实验四类风湿因子检测讲稿.ppt

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1、实验四类风湿因子检测第一页，讲稿共二十三页哦类风湿因子的检测类风湿因子的检测 类风湿因子（类风湿因子（RF）是一种抗人或动物）是一种抗人或动物IgG分子分子Fc片片段抗原决定簇的抗体，是以段抗原决定簇的抗体，是以变性变性IgG为靶抗原的自身抗为靶抗原的自身抗体。体。RF最初由最初由Rose等（等（1984年）在类风湿性关节炎（年）在类风湿性关节炎（RA）患者血清中发现。）患者血清中发现。RA患者体内有产生患者体内有产生RF的的B细胞细胞克隆，在变性克隆，在变性IgG或或EB病毒的直接作用下可大量合成病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要为主要为19S的的IgM，也有，也有7S的的IgG和和I

2、gA，它与天，它与天然然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免或免疫复合物中的疫复合物中的IgG结合。结合。第二页，讲稿共二十三页哦 RF与体内变性的与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后可活化结合形成免疫复合物后可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等物质，在细胞因子和等物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发炎性粘附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。生骨关节炎及血管炎。第

3、三页，讲稿共二十三页哦类风湿性关节炎 类风湿关节炎类风湿关节炎(RA)(RA)：其病因及发病机制仍其病因及发病机制仍不完全明了不完全明了,推测可能为推测可能为外源性感染外源性感染作用于作用于遗传易感个体遗传易感个体,导致机体导致机体免疫系统紊乱免疫系统紊乱,进进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的的自身免疫性疾病自身免疫性疾病。第四页，讲稿共二十三页哦 RF在在RA患者中的阳性检出率很高，可达患者中的阳性检出率很高，可达79.6%，是，是RA患者患者血清中常见的自身抗体。高滴度血清中常见的自身抗体。高滴度RF阳性支持对早期阳性支持对早期RA的诊断，在的

4、诊断，在RA患者，患者，RF的滴度与患者的临床表现呈正相的滴度与患者的临床表现呈正相关，即随症状加重而效价升高。但关，即随症状加重而效价升高。但RF不是仅在不是仅在RA患者患者中出现，在中出现，在SLE、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中病患者和部分老年人中RF的阳性率可达的阳性率可达28.9%50%。因而因而RF对对RA患者并不具有严格特异性，患者并不具有严格特异性，RF阳性不能作为阳性不能作为诊断诊断RA的惟一标准。尽管在多种疾病中可有的惟一标准。尽管在多种疾病中可有RF阳性，但阳性，但滴均较低（滴均较低（40IU/ml），随着），随着R

5、F滴度增加，滴度增加，RF对对RA的的诊断特异性增高。诊断特异性增高。第五页，讲稿共二十三页哦类风湿因子的病理作用（一）类风湿因子的病理作用（一）类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类风湿性关节炎特异性风湿性关节炎特异性RFRF与自身与自身IgGIgG分子结合分子结合形成稳定的免疫复合物，部分被单核形成稳定的免疫复合物，部分被单核-吞噬吞噬细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激活细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激活补体导致血管炎。补体导致血管炎。第六页，讲稿共二十三页哦类风湿因子的病理作用（二类风湿因子的病理作用（二）关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正关节型损伤

6、由于类风湿关节滑液中缺少正常的常的IgGIgG分子，分子，IgG-RFIgG-RF自身结合形成多聚体自身结合形成多聚体复合物，复合物，IgG-RFIgG-RF多聚体沉积于关节表面激多聚体沉积于关节表面激活补体引起关节性损伤。活补体引起关节性损伤。第七页，讲稿共二十三页哦 常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA类风湿因子易于检测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。第八页，讲稿共二十三页哦 IgG

7、IgG型型RFRF：在：在RARA患者血清或滑膜液中患者血清或滑膜液中IgGIgG型型RFRF的出现与患者的出现与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此类的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此类RFRF常伴随常伴随高滴度的高滴度的IgMIgM型型RFRF在同一在同一RARA患者血清或滑膜液中出现。在正患者血清或滑膜液中出现。在正常人及非常人及非RARA患者中很难检测出患者中很难检测出IgGIgG型型RFRFIgGIgG型型RFRF在关节软在关节软骨表面的沉积可激活补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜骨表面的沉积可激活补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出液中检测出IgGIgG型型RFR

8、F比血清中检出比血清中检出IgMIgM型型RFRF更具病理意义。更具病理意义。RFRF检测方法一般有检测方法一般有胶乳凝集试验胶乳凝集试验、双抗原夹心、双抗原夹心ELISAELISA法、法、速率散射比浊法速率散射比浊法 。一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测定类风一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测定类风湿因子。湿因子。第九页，讲稿共二十三页哦类风湿因子的检测类风湿因子的检测 类风湿因子的主要类型：类风湿因子的主要类型：IgMIgM型型 特点：高凝集、易于沉淀特点：高凝集、易于沉淀 测定方法为：测定方法为：1 1、乳胶凝集法、乳胶凝集法2 2、酶联免疫吸附法、酶联免疫吸附法3

9、3、乳胶免疫比浊法、乳胶免疫比浊法第十页，讲稿共二十三页哦胶乳凝集试验检测胶乳凝集试验检测RF第十一页，讲稿共二十三页哦正向间接凝集试验正向间接凝集试验测测RFRF第十二页，讲稿共二十三页哦原理（胶乳凝集试验）原理（胶乳凝集试验）类风湿因子（类风湿因子（RFRF）是一组）是一组抗变性抗变性IgGIgG的自身抗体的自身抗体，它能与，它能与人或动物的变性人或动物的变性IgGIgG结合，而不与正常人结合，而不与正常人IgGIgG发生凝集发生凝集反应。反应。将处理过的人将处理过的人IgGIgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为颗粒载体上，称为致敏胶乳颗

10、粒致敏胶乳颗粒。当待检血清中有。当待检血清中有RFRF时时，则与致敏胶乳颗粒上的变性，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgGIgG发生反应，出现凝集现发生反应，出现凝集现象。象。第十三页，讲稿共二十三页哦（正向）间接凝集反应原理示意图（正向）间接凝集反应原理示意图 （变性（变性IgG）第十四页，讲稿共二十三页哦主要的试剂和器材主要的试剂和器材 类风湿胶乳诊断试剂类风湿胶乳诊断试剂 RFRF阴性对照阴性对照 RFRF阳性对照阳性对照 反应板反应板 搅拌棒搅拌棒第十五页，讲稿共二十三页哦操作步骤操作步骤（1）在）在3块载玻片上分别加一滴块载玻片上分别加一滴RF阳性血清阳性血清、RF阴性血清及待检血清。阴性

11、血清及待检血清。（2）加）加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品中致敏的胶乳于各血清样品中，轻微晃动载玻片混匀。，轻微晃动载玻片混匀。（3）1 min 后观察凝集反应发生情况后观察凝集反应发生情况第十六页，讲稿共二十三页哦结果观察和判断结果观察和判断 在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为出现，且液体澄清者为RFRF阳性。阳性。若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为稀释度为RFRF的效价（滴度）。的效价（滴度）。第十七页，讲稿

12、共二十三页哦 注意事项注意事项（1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果可靠可靠（2）注意阴性、阳性对照的设立）注意阴性、阳性对照的设立（3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例）注意血清及致敏胶乳加样量的比例第十八页，讲稿共二十三页哦直接凝集试验（玻片法）直接凝集试验（玻片法）-测测ABOABO血型血型第十九页，讲稿共二十三页哦原理原理 天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。凝集反应。玻片法属于玻片法属于定性定

13、性试验。试验。第二十页，讲稿共二十三页哦第二十一页，讲稿共二十三页哦主要的试剂和器材主要的试剂和器材 抗抗A A血型定型试剂血型定型试剂 抗抗B B血型定型试剂血型定型试剂 搅拌棒搅拌棒 玻片玻片第二十二页，讲稿共二十三页哦步骤步骤 取玻片取玻片1 1块，左上角和右上角分别标上块，左上角和右上角分别标上“A”A”和和“B”B”用采血针采指尖血（用采血针采指尖血（左手无名指尺侧左手无名指尺侧），将血滴在玻片的），将血滴在玻片的两端。两端。在两血滴上分别滴上抗在两血滴上分别滴上抗A A标准血清和抗标准血清和抗B B标准血清，用搅拌标准血清，用搅拌棒搅匀。棒搅匀。手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分混合，用手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分混合，用肉眼观察有无凝集。肉眼观察有无凝集。第二十三页，讲稿共二十三页哦