cutoff值-参考区间(8页).doc

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1、-cutoff值-参考区间-第 8 页区别：参考区间和cutoff值cutoff即临界值，是判断检测结果的标准。检测标本吸光度（OD值）cutoff即判为阳性，cutoff判为阴性。现在一般用s/co，1为阳性，1为阴性。cutoff的设置因试剂厂家不同，方法不同而设置不同，试剂说明书都会有cutoff的设置。厂家cutoff的设置是经过检测大量的标本（包括正常人、病人），通过统计学分析来设置的。由于国产试剂的质量尚需提高，某些实验的阴性对照经常成为定值（因为阴性对照0.05按0.05计算，cutoff0.05某个常数或阴性对照某个常数，如HBsAg的cutoff2.10.05），造成cuto

2、ff亦为定值。参考区间： 解释检验结果是正常还是异常的依据区别血清和血浆血清，指血液凝固后，在血浆中除去分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的。其主要作用是提供基本、提供和各种生长、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用血清的主要成分：血清是由血浆去除蛋白原而形成的一种很复杂的，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的、条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、1、2、-球蛋白,甘油三

3、酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆、等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。主要是：第一:血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难；第二:血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制；第三:不能排除血清中含有易变物质，这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。主要作用提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物

4、质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已

5、经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等鉴别方法血清凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血

6、清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。血浆相当于结缔组织的细胞间质。是血液的重要组成分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）。血浆的化学成分中，水分占9092，溶质以血浆蛋白为主血浆是血液的液体成分，悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆，约占血液总体积的55%。血浆的绝大部分是水（体积的90%），其中溶解的物质主要是血浆蛋白，还包括葡萄糖、无机盐、激素以及二氧化碳。血浆的主要功能是运载血细胞，同时也是运输分泌产物的主要媒介。血液成分（加入抗凝剂）将新鲜血液离心，使血细胞沉

7、降，上层淡黄色清液即是血浆。血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。血浆是由抗凝的血液中分离出来的液体，其中含有纤维蛋白原，若向血浆中加入Ca2+ ，血浆会发生再凝固，因此血浆中不含游离的Ca2+。血清是由凝固的血中分离出来的液体，其中已无纤维蛋白原，但含有游离的 Ca2+，若向其中再加入 Ca2+，血清也不会再凝固。此外，血浆与血清的另一个区别是：血清中少了很多的凝血因子，以及多了很多的凝血产物。常见问题保存方法血清应保存在-5至-2。然而，若存放于4时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。如何解冻血清才不会使产品质量受损？将血清

8、从冷冻箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。避免产生沉淀物1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2至4至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20至37，实验显示非常容易产生沉淀物。2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生3、请勿将血清置于37太久。若在37放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。5、若必须做血清的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过

9、高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。何谓热灭活?一般是以56，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。有必要做热灭活吗?实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促

10、进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 小黑点，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37C环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。购买的时候注意询问厂家是否是已灭活血清。保存注意事项血清的保存应该注意以下几点：(1)需要长期保存的血清必须储存于-20 - 70 低温冰箱中.4冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.(2)热灭活是指

11、56, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20 至 -70 低温冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20进入37解冻

12、,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.(4)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.(5)血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下小黑点:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象小黑点,常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.(6)切勿将血清在37放置太久,否则血清会变得浑浊

13、,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量.血清 兽药血清主要成份：蒙古黄芪提取液、抗病毒药、ALR、混感血清。性状：本品为黄棕色澄明液体。功能：本品能诱导机体产生干扰素，调节机体免疫功能，促进抗体形成，刺激巨噬细胞吞噬作用，增强机体对病原微生物的吞噬作用，具有抗炎、抗病毒、抗毒素和提高机体免疫功能等作用。血栓与止血的检测主要用于血小板量与质异常、凝血障碍、血栓前状态和血栓性疾病的临床诊断、鉴别诊断、病情观察、疗效评价和预后判断，也用于抗栓治疗的监测。血栓与止血检查方法繁多，可先选择简单易行的筛选试验，再逐步做确诊试验使用全血和血浆检查，在采集标本时要加入抗凝剂，检查的项目不同，所加的抗凝剂也

14、不同，常用的抗凝剂有：1、草酸盐 常用的有草酸钾、草酸钠和草酸铵,它们溶解后解离的草酸根与标本中的钙离（Ca2+）形成不解离的草酸钙，失去Ca2+的凝血功能而起抗凝作用。常用于临床化学和血液学检查。高浓度钾离子（K+）或钠离子（Na+）易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则可使血细胞膨胀；故测定血细胞比容时用草酸铵和草酸钾或草酸钠两者混合的抗凝剂。若用草酸钾或草酸钠作抗凝剂，与肝素为抗凝剂测定的血细胞比容比较，可降低813，此时的血浆量也相应增加，用它测定血浆中化学成分，结果可低5左右。标本中加入高浓度的草酸盐抗凝剂，可发生溶血和改变血液pH，干扰测定血浆中的钾、钠和氯，还能抑制有些酶的活性。其优点是

15、溶解度好、价廉，2mg草酸盐能抗凝lml血液。2、肝素 是生理性抗凝剂，抗凝机制较为复杂，主要是抑制凝血酶原转变为凝血酶，抑制凝血酶对纤维蛋白原转变为纤维蛋白和稳定血小板的作用。所用制剂多为肝素的钠或钾盐，除有些因肝素能干扰的凝血机制检查项目外，绝大多数的检查都可用肝素作为抗凝剂。20U肝素可抗凝lml血液。3、乙二胺四乙酸(EDTA)盐 常用的是它的钠或钾盐，抗凝作用是与Ca2络合而使 Ca2失去凝血作用。适用范围与草酸盐基本相同。1-2mgEDTA盐可杭凝1ml血液。4、枸橼酸盐 主要为枸橼酸钠；抗凝机制与草酸盐相似。在血中的溶解度低，抗凝力不如前几种抗凝剂。多用于临床血液学检查。5mg枸

16、橼酸盐可抗凝1ml血液。5、氟化钠 与Ca2+结合而起抗凝作用，因其抑制细胞分解葡萄糖，故用于葡萄糖测定。抽血及抗凝原理1.快速血清管：橘红色头盖，采血管内有促凝剂，可激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变为不可溶的纤维蛋白多聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块。快速血清管可在5分钟之内使采集的血液凝固。适用于急诊血清生化试验。2.惰性分离胶促凝管：金黄头盖，采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶能够将血液中的液体成分（血清或者血浆）和固体成分彻底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本在48小时内保持稳定，促凝剂可快速激活凝血机制，加速凝血过程。适用于急诊血清生化试验。3.肝素抗凝

17、管 ：绿色头盖，内添加有肝素，肝素直接有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验，血气分析，红细胞压积试验，血沉及普通生化试验，不适于血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集，不能用于白细胞计数，因其可使血片染色后背景呈淡蓝色，故也不适于白细胞分类。4.血浆分离管:浅绿色头盖，在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂，可达到快速分离血浆的目的，是电解质检测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和ICU等急诊，血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在冷藏状态下保持48小时稳定。5.EDTA抗凝管：紫色头盖，乙二胺四乙酸及其盐是一种氨基多羟基酸，可以有效地螯合血液标本中的钙离子，螯合钙或将钙从反应

18、位点移去将阻滞和中止内源性或者外源性凝血过程，从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验，不适用于凝血试验及血小板功能检查，也不是用于钙离子，钾离子，钠离子，铁离子，碱性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR测定。6.枸橼酸钠凝血试验管：浅蓝头盖，枸橼酸钠主要通过与血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血试验。国家临床试验室标准化委员会推荐的抗凝剂浓度是3.2或3.8（相当于0.109或0.129mol/l）.抗凝剂与血液的比例是1：97.枸橼酸钠血沉试验管：黑色头盖，血沉试验要求的枸橼酸钠浓度是3.2（相当于0.109mol/）抗凝剂与血液的比例是1：48.草酸钾 /氟化钠：灰色头盖

19、，氟化钠是一种弱效抗凝剂。一般常同草酸钙或碘酸钠合并使用，其比例为氟化钠一份，草酸钠3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天内不凝固和抑制糖分解，它是血糖测定的优良保存剂。组织因子是一个由263 个氨基酸残基组成的跨膜单链糖蛋白,分子量约为47 kDa。组织因子是一种脂蛋白复合物，含有大量磷脂。当它进入血浆后。血浆中的钙离子将因子连接于组织因子的磷脂上，形成复合物，后者可使凝血因子X活化为Xa，并与Ca2+、因子V和血小板磷脂相互作用而形成凝血酶原激活物，然后通过与内源性凝血系统后阶段相同的途径，完成凝血的化学反应。正常情况下,组织因子位于血管壁外膜细胞,包绕血管的成纤维细胞, 因此在正常情况下组织因子不存在于循环中或不与循环血液接触,只有当血管壁的完整性遭到破坏时TF 才暴露于循环血液,通过激活凝固级联反应发挥止血作用。