随随其其功功能能的的变化，称为变化，称为变构效应变构效应。第73页，共105页，编辑于2022年，星期一（三）蛋白质构象改变（三）蛋白质构象改变可引起疾病可引起疾病蛋蛋白白质质构构象象疾疾病病：若若蛋蛋白白质质的的折折叠叠发发生生错错误误，尽尽管管其其一一级级结结构构不不变变，但但蛋蛋白白质质的

37、的构构象象发发生生改改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。第74页，共105页，编辑于2022年，星期一蛋白质构象改变导致疾病的机理蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。第75页

38、，共105页，编辑于2022年，星期一疯牛病是由朊病毒蛋白疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein,PrP)引起的一引起的一组人和动物神经退行性病变。组人和动物神经退行性病变。正常的正常的PrP富含富含-螺旋，称为螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折折叠的叠的PrPsc，从而致病。，从而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折叠折叠正常正常疯牛病疯牛病n疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病中的蛋白质构象改变第76页，共105页，编辑于2022年，星期一第四节第四节蛋白质的理化性质蛋白质的理化性质The Physical and

39、 Chemical Characters of Protein第77页，共105页，编辑于2022年，星期一一、一、蛋白质具有两性电离的性质蛋白质具有两性电离的性质蛋蛋白白质质分分子子除除两两端端的的氨氨基基和和羧羧基基可可解解离离外外，氨氨基基酸酸残残基基侧侧链链中中某某些些基基团团，在在一一定定的的溶溶液液pH条条件件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。当当蛋蛋白白质质溶溶液液处处于于某某一一pH时时，蛋蛋白白质质解解离离成成正正、负负离离子子的的趋趋势势相相等等，即即成成为为兼兼性性离离子子，净净电电荷荷为为零零，此此时溶液的时溶液的pH称为称为蛋白质

40、的等电点蛋白质的等电点。n蛋白质的等电点蛋白质的等电点(isoelectric point,pI)第78页，共105页，编辑于2022年，星期一二、蛋白质具有胶体性质二、蛋白质具有胶体性质蛋蛋白白质质属属于于生生物物大大分分子子之之一一，分分子子量量可可自自1万万至至100万万之之巨巨，其其分分子子的的直直径径可可达达1100nm，为为胶粒范围之内。胶粒范围之内。颗粒表面电荷颗粒表面电荷水化膜水化膜n蛋白质胶体稳定的因素蛋白质胶体稳定的因素:第79页，共105页，编辑于2022年，星期一+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化

41、膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉溶液中蛋白质的聚沉第80页，共105页，编辑于2022年，星期一三、蛋白质空间结构破坏而引起变性三、蛋白质空间结构破坏而引起变性在在某某些些物物理理和和化化学学因因素素作作用用下下，其其特特定定的的空空间间构构象象被被破破坏坏，也也即即有有序序的的空空间间结结构构变变成成无无序序的的空空间间结结构构，从从而而导导致致其其理理化化性性质质改改变变和和生生物物活活性性的丧失。的丧失。n蛋白质的变性蛋白质的变

42、性(denaturation)第81页，共105页，编辑于2022年，星期一n造成变性的因素造成变性的因素:如如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等金属离子及生物碱试剂等。n变性的变性的本质本质:破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。质的一级结构。第82页，共105页，编辑于2022年，星期一n 应用举例应用举例:临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条

43、件。（如疫苗等）的必要条件。第83页，共105页，编辑于2022年，星期一若若蛋蛋白白质质变变性性程程度度较较轻轻，去去除除变变性性因因素素后后，蛋蛋白白质质仍仍可可恢恢复复或或部部分分恢恢复复其其原原有有的的构构象象和和功功能能，称称为为复性复性(renaturation)。第84页，共105页，编辑于2022年，星期一 天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性第85页，共105页，编辑于2022年，星期一在在一一定定条条件件下下，蛋蛋白白疏疏水水侧侧链链暴暴露露在在外外，肽肽链链融会

44、相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变变性性的的蛋蛋白白质质易易于于沉沉淀淀，有有时时蛋蛋白白质质发发生生沉沉淀淀，但但并不变性并不变性。蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。此凝块不易再溶于强酸和强碱中。n蛋白质沉淀蛋白质沉淀n蛋白质的凝固作用蛋白质的凝固作用(protein coagulation)第86页，共105页，编辑于2022年，星期一四、蛋白质四、蛋白质在紫外光谱区有特征性吸收峰在紫外光谱区有特征性吸收峰由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和由于蛋白质分子中

45、含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋波长处有特征性吸收峰。蛋白质的白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。质定量测定。第87页，共105页，编辑于2022年，星期一蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。反应。蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。五

46、、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质溶液含量溶液含量1.茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)2.双缩脲反应双缩脲反应(biuret reaction)第88页，共105页，编辑于2022年，星期一第五节第五节蛋白质的分离纯化与结构分析蛋白质的分离纯化与结构分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein第89页，共105页，编辑于2022年，星期一一、一、透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的小分子化合物小分子化合物应用正压或离心

47、力使蛋白质溶液透过有一定截应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。n透析透析(dialysis)n超滤法超滤法利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法分开的方法。第90页，共105页，编辑于2022年，星期一二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋白质沉淀方法白质沉淀方法使用使用丙酮沉淀丙酮沉淀时，必须在时，必须在04低温下进行，丙酮低温下进行，丙酮用量一般用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀倍于蛋白质溶液体积。蛋

48、白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。盐析盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。第91页，共105页，编辑于2022年，星期一免疫沉淀法：免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原

49、抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。离获得抗原蛋白。第92页，共105页，编辑于2022年，星期一三、利用荷电性质可用电泳法将蛋三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离白质分离蛋蛋白白质质在在高高于于或或低低于于其其pIpI的的溶溶液液中中为为带带电电的的颗颗粒粒，在在电电场场中中能能向向正正极极或或负负极极移移动动。这这种种通通过过蛋蛋白白质质在在电电场场中中泳泳动动而而达达到到分分离离各各种种蛋蛋白白质质的的技技术术,称称为为电泳电泳(elctrophoresis)。根根据据支支撑撑物物的的不不同同，可可分分为为薄薄膜膜电电

50、泳泳、凝凝胶胶电电泳泳等。等。第93页，共105页，编辑于2022年，星期一SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的，常用于蛋白质分子量的测定。测定。等电聚焦电泳等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。白质的电泳方法。双向凝胶电泳双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。是蛋白质组学研究的重要技术。n几种重要的蛋白质电泳几种重要的蛋白质电泳:第94页，共105页，编辑于2022年，星期一四、四、应用相分配或亲和原理可将蛋白质应用相分配或亲和原理可将蛋白质进行层析分离进行层析分离待待分分离离蛋蛋白白质质溶溶液液（流流动动