2022年Tris-HCl及其他几种缓冲液配方 .pdf

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1、Tris 是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？Tris：三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris 被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE 和 TBE 缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到 Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 Tris 为弱碱，在室温（25下，它的pKa 为 8.1；根据缓冲理论，Tris 缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0 到 9.2 之间。Tris

2、碱的水溶液pH 在 10.5 左右，一般加入盐酸以调节pH 值至所需值，即可获得该pH 值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris 的 pKa 的影响。由于 Tris 缓冲液为弱碱性溶液，DNA 在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris 盐酸缓冲液中加入EDTA 制成“TE 缓冲液”，TE 缓冲液被用于DNA 的稳 定 和 储 存。如 果 将 调 节pH值 的 酸 溶 液 换 成 乙 酸，则 获 得“TAE 缓 冲 液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE 缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。用途：

3、有机合成中间体。在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH 值。在凝胶中也起到稳定PH 的作用，只不过是Tris-HCl 缓冲体系。Tris 缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris 被用于不同pH 条件下的蛋白质晶体生长。Tris 缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C.elegans核纤层蛋白 lamin）的中间纤维的形成。Tris 也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris 也被用作滴定标准物。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 1 页，共 3 页 -1 M Tris-H

4、Cl(pH7.4，7.6，8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量1L 配制方法：1.称量 121.1 g Tris置于 l L 烧杯中。2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表加入浓HCl 量调节所需要的pH 值。pH 值浓 HCl 7.4 约 70 ml 7.6 约 60 ml 8.0 约 42ml 4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH 值大约降低0.03 个单位。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 2 页，

5、共 3 页 -1.5 M Tris-HCl(pH8.8)组份浓度 1.5 MTris-HCl 配制量1 L 配制方法1.称量 181.7 g Tris置于 1 L 烧杯中。2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓 HCl 调节 pH 值至 8.8。4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH 值大约降低0.03 个单位。TE 即 Tris-EDTA buffer（10mM Tris，1mM EDTA，pH7.4 pH7.6 pH8.0）。常用分子生物学试剂，用于DNA 的溶解等。配制 1 0 TE Buffer(pH7.4,7.6，8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：1.量取下列溶液，置于l L 烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)100 ml 500 mM EDTA(pH8.0)20 ml 2.向烧杯中加入约800 ml 的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1 L 后，高温高压灭菌。4.室温保存。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 3 页，共 3 页 -