甲肝疫苗研制与应用.ppt

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1、现在学习的是第1页，共49页一、甲型肝炎及甲型肝炎病毒二、甲肝疫苗的研制三、甲肝疫苗的应用四、甲肝疫苗的研究趋势和展望现在学习的是第2页，共49页 甲型肝炎(简称甲肝)是一种人类普遍易感的高发病率的肠道传染病，由于其流行的普遍性和严重性，已成为一个世界性公共卫生问题。在病毒性肝炎中发病率及感染率最高。即使在低发区和非流行时，一般都占急性病毒性肝炎的50左右。甲肝的流行时有发生。甲型肝炎严重危害人类健康。一、甲型肝炎及甲型肝炎病毒现在学习的是第3页，共49页 20世纪90年代以前，全国各地甲肝大小流行不断，年发病人数逾百万，农村中成年人85%以上受感染，1988年上海发生的甲肝大流行发病人数达3

2、2万，我国是世界上甲肝流行最严重的国家之一，严重危害人民健康。预防和控制甲肝最有力的手段-研究甲肝疫苗。现在学习的是第4页，共49页 （一）、甲肝流行病学（一）、甲肝流行病学l 1、传染源、传染源l 传染源主要为病人和病毒携带者的粪便。传染源主要为病人和病毒携带者的粪便。1)、病人、病人 甲肝潜伏期为甲肝潜伏期为28天（天（15-50天）。病人天）。病人潜伏期和发病后潜伏期和发病后2-3周内的粪便和血液有传周内的粪便和血液有传染性。染性。发病前发病前4天天至发病后至发病后4-6天传染性最强。天传染性最强。2)、病毒携带者、病毒携带者 甲肝亚临床或隐性感染者作为传染源在甲肝亚临床或隐性感染者作为

3、传染源在流行病学上很有意义。流行病学上很有意义。现在学习的是第5页，共49页2 2、传播途径、传播途径l 甲肝病毒的传播主要是通过粪甲肝病毒的传播主要是通过粪-口途径口途径的人人传播。受感染者的的人人传播。受感染者的粪便粪便直接或间接直接或间接的的污染水源污染水源或或食物食物在传播中起主要作用。在传播中起主要作用。也可经血液（注射或输血也可经血液（注射或输血)途径传播。途径传播。l 甲肝的流行通常发生在幼儿园、学校、甲肝的流行通常发生在幼儿园、学校、监狱和其他人口密度较高的群体。监狱和其他人口密度较高的群体。现在学习的是第6页，共49页 3 3、易感人群、易感人群l 人群对人群对HAVHAV有

4、普遍的易感性，感染后有普遍的易感性，感染后可产生稳固而持久的免疫力。可产生稳固而持久的免疫力。l在发展中国家，儿童期已大部分获得在发展中国家，儿童期已大部分获得感染。发达国家，由于卫生条件及其它措感染。发达国家，由于卫生条件及其它措施的改善，发病率逐渐降低，发病高峰后施的改善，发病率逐渐降低，发病高峰后移至青壮年。由此也导致了人群抗移至青壮年。由此也导致了人群抗-HAV-HAV水水平的下降和易感人群的增加。平的下降和易感人群的增加。现在学习的是第7页，共49页 4.流行特征流行特征l 甲肝可呈集体暴发流行甲肝可呈集体暴发流行(通常发生在通常发生在幼儿园、学校、监狱和其他人口密度较高幼儿园、学校

5、、监狱和其他人口密度较高的群体的群体)。多发生于秋冬季。发达国家。多发生于秋冬季。发达国家季节性消失，呈常年散在发生。国内季节性消失，呈常年散在发生。国内外曾多次报道，污染水源或水产品而外曾多次报道，污染水源或水产品而引起甲肝暴发流行。引起甲肝暴发流行。现在学习的是第8页，共49页 5 5、感染类型、感染类型l 感染甲肝后患者可表现为三种不同感染类型感染甲肝后患者可表现为三种不同感染类型l 1)1)显性肝炎显性肝炎l 2)2)亚临床型肝炎亚临床型肝炎l 3)3)隐性感染隐性感染l 甲型肝炎其隐性感染者较多，呈急性发病者较多，甲型肝炎其隐性感染者较多，呈急性发病者较多，伴有黄疸症状和全身症状明显

6、。伴有黄疸症状和全身症状明显。l 亚临床感染和隐性感染是造成甲肝流行的一个亚临床感染和隐性感染是造成甲肝流行的一个必要条件。必要条件。现在学习的是第9页，共49页 （二）、甲肝实验室诊断（二）、甲肝实验室诊断 1、肝功能改变、肝功能改变 2、血浆白蛋白降低、血浆白蛋白降低 3、免疫学检测、免疫学检测 1)、在粪便、肝组织、胆汁、血液中、在粪便、肝组织、胆汁、血液中能直接证明有能直接证明有HAV。2)、检测甲肝、检测甲肝IgM抗体，诊断是否甲抗体，诊断是否甲型肝炎的感染。型肝炎的感染。现在学习的是第10页，共49页 二、甲肝疫苗的研制二、甲肝疫苗的研制l甲肝疫苗研究和使用主要依据有甲肝疫苗研究和

7、使用主要依据有:1、HAV只有一个血清型。只有一个血清型。2、感染后可获得牢固的免疫力。、感染后可获得牢固的免疫力。3、HAV可以在细胞培养繁殖，提供了病毒的来源。可以在细胞培养繁殖，提供了病毒的来源。4、有用于检测疫苗安全、效力试验及评价减毒株减、有用于检测疫苗安全、效力试验及评价减毒株减毒水平的动物模型。毒水平的动物模型。现在学习的是第11页，共49页 为何研发减毒活疫苗1、减毒活疫苗的优点和优势基于免疫学原理2、部分病毒性传染病灭活疫苗无效3、活疫苗的缺点现在学习的是第12页，共49页减毒活疫苗的免疫学基础细胞免疫：直接由细胞如NK细胞和T细胞执行效力功能。体液免疫：由体液介导，实际上包

8、括所有液相分子。抗体 细胞因子 趋化因子 补体常被错误地理解为仅仅是抗体免疫。体液免疫和细胞免疫两者是重叠的。现在学习的是第13页，共49页 减毒活疫苗和灭活疫苗主要区别减毒活疫苗MHCI类和MHCII类分子途径都能提呈抗原，产生体液、细胞免疫。灭活疫苗主要通过MHCII类分子途径产生提呈抗原，产生体液免疫。细胞外抗原主要刺激CD4分子减毒活疫苗的免疫学基础现在学习的是第14页，共49页比较灭活疫苗活疫苗特点 用灭活的病原微生物制成在制备过程中，其灭活步骤可杀灭任何可能污染的其它生物学因子 疫苗中残存灭活剂、防腐剂 不能产生分泌型抗体，可能产生毒性或潜在的有害免疫反应免疫缺陷者接种安全 用弱毒

9、或无毒活病原微生物制成无灭活步骤，疫苗中可能污染危险因子 可采取模拟自然感染的途径免疫，疫苗进入机体内可有一定增殖 能产生分泌型抗体 疫苗在机体内有毒力恢复的潜在危险性 有可能形成潜在感染和传播灭活疫苗与活疫苗的比较现在学习的是第15页，共49页灭活疫苗与活疫苗的比较比较灭活疫苗活疫苗保存接种研制效果成本 疫苗较稳定，易于保存和运输，有效期较长 需多次免疫，接种剂量大 开发周期相对短，相对简单 效果差，维持时间短，需加入佐剂 生产成本高，纯化抗原工艺复杂 疫苗不稳定，严格冷链运输，效期相对较短 一般只需一次免疫，接种剂量小 减毒株筛选时间长 免疫效果巩固，维持时间长 生产成本低，常需制成冻干制

10、剂现在学习的是第16页，共49页灭活疫苗致免疫增强作用 接种灭活麻疹疫苗后可预防疾病，但几年后接种者感染自然流行的麻疹后会产生非典型疾病，并伴有增强的全身症状和肺炎。原因是：用甲醛灭活麻疹病毒时破坏了F蛋白(融合蛋白)，从而使F诱生血溶抑制抗体的能力下降，但不破坏H 蛋白（血凝素）诱生抗体的能力，当血凝素抗体下降到病毒能再感染时，由于机体无抗F蛋白抗体，麻疹病毒的复制位点发生改变，引起严重的疾病。现在麻疹疫苗都使用减毒活疫苗，避免由于灭活疫苗的使用而引起的免疫增强作用。麻疹现在学习的是第17页，共49页灭活疫苗的免疫增强作用 呼吸道合胞病毒 在60年代，用福尔马林灭活呼吸道合胞病毒疫苗免疫婴幼

11、儿，发现接种者在随后的呼吸道合胞病毒感染时发生严重下呼吸道疾病的机率大于其他婴幼儿。原因可能 1、是由于该疫苗是肌肉接种，不能对呼吸道产生足够的局部IgA抗体，使接种者的免疫系统不同部分之间或内部呈现不平衡状态，这种不平衡状态可能更容易感染病毒，并使疾病加强。现在学习的是第18页，共49页原因可能是 2、疫苗接种后诱导高水平的CD4+细胞，而不能诱导CD8+细胞，导致细胞免疫的不平衡，而且CD4+细胞中的Th1和Th2亚群比率倒置，使Th2亚群点的炎症加剧，造成更严重的支气管炎和肺炎。灭活疫苗的免疫增强作用 呼吸道合胞病毒现在学习的是第19页，共49页 1、甲肝灭活疫苗、甲肝灭活疫苗l 国外主

12、要研制和发展的是灭活疫苗。国外主要研制和发展的是灭活疫苗。l 1995年年SmithKline(史克史克)公司的公司的HM175株和株和Merck(墨克墨克)公司的公司的CR326F株所制备的甲肝灭活疫苗经美株所制备的甲肝灭活疫苗经美国国FDA批准后，儿童甲肝疫苗策略逐步实施最后步批准后，儿童甲肝疫苗策略逐步实施最后步骤：全国儿童甲肝常规接种，创造最终消灭本土家肝骤：全国儿童甲肝常规接种，创造最终消灭本土家肝病毒传播基础。病毒传播基础。l 美国甲肝流行模式在疫苗使用前和疫苗时代有美国甲肝流行模式在疫苗使用前和疫苗时代有显著的不同。显著的不同。1988年年-1994年，年发病率超过年，年发病率超

13、过20/10万。万。2004年，年发病率年，年发病率2.7/10万。万。现在学习的是第20页，共49页l 法国巴斯德研究所的GBM株甲肝灭活疫苗和瑞士血清学研究所的RG-SB毒株，已批准上市。l 我国唐山怡安生物北大科兴和昆明生物研究所研制的TZ84株、Lu-8株甲肝灭活疫苗，2003年被批准生产上市。l云南沃森、上海惠生、长春百克等公司甲肝灭活疫苗研制处在不同阶段。l 现在学习的是第21页，共49页 2 2、甲肝减毒活疫苗、甲肝减毒活疫苗1 1）、国外甲肝减毒活疫苗研究）、国外甲肝减毒活疫苗研究 国外以美国国外以美国MerkMerk公司为代表的甲肝公司为代表的甲肝减毒活疫苗研究领域，目前仍处

14、于早期减毒活疫苗研究领域，目前仍处于早期实验室研究及小量人体观察阶段，累计实验室研究及小量人体观察阶段，累计观察人数不足百人。观察人数不足百人。现在学习的是第22页，共49页 Results of Trials of F and F Vaccines in Adult Human Volunteers dose No.with of vaccine virus No.ALT HAVAB (TCID50)subjects elevation HAVAB M F(105.6)9 3/9a 9/9 9/9 F(105.6)11 2/11b 6/11 8/11 F(104.6)9 3/9c 6/9 6

15、/9 F(103.6)8 1/8d 2/8 2/8 F(106.3)11 0/11 6/11 10/11 CR326现在学习的是第23页，共49页2)、国内甲肝减毒活疫苗研制该项目为国家“七五”、“八五”和“九五”重大科技攻关项目，具有我国自主知识产权的科技成果。L-A-1株：黑龙江省疾病控制中心 上海市疾病控制中心长春生物制品研究所H2株：浙江医学科学院 昆明生物研究所现在学习的是第24页，共49页甲型肝炎病毒L-A-1疫苗株选育1、减毒过程和方法2、减毒株的减毒标志3、动物模型系列试验4、攻击保护试验5、减毒株的传代及鉴定6、疫苗制备7、血清中和抗体测定 8、实验性疫苗接种绒猴观察 9、甲

16、肝疫苗保存稳定性试验等现在学习的是第25页，共49页19851985年年19911991年年临床前研究临床前研究、期临床研究期临床研究中试和万人临床观察和免疫效果研究中试和万人临床观察和免疫效果研究19921992年年获得新药证书、试生产文号获得新药证书、试生产文号19961996年年获生产文号获生产文号现在学习的是第26页，共49页三批疫苗三批疫苗:901,9092,903:901,9092,903观察接种：观察接种：1200012000人，二个月随访。人，二个月随访。接种对象分布：接种对象分布：4-54-5岁：岁：10541054人人 6 63 3岁：岁：82168216人人 14148

17、8 岁：岁：10841084人人 19 19 岁以上：岁以上：408408人人 500500人精细观察人精细观察现在学习的是第27页，共49页局部及全身反应：局部及全身反应：弱反应：弱反应：0.94%0.94%2.4%2.4%中反应：中反应：0.95%0.95%1.8%1.8%血清肝酶变化：无肝酶升高现象血清肝酶变化：无肝酶升高现象疫苗免疫后抗体应答：疫苗免疫后抗体应答：抗体阳转率：抗体阳转率：4 4周：周：93.6%GMT:5.1-6.293.6%GMT:5.1-6.2 12 12周：周：97.5%97.5%受试者粪便受试者粪便HAAgHAAg检测及检测及HAVHAV分离：分离：HAAgHA

18、Ag检测：阴性检测：阴性HAVHAV增殖试验：阴性增殖试验：阴性 病毒扩散能力非常有限，对密切接触者水平传播可能性很小。病毒扩散能力非常有限，对密切接触者水平传播可能性很小。一般反应观察及流行病学效果考察一般反应观察及流行病学效果考察二年不同地区、不同年龄组随访观察，未见甲肝发病者。二年不同地区、不同年龄组随访观察，未见甲肝发病者。现在学习的是第28页，共49页现在学习的是第29页，共49页 冻干甲肝减毒活疫苗的研制冻干甲肝减毒活疫苗的研制 液体剂型疫苗因无有效保护剂，需液体剂型疫苗因无有效保护剂，需20以下低温冻结贮存、冷以下低温冻结贮存、冷链运输，链运输，28有效期仅为有效期仅为35个月，

19、对疫苗的推广应用和接种个月，对疫苗的推广应用和接种效果及开发国际市场等带来了难以克服的困难。效果及开发国际市场等带来了难以克服的困难。甲肝病毒的某些生物学特性为类似于脊髓灰质炎病毒、轮状病毒等甲肝病毒的某些生物学特性为类似于脊髓灰质炎病毒、轮状病毒等其它肠道病毒属，皆为无脂蛋白包膜的微小其它肠道病毒属，皆为无脂蛋白包膜的微小RNA病毒，长期以来，病毒，长期以来，国内外一直未能解决此类病毒冷冻干燥问题，冷冻干燥后极易失国内外一直未能解决此类病毒冷冻干燥问题，冷冻干燥后极易失活。如脊髓灰质炎疫苗、轮状病毒疫苗等至今尚未解决冷冻干燥活。如脊髓灰质炎疫苗、轮状病毒疫苗等至今尚未解决冷冻干燥问题。问题。

20、l 现在学习的是第30页，共49页1、首创研制成功冻干甲型肝炎减毒活疫苗及其保护剂。2、完成冻干甲肝疫苗及其保护剂工业化生产工艺研究。、2001年首家获国家药品监督管理局颁发的新药证书及生产文号。4、获国家发明专利及国际专利（PCT）。现在学习的是第31页，共49页l 表表1 1 冻干甲肝减毒活疫苗接种后反应观察冻干甲肝减毒活疫苗接种后反应观察l 观察观察 局部反应局部反应 全身反应（全身反应（%）l分组分组 人数人数 (红、肿、热、痛红、肿、热、痛)无无 弱弱 中中 强强l A 113 0A 113 0 99.11(112)0.88(1)0(0)0(0)99.11(112)0.88(1)0(

21、0)0(0)l B 114 0 B 114 0 99.12(113)0.87(1)0(0)0(0)99.12(113)0.87(1)0(0)0(0)l C 108 0 98.15(106)0.00(0)0(0)0(0)C 108 0 98.15(106)0.00(0)0(0)0(0)l D 116 0 D 116 0 98.28(114)0.86(1)0(0)0(0)98.28(114)0.86(1)0(0)0(0)l Y 113 0 98.23(111)0.88(1)0(0)Y 113 0 98.23(111)0.88(1)0(0)0(0)0(0)l结果表明：所有志愿者均无有关的局部及全身临

22、床反应。结果表明：所有志愿者均无有关的局部及全身临床反应。现在学习的是第32页，共49页 表表2 2 冻干甲肝减毒活疫苗接种后冻干甲肝减毒活疫苗接种后SGPTSGPT变化情况变化情况l 0 0 月月 1 1 月月 2 2 月月l分组分组 检查人数检查人数 异常人数异常人数 检查人数检查人数 异常人数异常人数 检查人数检查人数 异常人数异常人数l A A 113 0 113 113 0 113 0 0 113 0 113 0l B B 114 114 0 0 114 114 0 0 114 0 114 0l C C 108 108 0 0 108 108 0 0 108 0 108 0l D D

23、 116 116 0 0 116 116 0 0 106 0 106 0l l Y Y 113 113 0 113 0 113 0 0 100 0 100 0l SGPT采用改良赖氏法检测,结果25u/ml为异常升高。现在学习的是第33页，共49页l 表表3 3 冻干甲肝减毒活疫苗一针程序免后的抗体水平冻干甲肝减毒活疫苗一针程序免后的抗体水平l免后免后 人数人数 阳性数阳性数 阳性率阳性率 抗体水平抗体水平mIU/mlmIU/mll时间时间 (%)(%)1000 200 200-1000 1000 平均平均 高值高值 低值低值l一月一月 113 111 98.2 60 29 22 742 67

24、19 137113 111 98.2 60 29 22 742 6719 137l二月二月 99 99 100 46 39 14 505 4028 12599 99 100 46 39 14 505 4028 125现在学习的是第34页，共49页 表表4 4 冻干甲肝减毒活疫苗免疫效果及免疫策略研究冻干甲肝减毒活疫苗免疫效果及免疫策略研究分组分组 疫苗滴度疫苗滴度 免疫免疫 抗体阳转率抗体阳转率%(%(月月)抗体水平抗体水平mIU/ml(mIU/ml(月月)抗体抗体水平水平l CCID50/ml CCID50/ml 程序程序(月月)1 2 6 7 1 2 6 7 )1 2 6 7 1 2 6

25、7 增长增长(倍倍)Y 6.5 Y 6.5 一针一针 98.2 97.5 742 50598.2 97.5 742 505A 6.5 0,1 98.2 100 121 3451 28.5A 6.5 0,1 98.2 100 121 3451 28.5B 6.5 0,6 ND ND 86.6 100 424 2823 6.7B 6.5 0,6 ND ND 86.6 100 424 2823 6.7C 6.0 0,1 94.8 100 84 2158 25.7 C 6.0 0,1 94.8 100 84 2158 25.7 D 6.0 0,6 ND ND 55 100 327 2001 6.1D

26、6.0 0,6 ND ND 55 100 327 2001 6.1 结果表明：一针免疫抗体阳转率达结果表明：一针免疫抗体阳转率达9595以上，二针免疫抗体阳率均达以上，二针免疫抗体阳率均达100100 现在学习的是第35页，共49页 冻干甲肝减毒活疫苗与液体甲肝减毒活疫苗冻干甲肝减毒活疫苗与液体甲肝减毒活疫苗 稳定性的比较稳定性的比较l 温温 度度 稳稳 定定 性性l 冻干甲肝疫苗冻干甲肝疫苗 液体甲肝疫苗液体甲肝疫苗l 2-8 18个月个月 35个月个月l 2225 18周周 1周周 l 37 21天天 2 天天l20以下以下 26个月个月 12个月个月现在学习的是第36页，共49页现在学习

27、的是第37页，共49页现在学习的是第38页，共49页2006年开始规模生产冻干甲肝减毒活疫苗 生产情况及国家批签发情况2006年2007年批签发 批25批合格证批 25批疫苗生产周期6个月现在学习的是第39页，共49页 长春所甲肝疫苗生产优势 单一品种国内外最大甲肝疫苗研发和生产基地，生产用设施、设备技术含量高，适宜规模化、工业化生产、疫苗生产过程可控性强、生产稳定。疫苗品质优势 采用独特生产工艺和独家使用的疫苗稳定剂，获国家技术发明二等奖、国家发明专利、美国、欧盟专利，疫苗的安全性高。20097年7月17日国家药典委员会病毒专业委员会企业注册标准会，中检所报告的结果证明了长春所疫苗的优势。现

28、在学习的是第40页，共49页三、甲肝减毒活疫苗的应用自1992年甲肝减毒活疫苗在全国范围内逐步推广应用，结果表明：甲肝减毒活疫苗具有非常良好的安全性、免疫原性和显著的流行病学保护效果。现在学习的是第41页，共49页免后周抗体阳转率及免后周抗体阳转率及GMTGMT：阳转率：阳转率：97.2%97.2%GMT:5.1GMT:5.12.32.3免后年抗体阳性率：免后年抗体阳性率：抗体阳性率抗体阳性率%GMT%GMT 年年 93.393.3年年 88.8 2.4 88.8 2.4 2.1 2.1年年 82.8 82.8 年年 80.7 1.8 80.7 1.8 2.1 2.1现在学习的是第42页，共4

29、9页局部及全身反应局部及全身反应除个别由弱中反应外，无其他不良反应。除个别由弱中反应外，无其他不良反应。肝酶肝酶SGPTSGPT检查检查对照组无一肝酶升高，观察组肝酶值与免前相比，无有临床意的改变。对照组无一肝酶升高，观察组肝酶值与免前相比，无有临床意的改变。抗体应答抗体应答 抗体阳转率抗体阳转率(W(W)GMT(W)GMT(W)2 4 8 4 8 2 4 8 4 8观察组：观察组：181181人人44.5 84.2 93.0 4.9 44.5 84.2 93.0 4.9 2.12.15.8 5.8 2.52.5对照组：对照组：163163人人 43.0 83.7 94.7 5.0 43.0

30、83.7 94.7 5.0 2.4 5.8 2.4 5.8 2.92.9现在学习的是第43页，共49页 儿童中进行随儿童中进行随 机对照试验，各组机对照试验，各组2020余万人。接种一剂规范化滴度疫苗。余万人。接种一剂规范化滴度疫苗。第一年观察中：对照组发病第一年观察中：对照组发病3838例，接种组未发现一例。例，接种组未发现一例。三年观察期满：对照组发病三年观察期满：对照组发病115115例，接种组发病例，保例，接种组发病例，保护效果达护效果达9797。现在学习的是第44页，共49页H2与L-A-1两组保护率一致，可见两株活疫苗预防效果极佳。史克公司甲肝灭活疫苗在泰国万名小学生进行研究，有效

31、率为92%。我国研制的甲肝活疫苗同国外报道的史克灭活疫苗相比，预防效果毫无逊色。现在学习的是第45页，共49页甲型肝炎减毒活疫苗接种后抗体水平疫苗株 剂量 接种三个月 接种六个月 TCID50 检测 阳性数 阳转率 GMT(mIU/ml)检测 阳性数 阳转率GMT(mIU/m 人数 人数 H2 107.0 102 94 92.2 87.1 101 88 87.1 90.7 LA-1 106.5 118 87 73.7 118.6 95 79 83.2 80.7现在学习的是第46页，共49页甲型肝炎减毒活疫苗接种组与对照组发病率 （免后1年1/10 000）组别 例数 H2株 LA-1株发病数

32、发病数发病数 发病数 个体随机法接种组对照组整群随机组接种组对照组29376 0 0 39170 0 032701 8 2.45 34093 13 3.81133463 0 0 58108 0 0128178 14 1.09 40263 3 0.74例数现在学习的是第47页，共49页甲肝减毒活疫苗接种组与对照组发病率 （免后 3 年 1/100，000）H2株 LA-1株组别 观察数 病例数 发病率 观察数 病例数 发病率 个体随机法 接种组 27668 1 3.6 58955 2 3.4 对照组 31224 22 70.4 55633 38 68.3整群随机法 接种组 84412 0 0 63488 0 0 对照组 79254 22 27.8 56617 33 58.3现在学习的是第48页，共49页甲肝病例发病的时间分布（L-A-1株，广西现场）甲肝病例发病的时间分布（H2株，河北现场）现在学习的是第49页，共49页