单克隆抗体课件.ppt

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1、关于单克隆抗体现在学习的是第1页，共27页发明单克隆抗体技术发明单克隆抗体技术Nobel Prize in 1984Nobel Prize in 1984现在学习的是第2页，共27页抗体发展的三个阶段抗体发展的三个阶段单克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体基因工程抗体多克隆抗血清多克隆抗血清现在学习的是第3页，共27页传统传统抗血清抗血清抗抗 原原免免 疫疫所有抗所有抗体体混合混合1 23412341 234现在学习的是第4页，共27页细胞工程杂交瘤技术鼠单抗鼠单抗人单抗人单抗大鼠大鼠小鼠小鼠产量高、操作比小产量高、操作比小鼠麻烦鼠麻烦 少用少用易操作、多用易操作、多用HAMAHAMA反应反应人人杂

2、交瘤人人杂交瘤人人B B细胞、骨髓瘤细细胞、骨髓瘤细胞融合胞融合人鼠杂交瘤人鼠杂交瘤人人B B细胞、鼠骨髓细胞、鼠骨髓瘤细胞融合瘤细胞融合杂交瘤制备人单抗的问题：染色体易丢失、抗体分泌不稳定杂交瘤制备人单抗的问题：染色体易丢失、抗体分泌不稳定现在学习的是第5页，共27页 美国已上市美国已上市16种单克隆抗体药物种单克隆抗体药物 2002年销售额年销售额 29亿美元亿美元 2005年年 90亿美元亿美元 我国的单克隆抗体药物市场还处于起步阶我国的单克隆抗体药物市场还处于起步阶段。段。现在学习的是第6页，共27页现在学习的是第7页，共27页现在学习的是第8页，共27页SDA批准进入临床的治疗用单抗

3、批准进入临床的治疗用单抗抗抗T细胞免疫毒素细胞免疫毒素抗抗C-ALL免疫毒素免疫毒素131I-抗肝癌单克隆抗体抗肝癌单克隆抗体抗人抗人CD25单克隆抗体单克隆抗体抗乙脑单克隆抗体抗乙脑单克隆抗体抗流行性出血热抗体抗流行性出血热抗体抗人抗人CD3单克隆抗体单克隆抗体抗人抗人IL-8单克隆抗体单克隆抗体现在学习的是第9页，共27页抗体治疗疾病的机制抗体治疗疾病的机制 抗原失活 免疫效应细胞吞噬 抗原表面弱化易受补体破坏现在学习的是第10页，共27页单抗研发的演变历程单抗研发的演变历程鼠单抗鼠单抗100%鼠源鼠源OKT-3PanorexZevalin鼠鼠/人嵌合单抗人嵌合单抗(66-75%人源人源)

4、ReoPro,RituxanRemicadeSimulect人源化单抗人源化单抗(90-95%人源人源)Zenapax,Mylotarg,Herceptin,CampathSynagis100%人源人源 现在学习的是第11页，共27页现在学习的是第12页，共27页现在学习的是第13页，共27页现在学习的是第14页，共27页现在学习的是第15页，共27页每個每個 抗原決定基抗原決定基 至少誘生一種至少誘生一種專一性抗体專一性抗体现在学习的是第16页，共27页1 多克隆抗血清多克隆抗血清对健康人用疫苗进行主动对健康人用疫苗进行主动免疫，免疫前（免疫，免疫前（a a）和免疫后）和免疫后1010天天

5、（b b）分别采血并对血清）分别采血并对血清蛋白进行凝胶电泳分析。免疫前蛋白进行凝胶电泳分析。免疫前血清中的血清中的g g 球蛋白条带较宽，免球蛋白条带较宽，免疫之后则相对集中。疫之后则相对集中。Bruton Bruton 氏氏病患者血清蛋白中的病患者血清蛋白中的 球蛋球蛋白条带缺失（白条带缺失（c c）。）。a a1 a a2b b 白蛋白白蛋白球蛋白球蛋白（c）（a）（b）现在学习的是第17页，共27页 绵羊红细胞的制备流程图绵羊红细胞的制备流程图 摇动摇动15-20min15-20min 44可保存可保存3 3周周 取适量取适量 NSNS洗涤洗涤3 3次次2000r/min2000r/m

6、in 10min 10minNSNS稀释至稀释至 2 25%5%现在学习的是第18页，共27页 细菌细胞抗原的制备流程图细菌细胞抗原的制备流程图液体培养或液体培养或 斜面培养斜面培养 3724h3724h100100水浴水浴 2 22.5h2.5h 杀菌杀菌无菌试验无菌试验NSNS稀释成稀释成8 81010亿亿/ml/mlO O菌体抗原菌体抗原现在学习的是第19页，共27页杂交瘤技术过程杂交瘤技术过程现在学习的是第20页，共27页现在学习的是第21页，共27页癌细胞可培养生长浆细胞B cell可分泌抗体融合瘤HybridomaYYYYYYYYYYYYYYYYYY细胞融合两组两组染色体混在一起染

7、色体混在一起也可以培也可以培养养生長生長产产生生专专一性抗一性抗体体一個個 B cell 只只产产生一生一种种抗抗体体现在学习的是第22页，共27页1234mmmm12341234单单抗抗细细胞融合胞融合取出脾細胞取出脾細胞+癌細胞癌細胞各抗各抗体体分分开开现在学习的是第23页，共27页将小鼠将小鼠IgIg基因敲除，转染人基因敲除，转染人IgIg基因，在小基因，在小鼠体内产生人鼠体内产生人AbAb，再经杂交瘤技术，产生，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体大量完全人源化抗体现在学习的是第24页，共27页鼠单抗人源化鼠单抗人源化现在学习的是第25页，共27页Pr 鼠鼠VH 人人 CH Pr 鼠

8、鼠VL 人人 CL免疫球蛋白免疫球蛋白基因载体的构建基因载体的构建H链嵌合载体链嵌合载体L 链嵌合载体链嵌合载体共转染细胞共转染细胞启动子启动子人人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略鼠嵌合抗体基因工程改造策略 现在学习的是第26页，共27页定义：定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V V）中互）中互补决定簇（补决定簇（CDRCDR）序列改换成鼠源单抗）序列改换成鼠源单抗CDRCDR序列。重构成既序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAbRAb亦叫亦叫“重构型抗体重构型抗体”，因其主要涉及，因其主要涉及CDRCDR的的“移植移植”，又可称为，又可称为“CDRCDR移植抗体移植抗体意义：意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗 人源化抗体又称人源化抗体又称CDRCDR移植抗体移植抗体现在学习的是第27页，共27页