人类辅助生殖技术与人类精子库.ppt

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1、背背 景景: 不孕不育：不孕不育：影响男女双方身心健康、家庭和睦的世界性问题。影响男女双方身心健康、家庭和睦的世界性问题。在育龄期夫妇中约有在育龄期夫妇中约有10-15%10-15%对夫妇存在不育，以此推算，对夫妇存在不育，以此推算，全世界约有全世界约有1000010000万人不能正常生育。万人不能正常生育。每一对健康的育龄夫妇的生育权利和得到健康孩子的要求。每一对健康的育龄夫妇的生育权利和得到健康孩子的要求。 精子银行：取己之长，造福他人！取己之长，造福他人！留得青山在留得青山在，不怕没柴烧！不怕没柴烧！现在学习的是第1页，共78页l第一篇第一篇 人类辅助生殖技术人类辅助生殖技术l第二篇第二

2、篇 人类精子库人类精子库l第三篇第三篇 人类辅助生殖技术和人类辅助生殖技术和人类精子库伦理原则人类精子库伦理原则 现在学习的是第2页，共78页第一篇第一篇 人类辅助生殖技术人类辅助生殖技术现在学习的是第3页，共78页人工辅助生殖的里程碑：人工辅助生殖的里程碑：世界上首例“试管婴儿”1978年诞生于英国。我国首例“试管婴儿”于1988年在北京诞生。世界首例第二代“试管婴儿” 于1992年诞生（ICSI）。我国首例第二代“试管婴儿” 于1996年在北京诞生（ICSI）。目前我国已将种植前基因诊断（PGD）应用于临床，而该技术世界上也是近34年才逐步发展起来的。我们与世界先进水平的差距正在缩小。目前

3、我国开展人工辅助生殖项目的医院及妇科中心有80多家，已诞生了3000多例“试管婴儿”，全世界现已有30多万名“试管婴儿”出生。现在学习的是第4页，共78页世界上首例世界上首例“试管婴儿试管婴儿”现在学习的是第5页，共78页我国首例试管婴儿现在学习的是第6页，共78页人类辅助生殖技术人类辅助生殖技术（Assisted Reproductive Technology, ART） 人工授精人工授精（Artificial Insemination, AI）体外受精体外受精-胚胎移植及其衍生技术胚胎移植及其衍生技术(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer,

4、IVF-ET)现在学习的是第7页，共78页一、人工授精技术一、人工授精技术现在学习的是第8页，共78页分分 类：类： 人工授精根据精子来源分为人工授精根据精子来源分为 根据授精部位分为：根据授精部位分为：现在学习的是第9页，共78页丈夫精液丈夫精液人工授精人工授精供精人工供精人工授精授精人工授精现在学习的是第10页，共78页人工授精适应症人工授精适应症 丈夫精液人工授精丈夫精液人工授精：男性因少精、弱精、液化异常、性功能障碍、生殖器畸形等不育。男性因少精、弱精、液化异常、性功能障碍、生殖器畸形等不育。女性因宫颈粘液分泌异常、生殖道畸形及心理因素导致性交不能等不育。女性因宫颈粘液分泌异常、生殖道

5、畸形及心理因素导致性交不能等不育。 免疫性不育。免疫性不育。原因不明的不育。原因不明的不育。 供精人工授精供精人工授精 无精子症、严重的少精症、弱精症和畸精症。无精子症、严重的少精症、弱精症和畸精症。 输精管绝育术后期望生育而复通术失败者及射精障碍等。输精管绝育术后期望生育而复通术失败者及射精障碍等。男方和男方和/或家族有不宜生育的严重遗传性疾病。或家族有不宜生育的严重遗传性疾病。母儿血型不合不能得到存活新生儿。母儿血型不合不能得到存活新生儿。 原因不明的不育。原因不明的不育。现在学习的是第11页，共78页人工授精禁忌症人工授精禁忌症 女方因输卵管因素造成的精子和卵子结合障碍。女方因输卵管因素

6、造成的精子和卵子结合障碍。 女方患有生殖泌尿系统急性感染或性传播疾病。女方患有生殖泌尿系统急性感染或性传播疾病。 女方患有遗传病、严重躯体疾病、精神心理障碍。女方患有遗传病、严重躯体疾病、精神心理障碍。 有先天缺陷婴儿出生史并证实为女方因素所致。有先天缺陷婴儿出生史并证实为女方因素所致。 女方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期。女方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期。 女方具有酗酒、吸毒等不良嗜好。女方具有酗酒、吸毒等不良嗜好。 现在学习的是第12页，共78页现在学习的是第13页，共78页l女方女方（4）测量基础体温：是测定有无排卵以及预测排卵时间的最简便、最经济实用的方）测量基础

7、体温：是测定有无排卵以及预测排卵时间的最简便、最经济实用的方法。测量基础体温应该从月经第一天开始，每天早晨醒后，在未进行任何活动前法。测量基础体温应该从月经第一天开始，每天早晨醒后，在未进行任何活动前测定体温。然后将测得的体温数据记录下来，描在特制的基础体温表上，并绘成测定体温。然后将测得的体温数据记录下来，描在特制的基础体温表上，并绘成曲线。连续观察曲线。连续观察3个月，了解月经的规律及排卵情况。个月，了解月经的规律及排卵情况。（5）超声波检查：通过）超声波检查：通过B超观察，了解子宫、卵巢的大小、形态位置、有无畸形，并且可超观察，了解子宫、卵巢的大小、形态位置、有无畸形，并且可以动态观察卵

8、泡的发育情况及数量，子宫内膜的增长程度，与卵泡发育的同步性等。以动态观察卵泡的发育情况及数量，子宫内膜的增长程度，与卵泡发育的同步性等。（6）输卵管检查：包括有输卵管通液通气术、子宫）输卵管检查：包括有输卵管通液通气术、子宫-输卵管输卵管X光碘油造影术，碘油过敏光碘油造影术，碘油过敏者可选择者可选择B超下输卵管通液术或宫腔镜下输卵管插管通液术。根据需要选择其中之一，以便超下输卵管通液术或宫腔镜下输卵管插管通液术。根据需要选择其中之一，以便了解输卵管的通畅程度。做了解输卵管的通畅程度。做IUI病人必须常规进行输卵管通畅试验。病人必须常规进行输卵管通畅试验。（7）染色体检查：对于有遗传风险的妇女，

9、或者高龄妇女可以选择性进行外周血染色体检查。）染色体检查：对于有遗传风险的妇女，或者高龄妇女可以选择性进行外周血染色体检查。现在学习的是第14页，共78页l男方男方（1）病史询问）病史询问 询问病人有无婚育史、感染性及性传播性疾病史，有无高温、化学询问病人有无婚育史、感染性及性传播性疾病史，有无高温、化学品、辐射接触史，近期有无醺酒等行为，父母是否属近亲婚配。品、辐射接触史，近期有无醺酒等行为，父母是否属近亲婚配。（2）精液常规检查）精液常规检查 在做在做IUI前必须进行至少二次以上的精液常规检查，另外在决前必须进行至少二次以上的精液常规检查，另外在决定实施定实施IUI前应当禁欲前应当禁欲56

10、天，以保持具有足够的精液量和精子数天，以保持具有足够的精液量和精子数以及精子的新鲜度。以及精子的新鲜度。（3）内分泌激素检查）内分泌激素检查 测全套生殖激素，了解睾丸的生精功能状态测全套生殖激素，了解睾丸的生精功能状态 现在学习的是第15页，共78页（二）人工促排卵和卵泡监测（二）人工促排卵和卵泡监测l大多数助孕中心在实施人工授精前均采用大多数助孕中心在实施人工授精前均采用人工促排卵技术，以便能更好的促使卵泡人工促排卵技术，以便能更好的促使卵泡的发育与成熟，保证子宫内膜与成熟卵泡的发育与成熟，保证子宫内膜与成熟卵泡发育的同步性，改善黄体功能，克服排卵发育的同步性，改善黄体功能，克服排卵障碍，人

11、为控制排卵时间，从而达到提高障碍，人为控制排卵时间，从而达到提高受精的成功率。受精的成功率。现在学习的是第16页，共78页（三）（三） 常用的促排卵方案常用的促排卵方案现在学习的是第17页，共78页（三）（三） 常用的促排卵方案常用的促排卵方案3、FSH+HCG 于月经周期第于月经周期第5天开始用药，起始剂量一般天开始用药，起始剂量一般150300IU/日，月经第日，月经第10天阴超观察卵泡发天阴超观察卵泡发育和子宫内膜增长情况。根据卵泡和子宫内膜生长程度及血育和子宫内膜增长情况。根据卵泡和子宫内膜生长程度及血E2浓度调整用药剂量，浓度调整用药剂量，隔天做隔天做B超监测卵泡和子宫内膜的发育，测

12、血超监测卵泡和子宫内膜的发育，测血E2浓度，直至主卵泡直径达到浓度，直至主卵泡直径达到18mm以上，内膜厚度达到以上，内膜厚度达到10mm，血，血E2浓度达到浓度达到15002500IU/L，一次肌肉注射，一次肌肉注射500010000IU的的HCG。这种用法主要是针对卵巢功能较差者，如：多囊卵巢。这种用法主要是针对卵巢功能较差者，如：多囊卵巢综合征（综合征（PCOS）患者，这些病人血）患者，这些病人血LH水平较高，应用水平较高，应用HMG促排卵容易引起刺激促排卵容易引起刺激过度（因为过度（因为HMG中含有中含有75IU的的FSH和和75 IU的的LH），因此单独应用），因此单独应用FSH效果

13、更好效果更好些。些。 对于做对于做IUI来讲，启动促排卵最好于月经周期第来讲，启动促排卵最好于月经周期第5天以后进行，这样可以避免过多的卵泡天以后进行，这样可以避免过多的卵泡发育，造成多胎妊娠。因为药物促排卵时间越早，生长卵泡形成的数量就越多，多胎的发育，造成多胎妊娠。因为药物促排卵时间越早，生长卵泡形成的数量就越多，多胎的可能性就越大，这样的临床教训很多。可能性就越大，这样的临床教训很多。现在学习的是第18页，共78页（四）精液处理（四）精液处理1）上游法）上游法原理：利用活动精子的自主泳动能力，会从试管底部向上游动，接近培养液的液面层。而活动力差的精子、死精子、凝集的精子以及其它细胞成份则

14、留在试管底部。通过吸取试管液面层的培养液，就可收集到活力较好的精子，达到优选精子的目的。上游法可以收集到更多的活力较好的、形态正常的精子，对于少、弱精症效果较差。2）下游法下游法原理：利用精子自身的重力作用，活力较差的精子会运动到试管底部含有营养成份高的液层中。下游法可以提高精子的回收率和精子活动率，因此适用少弱精症病人及冷冻精液的处理。现在学习的是第19页，共78页（四）精液处理（四）精液处理3）密度梯度离心法密度梯度离心法Pecoll（聚乙烯吡咯烷酮包被硅胶液）梯度离（聚乙烯吡咯烷酮包被硅胶液）梯度离心法心法原理原理：将将percoll液配成由低到高的不同浓度的液配成由低到高的不同浓度的梯

15、度层，把液化的精液置于最上层。离心后，梯度层，把液化的精液置于最上层。离心后，根据精子质量不同以及其它成份比重的不同，根据精子质量不同以及其它成份比重的不同，进入到不同的浓度层。大多数活力好、形态正进入到不同的浓度层。大多数活力好、形态正常的精子进入到高密度的常的精子进入到高密度的percoll层，活力差的层，活力差的精子进入到低密度精子进入到低密度percoll层，而白细胞及其它层，而白细胞及其它一些细胞进入到与精液相交界的一些细胞进入到与精液相交界的percoll层内。层内。用这种方法可将质量好的精子分离出来。用这种方法可将质量好的精子分离出来。现在学习的是第20页，共78页（五）授精时间

16、（五）授精时间l一般于肌肉注射一般于肌肉注射10000IUHCG后后3648小时内进小时内进行人工授精，因为卵子排放大约在行人工授精，因为卵子排放大约在HCG注射后注射后3640小时。有的单位采用二次授精法，即小时。有的单位采用二次授精法，即24小时和小时和40小时各授精一次，以提高授精率；也小时各授精一次，以提高授精率；也有的单位在超声波证实排卵后进行授精，当然有的单位在超声波证实排卵后进行授精，当然也有测血中也有测血中LH峰值出现后峰值出现后24小时授精的，然而小时授精的，然而各种方法最后的授精率都没有显著差别，各种方法最后的授精率都没有显著差别，现在学习的是第21页，共78页人工授精后的

17、第人工授精后的第2天开始，常规进行黄体支持。临床上有两天开始，常规进行黄体支持。临床上有两种方法：种方法：（1）黄体酮支持）黄体酮支持 于授精后第二天开始，每天肌肉注射于授精后第二天开始，每天肌肉注射2040mg的黄体酮或采的黄体酮或采用阴道栓剂黄体酮支持。用阴道栓剂黄体酮支持。（2）HCG支持支持 于授精后第于授精后第2天肌肉注射天肌肉注射15002000IUHCG，然后，每隔，然后，每隔34天注射天注射一次同样剂量的一次同样剂量的HCG，共，共45次。值得一提的是，有卵巢刺激过度次。值得一提的是，有卵巢刺激过度综合征（综合征（HOSS）迹象或者出现卵巢过度刺激症状的患者，禁用或）迹象或者出

18、现卵巢过度刺激症状的患者，禁用或停用停用HCG，以免引起或加重，以免引起或加重HOSS。授精后第授精后第16天，若月经不来，可以测定血天，若月经不来，可以测定血HCG。如果阳性，说明。如果阳性，说明妊娠；也可以测定尿中妊娠；也可以测定尿中hCG的浓度。的浓度。现在学习的是第22页，共78页 二、体外受精二、体外受精-胚胎移植及其衍生胚胎移植及其衍生技术技术 胚胎移植时间的改进：胚胎移植应在受精后第胚胎移植时间的改进：胚胎移植应在受精后第35天进天进行，第五天移植胚胎可通过胚胎的自筛选帮助我们从行，第五天移植胚胎可通过胚胎的自筛选帮助我们从中选择出最好的胚胎，从而通过减少需要移植的胚胎中选择出最

19、好的胚胎，从而通过减少需要移植的胚胎的数量降低多胎率。的数量降低多胎率。辅助孵化的应用：可提高辅助孵化的应用：可提高“试管婴儿试管婴儿”成功率，尤其对年成功率，尤其对年龄较大的妇女及前一次龄较大的妇女及前一次“试管婴儿试管婴儿”助孕失败者。助孕失败者。单精子卵母细胞浆内显微注射授精（单精子卵母细胞浆内显微注射授精（ICSI，Intracyto- plasmic Sperm Injection）是将单个精子直接注射到卵细）是将单个精子直接注射到卵细胞浆内，又称第二代胞浆内，又称第二代“试管婴儿试管婴儿”技术。技术。现在学习的是第23页，共78页体外受精体外受精-胚胎移植的治疗步骤胚胎移植的治疗步

20、骤 现在学习的是第24页，共78页体外受精体外受精/胚胎移植胚胎移植适应症适应症 女方因输卵管因素造成精子与卵子遇合困女方因输卵管因素造成精子与卵子遇合困难。难。 排卵障碍。排卵障碍。 子宫内膜异位症。子宫内膜异位症。 男方少、弱精子症。男方少、弱精子症。 不明原因不育。不明原因不育。 女性免疫性不孕。女性免疫性不孕。 现在学习的是第25页，共78页 卵胞浆内单精子注射（卵胞浆内单精子注射（ICSI）适应症）适应症 严重的少、弱、畸精子症。严重的少、弱、畸精子症。 梗阻性无精子症。梗阻性无精子症。 生精功能障碍。生精功能障碍。 男性免疫性不育。男性免疫性不育。 体外受精体外受精-胚胎移植（胚胎

21、移植（IVF-ET）受精失败。）受精失败。 精子无顶体或顶体功能异常。精子无顶体或顶体功能异常。现在学习的是第26页，共78页 植入前胚胎遗传学诊断（植入前胚胎遗传学诊断（PGD）种植前基因诊断又称为第三代种植前基因诊断又称为第三代“试管婴儿试管婴儿”，它是指从体外受精的胚胎中取，它是指从体外受精的胚胎中取12个细个细胞或者取卵细胞的第一极体在种植前进行基因分析，可用以鉴定胚胎性别，分析胚胞或者取卵细胞的第一极体在种植前进行基因分析，可用以鉴定胚胎性别，分析胚胎染色体，然后移植基因正常的胚胎，从而达到优生优育的目的。胎染色体，然后移植基因正常的胚胎，从而达到优生优育的目的。1990年首例应用种

22、植前基因诊断鉴定性别后，选择女性胚胎移植得以妊娠。年首例应用种植前基因诊断鉴定性别后，选择女性胚胎移植得以妊娠。目前全世界已进行了大约目前全世界已进行了大约1200个个PGD周期，周期，300多例临床妊娠。多例临床妊娠。种植前基因诊断还适用于年龄超过种植前基因诊断还适用于年龄超过35岁的妇女筛选非整倍体，解决年长妇女因胚胎岁的妇女筛选非整倍体，解决年长妇女因胚胎基因异常引起的不孕或流产；对平衡易位的夫妇选择基因平衡的胚胎进行移植。从根本基因异常引起的不孕或流产；对平衡易位的夫妇选择基因平衡的胚胎进行移植。从根本上提高第一、二代上提高第一、二代“试管婴儿试管婴儿”的妊娠成功率，降低自然流产率，提

23、高妊娠质的妊娠成功率，降低自然流产率，提高妊娠质量，可有效地避免因盲目地移植了携带异常基因的胚胎而不得不在孕期终量，可有效地避免因盲目地移植了携带异常基因的胚胎而不得不在孕期终止妊娠。止妊娠。现在学习的是第27页，共78页PGD诊断技术诊断技术 1、分子细胞遗传学诊断、分子细胞遗传学诊断 是应用荧光原是应用荧光原位杂交（位杂交（fluorescence in situ hybridization ，FISH）技术对受精卵中的）技术对受精卵中的极体或卵裂球进行分析，可以对染色体数极体或卵裂球进行分析，可以对染色体数目异常、结构异常进行检测，也可以进行目异常、结构异常进行检测，也可以进行性别诊断，

24、从而避免非整倍体胚胎和结构性别诊断，从而避免非整倍体胚胎和结构异常染色体胚胎的植入。同时，由于可以异常染色体胚胎的植入。同时，由于可以对对X-连锁隐性遗传疾病的性别诊断，避免连锁隐性遗传疾病的性别诊断，避免了伴性遗传性疾病胎儿的出生。了伴性遗传性疾病胎儿的出生。现在学习的是第28页，共78页PGD诊断技术诊断技术2、基因诊断、基因诊断 是应用聚合酶链反应（是应用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction PCR）技术进）技术进行单基因疾病（如：地中海贫血、镰刀样细胞贫血、纤维囊性变等）行单基因疾病（如：地中海贫血、镰刀样细胞贫血、纤维囊性变等）的诊断。近几年分子生物学技术

25、的发展证实：一部分非梗阻性无精的诊断。近几年分子生物学技术的发展证实：一部分非梗阻性无精子症及部分严重少精子症患者的发生原因是由于他们的子症及部分严重少精子症患者的发生原因是由于他们的Y染色体长臂染色体长臂远侧端与精子发生相关基因发生了缺失或突变，从而引起精子发生的异远侧端与精子发生相关基因发生了缺失或突变，从而引起精子发生的异常，这些基因被称之为无精子因子（常，这些基因被称之为无精子因子（Azoospermia factor,AZF）。）。过去这些都是过去这些都是“绝对绝对”不育的患者，然而由于卵胞浆内单精子不育的患者，然而由于卵胞浆内单精子注射授精（注射授精（ICSI）技术的开展，使得那些

26、）技术的开展，使得那些AZF因子缺失的精子受因子缺失的精子受精成为可能。其最终结果是：出生的男性后代也可能是精成为可能。其最终结果是：出生的男性后代也可能是AZF因子因子缺失者，将来也存在不育的可能。而通过事先的缺失者，将来也存在不育的可能。而通过事先的PGD基因检测基因检测可以避免这一后果的发生。可以避免这一后果的发生。现在学习的是第29页，共78页植入前胚胎遗传学诊断（植入前胚胎遗传学诊断（PGD）适应症）适应症 凡是能够被诊断的都可以适用于植入前胚胎遗传学诊断（PGD）。主要用于连锁遗传病、单基因相关遗传病、染色体病及可能生育以上患儿的等。现在学习的是第30页，共78页其他技术适应症其他

27、技术适应症 接受卵子赠送接受卵子赠送产生卵子的能力。产生卵子的能力。 女方是严重的女方是严重的携带者或患者。携带者或患者。 具有明显的具有明显的数量和质量的数量和质量的。 接受胚胎赠送接受胚胎赠送产生配子的能力。产生配子的能力。有严重的遗传性疾病或携带导致遗传性疾病的基因，有严重的遗传性疾病或携带导致遗传性疾病的基因，。发育潜能正常的胚胎。发育潜能正常的胚胎。现在学习的是第31页，共78页 体外受精体外受精/胚胎移植及其衍生技术胚胎移植及其衍生技术现在学习的是第32页，共78页第一代试管婴儿第一代试管婴儿,是指让精子和卵子自己在试管中完成受精是指让精子和卵子自己在试管中完成受精过程的技术过程的

28、技术. 第二代试管婴儿第二代试管婴儿,是指人工帮助精子进入卵细胞的技术是指人工帮助精子进入卵细胞的技术.第三代试管婴儿第三代试管婴儿,是在细胞移植前是在细胞移植前,进行遗传学诊断进行遗传学诊断,剔除可能剔除可能带有遗传性疾病的卵子带有遗传性疾病的卵子. 第四代试管婴儿第四代试管婴儿,是把他人健康的卵浆注入质量不高的是把他人健康的卵浆注入质量不高的卵子中卵子中,或者把即将受精的卵细胞核植入健康的卵细胞或者把即将受精的卵细胞核植入健康的卵细胞中中.专题：“试管婴儿”现在学习的是第33页，共78页“试管婴儿试管婴儿”现在学习的是第34页，共78页“试管婴儿试管婴儿” 男女双方必须身心健康，无遗传性疾

29、病，男女双方必须身心健康，无遗传性疾病，女方年龄一般不超过女方年龄一般不超过40岁，男方不超过岁，男方不超过55岁。岁。 因为女方年龄过大，自然受孕后怀孕后流产率因为女方年龄过大，自然受孕后怀孕后流产率高，胎儿畸形发生可能性也比年轻者大，妊娠高，胎儿畸形发生可能性也比年轻者大，妊娠期合并症增加，作试管婴儿的大龄不孕妇女除期合并症增加，作试管婴儿的大龄不孕妇女除了同样存在以上的问题外，在促排卵时常常反了同样存在以上的问题外，在促排卵时常常反应不好，在第一阶段被迫放弃应不好，在第一阶段被迫放弃 试管婴儿治疗，试管婴儿治疗，卵子的质量相对差，妊娠率低，不容易成功。卵子的质量相对差，妊娠率低，不容易成

30、功。现在学习的是第35页，共78页 试管婴儿的适应症包括试管婴儿的适应症包括 ：双侧输卵管不通：无论是炎症、结核或子宫内膜异位症导致的卵双侧输卵管不通：无论是炎症、结核或子宫内膜异位症导致的卵管梗阻或蠕动能力差、先天性的输卵管缺如还是宫外孕等原因导管梗阻或蠕动能力差、先天性的输卵管缺如还是宫外孕等原因导致卵管切除均使精卵无法相遇，试管婴儿技术为这些患者架起了致卵管切除均使精卵无法相遇，试管婴儿技术为这些患者架起了一座桥梁。可以说双侧输卵管不通是一座桥梁。可以说双侧输卵管不通是“试管婴儿试管婴儿”的绝对适应症。的绝对适应症。 免疫性不孕：精液经过洗涤，在体外授精，避免免疫因素干扰。免疫性不孕：精

31、液经过洗涤，在体外授精，避免免疫因素干扰。 男性因素：精液经洗涤浓缩后，在体外培养下可以明确是否有授男性因素：精液经洗涤浓缩后，在体外培养下可以明确是否有授精能力。精能力。 不明原因性不孕：在目前的检查条件下未找到明显的病因，经不明原因性不孕：在目前的检查条件下未找到明显的病因，经其它治疗没有成功的患者，可以应用体外授精胚胎移植技术获其它治疗没有成功的患者，可以应用体外授精胚胎移植技术获得约得约25%25%的妊娠率。的妊娠率。 现在学习的是第36页，共78页卵胞浆内单精子注射授精卵胞浆内单精子注射授精（Intracytoplasmic sperme injection，ICSI）（一）适应症（

32、一）适应症1）严重的少、弱精子症。）严重的少、弱精子症。精子密度精子密度5x106/ml、精子活率、精子活率90%，且无遗传原因者，且无遗传原因者)；7）严重逆行性射精者）严重逆行性射精者8）体外授精）体外授精-胚胎移植（胚胎移植（IVF-ET）失败多次。）失败多次。现在学习的是第37页，共78页I C S I（二）取精方式（二）取精方式 1、手淫法取精手淫法取精2、附睾抽吸法附睾抽吸法 (micro epididymal spermaspiration ，MESA)取精，用于梗阻性无精子症患者。取精，用于梗阻性无精子症患者。3、 睾丸穿刺抽吸法睾丸穿刺抽吸法(Testicular sperm

33、aspiration ,TESA)取精，可以用于梗阻性无精子症患者或精子发生障碍者。取精，可以用于梗阻性无精子症患者或精子发生障碍者。4、睾丸活检法（睾丸活检法（Testicular biopsy），用于非梗阻性无），用于非梗阻性无精子症取精。精子症取精。现在学习的是第38页，共78页I C S I（三）授精方法（三）授精方法1、注射前准备注射前准备 在每次实施单精子卵胞浆内显微授精（ICSI）前，必须对显微注射系统进行检查和准备，这些包括对Holding针和injectiong pipette针的调节、赶去注射器胶管内的气泡等。2、精子制动精子制动在将精子吸入injectiong pipet

34、te前必须前制动精子，也就是使活动精子失去活动能力。具体方法为：在选中一活动精子后，马上把注射针（injectiong pipette）移至该精子的尾部上方，轻轻的压住精子 ，然后迅即划过精子尾部。此时，该精子因尾部受损，立刻失去活动能力。现在学习的是第39页，共78页I C S I3、卵浆内单精子注射、卵浆内单精子注射将上述培养皿置于单精子注射系统的操作平台上，用将上述培养皿置于单精子注射系统的操作平台上，用Holding针固定住卵子，保持极体在针固定住卵子，保持极体在6点或点或12点钟的位置，而固定针在点钟的位置，而固定针在9点钟的位置。把已制动的精子吸入到点钟的位置。把已制动的精子吸入到

35、injectiong pipette内，将内，将精子慢慢的推到注射针的尖端，然后在精子慢慢的推到注射针的尖端，然后在3点钟的位置（与固定针基点钟的位置（与固定针基本同一水平）将注射针注入卵子内，先轻轻的吸出少许卵浆，以本同一水平）将注射针注入卵子内，先轻轻的吸出少许卵浆，以证实确实在卵浆内，再缓缓的将精子注入到卵浆内，退出注射针，证实确实在卵浆内，再缓缓的将精子注入到卵浆内，退出注射针，随即洗去随即洗去“受精卵受精卵”外面的油迹，将其移入另一含培养液的培养外面的油迹，将其移入另一含培养液的培养皿中，放置皿中，放置CO2或三气培养箱内，待第二天观察是否受精或三气培养箱内，待第二天观察是否受精。现

36、在学习的是第40页，共78页I C S I（四）胚胎培养和质量评判（四）胚胎培养和质量评判l无论是IVF-ET还是ICSI，一般在授精后培养至： 1920小时后，可以看到二个细胞前核（雌、雄原核），即2PN。 24小时后2 个细胞 35小时后4 个细胞 48小时后810 个细胞 72小时后3234 个细胞 96小时后桑椹胚 100小时后出现囊胚腔 115小时后出现内细胞团体积大小适中；卵裂球大小匀称一致，多成偶数；第一极体无分裂现象；受精卵表面皮质颗粒大小均匀，覆盖住表面，而非核性碎片10。现在学习的是第41页，共78页I C S I（五）植入和黄体支持（五）植入和黄体支持1、植入一般于体外培

37、养48小时后，将发育成48个细胞期的质量最好的胚胎移植到子宫腔内，一次植入34个胚胎。植入的方法，常用的为经阴道宫内植入法。2、黄体支持于胚胎植入第三天起，每隔三天肌肉注射2000IU的HCG，共二三次；或每天注射20mg的黄体酮，也可以每天使用40 mg的黄体酮阴道栓剂分早晚二次。现在学习的是第42页，共78页I C S I（六）生物妊娠及临床妊娠（六）生物妊娠及临床妊娠在胚胎移植15天后测血HCG，10天后若无月经再测一次HCG，第六周时可做B超观察胎囊以确定怀孕。如：HCG阳性而B超未观察到胎囊时，过45天再做一次B超，测孕酮，以排除异位妊娠的可能。现在学习的是第43页，共78页I C

38、S I（七）（七）试管婴儿试管婴儿”的遗传风险及其它的遗传风险及其它1、卵胞浆内单精子注射授精技术的开展使得许多、卵胞浆内单精子注射授精技术的开展使得许多无精子患者或者严重少精子患者通过附睾抽吸或无精子患者或者严重少精子患者通过附睾抽吸或睾丸穿刺等方法获得精子并完成受精，但是由于睾丸穿刺等方法获得精子并完成受精，但是由于造成无精子症或者严重少精子症的原因是各种各造成无精子症或者严重少精子症的原因是各种各样的，而且相当部分样的，而且相当部分。因此，通。因此，通过过ICSI所生产的婴儿就有继承这些遗传病的可能。所生产的婴儿就有继承这些遗传病的可能。现在学习的是第44页，共78页I C S I（七）

39、（七）试管婴儿试管婴儿”的遗传风险及其它的遗传风险及其它从第一代、第二代从第一代、第二代“试管婴儿试管婴儿”的产生过程来看：的产生过程来看：前者与正常婴儿似乎没有太大的区别，体外授精技术只是克服了精卵结合的物理障碍，缩短了两前者与正常婴儿似乎没有太大的区别，体外授精技术只是克服了精卵结合的物理障碍，缩短了两者之间的距离，而整个受精过程与普通受精过程一样都是自然状态下进行的。者之间的距离，而整个受精过程与普通受精过程一样都是自然状态下进行的。 而后者与前者不同，首先精子是由操作者而后者与前者不同，首先精子是由操作者“挑选挑选”的，一般操作者都是以的，一般操作者都是以“貌貌”取取“精精”，选择外形

40、好精子；，选择外形好精子；其次，操作者其次，操作者“强行强行”将精子注射到卵子内使两者受精，剥夺了精子和卵子自己的择将精子注射到卵子内使两者受精，剥夺了精子和卵子自己的择“偶偶”权利。权利。两点问题：两点问题：第一、那些从睾丸或者附睾内取出的精子以及质量差的精子本身就可能存在着一定的问题，虽然第一、那些从睾丸或者附睾内取出的精子以及质量差的精子本身就可能存在着一定的问题，虽然操作者主观上选择的是操作者主观上选择的是“好好”的精子，但这只是表面上的，并不能反映它们内在的质量和遗传性的精子，但这只是表面上的，并不能反映它们内在的质量和遗传性状。状。再者，显微注射授精（再者，显微注射授精（ICSI）

41、技术引导的不是一个自发的受精过程，它违反了精卵结合的自然生物学法）技术引导的不是一个自发的受精过程，它违反了精卵结合的自然生物学法则，因此必然会增加一定的遗传风险。则，因此必然会增加一定的遗传风险。目前的一些统计数据也表明：第一代目前的一些统计数据也表明：第一代“试管婴儿试管婴儿”出生后先天性畸形的发生率并不比普通婴儿出生出生后先天性畸形的发生率并不比普通婴儿出生后的高（都后的高（都1%），而第二代），而第二代“试管婴儿试管婴儿”出生后先天性畸形的发生率比前两者都高出生后先天性畸形的发生率比前两者都高(1%-3%)。现在学习的是第45页，共78页第二篇第二篇 人类精子库人类精子库现在学习的是第

42、46页，共78页精子的特点精子的特点 精子是人类最宝贵且最丰富的人类繁衍生物精子是人类最宝贵且最丰富的人类繁衍生物资源资源 精子的特点：精子的特点： 细胞核致密细胞核致密 胞浆很少胞浆很少 能运动能运动 具有受精能力具有受精能力 现在学习的是第47页，共78页人类精子库概念与原理人类精子库概念与原理 深低温冷冻储藏人精子的设备和场所深低温冷冻储藏人精子的设备和场所 精子或精液进行冷冻储藏原理：精子或精液进行冷冻储藏原理： 低温条件下使精子迅速降温、凝固低温条件下使精子迅速降温、凝固 形成非损伤性结冰形成非损伤性结冰 精子细胞内分子远动速度减慢、停止精子细胞内分子远动速度减慢、停止 细胞内代谢降

43、低、处于休眠状态细胞内代谢降低、处于休眠状态 达到冷冻储藏的目的达到冷冻储藏的目的 可保存可保存10年或更长时间年或更长时间现在学习的是第48页，共78页精液冷冻保存原理精液冷冻保存原理 室温室温 5 5 C C温度休克阶段温度休克阶段 5 5 C -5 -5 C C冰晶的潜热阶段冰晶的潜热阶段 -5-5 C -15 -15 C C冰晶形成阶段冰晶形成阶段 -15-15 C -80 -80 C C再结晶阶段再结晶阶段 -80-80 C -196 -196 C C储藏阶段储藏阶段 -196-196 C 室温室温复温阶段复温阶段现在学习的是第49页，共78页精液冷冻技术精液冷冻技术冷冻保护剂的选择

44、冷冻保护剂的选择 外膜保护剂外膜保护剂不易透过细胞膜的物质如卵黄、类脂质等不易透过细胞膜的物质如卵黄、类脂质等 内膜保护剂内膜保护剂能进入细胞内的物质如甘油、二甲基亚砜等能进入细胞内的物质如甘油、二甲基亚砜等 （柠檬酸、葡萄糖、果糖、青霉素、链霉素、新鲜卵黄、甘油等）（柠檬酸、葡萄糖、果糖、青霉素、链霉素、新鲜卵黄、甘油等） 制冷源：制冷源： 液氮蒸汽法液氮蒸汽法储藏方法储藏方法： 颗粒法颗粒法 安瓶法安瓶法 细管法细管法现在学习的是第50页，共78页人类精子库相关主要技术人类精子库相关主要技术 供精者的筛选供精者的筛选精液分析、精子功能评估精液分析、精子功能评估免疫学检查：免疫学检查： 抗精

45、子抗体、体液免疫、细胞免疫抗精子抗体、体液免疫、细胞免疫 细胞遗传学检查：细胞遗传学检查： 染色体染色体 性传播性疾病检查：性传播性疾病检查： 供精前、供精后供精前、供精后 6个月复查个月复查现在学习的是第51页，共78页我国精子库现状我国精子库现状我国精子库、人工受精技术的开展：我国精子库、人工受精技术的开展： 缺乏缺乏“精子库精子库”、“人工受精人工受精”概念的认识概念的认识 供精者取精前、取精后无管理规章供精者取精前、取精后无管理规章 缺乏合乎科学、伦理法规管理制度缺乏合乎科学、伦理法规管理制度 缺乏现代化科学仪器设备缺乏现代化科学仪器设备- 单纯而简单地液氮罐保存单纯而简单地液氮罐保存

46、 缺乏专业管理人才缺乏专业管理人才 缺乏社会文化的普及教育缺乏社会文化的普及教育 缺乏各级领导的重视缺乏各级领导的重视 有商业化趋势有商业化趋势目前卫生部尚未正式批准任何精子库目前卫生部尚未正式批准任何精子库2001年国家颁布：人类精子库、人工受精管理条理年国家颁布：人类精子库、人工受精管理条理现在学习的是第52页，共78页人类精子库的现代化设备人类精子库的现代化设备标本储存罐标本储存罐1个（可储存标本个（可储存标本10，000份）份）档案管理专用电脑档案管理专用电脑1台台程序降温仪程序降温仪1套套搅拌机搅拌机1台台精子运输罐精子运输罐3个个纯水制作装置纯水制作装置1个个液氮保存罐液氮保存罐2

47、个（个（34升升/个）个）冰箱冰箱1台台恒温培养箱恒温培养箱1台台离心机离心机1台台水浴箱水浴箱1台台加热平台加热平台1台台百级超净台百级超净台1台台电子消毒器电子消毒器5个个相差显微镜相差显微镜1台台精液分析设备精液分析设备1套套恒温操作台恒温操作台1套套电子天平电子天平1个个现在学习的是第53页，共78页精子库相关技术与操作规程精子库相关技术与操作规程 精液分析操作规程精液分析操作规程 精液冷冻复苏技术操作规程精液冷冻复苏技术操作规程 免疫学检查操作规程免疫学检查操作规程 细胞遗传学的实验室检查操作规程细胞遗传学的实验室检查操作规程 精液的生化检查操作规程精液的生化检查操作规程 衣原体与支

48、原体检查操作规程衣原体与支原体检查操作规程 男性激素检测操作规程男性激素检测操作规程现在学习的是第54页，共78页人类精子库相关规章制度人类精子库相关规章制度 精子库工作人员守则 精子库负责人责任制度 精子库设备管理制度 精子库工作人员保密制度 精子库档案管理制度 精子库工作人员行为准则 精子库材料管理制度 精子库自查制度 精子库分工责任制现在学习的是第55页，共78页人类精子库工作流程图人类精子库工作流程图建立供精者网络建立供精者网络筛选供精者筛选供精者精液分装、冷藏精液分装、冷藏精液复苏精液复苏供应精液或精子供应精液或精子授精者随访授精者随访精液质量反馈精液质量反馈严格按操作规程和严格按操

49、作规程和操作制度进行管理操作制度进行管理现在学习的是第56页，共78页人类精子库的用途人类精子库的用途 开展生殖保险 为人工受精技术提供精子现在学习的是第57页，共78页 人类精子库相关主要技术人类精子库相关主要技术供精者健康状况检查供精者健康状况检查精液分析、精子功能评估精液分析、精子功能评估免疫学检查：免疫学检查： 抗精子抗体、体液免疫、细胞免疫抗精子抗体、体液免疫、细胞免疫 细胞遗传学检查：细胞遗传学检查：染色体染色体 传染病传染病 性传播性疾病检查：性传播性疾病检查：精液采集精液采集供精者复查供精者复查 供精后供精后 6个月复查个月复查现在学习的是第58页，共78页人类精子库工作程序人

50、类精子库工作程序精液采集组精液采集组供精网络供精网络供精者须知、捐精者登记供精者须知、捐精者登记 供精者筛选供精者筛选体检、实验室检查体检、实验室检查供精者随访供精者随访 体检、实验室检查体检、实验室检查精液冻苏处理组：精液冻苏处理组：精液收集、冷藏、复苏、编码登记精液收集、冷藏、复苏、编码登记精液供给组：精液供给组：实施方法、资料反馈、列表登记实施方法、资料反馈、列表登记行政管理组：行政管理组：规章制度、操作常规、供精协议、保密制度、伦理法规规章制度、操作常规、供精协议、保密制度、伦理法规信息网微机网络管理、信息表信息网微机网络管理、信息表 技术培训与管理：培训计划、考核、日常管理技术培训与