药物分析第七版期末考试重点(16页).doc

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1、-药物分析第七版期末考试重点-第 16 页 药物分析第一章 概况药典基本结构 凡例 正文 附录 索引（中英文）凡例 解释和正确使用CHP进行质量检定的基本原则，并对有关共性问题进行规定1） 名称及编排2） 项目与要求3） 检验方法和限度4） 标准品、对照品用于鉴别、检查和含量测定的标准物质。不包括色谱用的内标标准品：是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位或ug计。对照品：除另有规定外，均按干燥品或无水物计算后使用。5） 计量 法定计量单位6） 精确度 取样量的准确度和实验精密度精密称定：准确至所取重量的千分之一称定：准确至所取重量的百分之一取用量约若干：指该量

2、不得超过规定量的正负10%。精密量取：量取体积的准确度应符合该体积移液管的精密度要求称取：根据数据的有效数位确定 分别称取： 则可称 ：量取：用两桶或按照量取体积的有效数位选用量具恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在以下的重量。按干燥品计算：除另有规定外，应取未经干燥的供试品进行试验，测得干燥失重后，再在计算式从取用量中扣除空白试验：不加供试品或以等量溶剂替代供试液，同法操作所得结果。第二章 药物的鉴别试验目的：项目：1.性状 外观 溶解度 物理常数（熔点，比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度吸收系数：在给定的波长，溶剂温度等

3、条件下，吸光物质在单位浓度，单位液层厚度时的吸收度）2.一般鉴别试验（general identification test GIT） 根据某一类药物的化学结构或物化性质，通过化学反应鉴别药物的真伪。 只能证实药物的类别，不能证实是哪一种药物，区别不同类别的药物。仅适用于确认单一的化学药物。3.专属鉴别试验 (SPECIFIC IDENTIFICATION TEST,SIT)在git的基础上进行，根绝每一种药物在化学结构和理化性质上的特殊性差异，采用更灵敏、选择性更强的反应，进一步鉴别药物的真伪。区别同类药物。方法验证：化学法，光谱法，色谱法，生物学法最低检出量：应用某一反应，在一定反应条件下

4、，能观测除反应结果所需的供试品的最小量。空白试验：消除试剂和器皿可能带来的影响 对灵敏度很高的鉴别试验，很重要提高反应灵敏度的方法： 消除干扰 改进观测方法 加入少量与水互不相容的有机溶剂，颜色加深，易观察第三章 药物的杂质检查第一节、杂质来源：生产过程中引入（合成药，药物制剂的生产过程中，引入溶剂、酸碱性试剂、催化剂，从金属工具中引入金属杂质，引入低效无效的药物异构体或晶型）贮藏过程中引入，（保存不善或贮藏时间过长，微生物作用，外界条件影响导致水解、氧化、霉变、异构化、晶型改变）杂质限量：含义，在不影响药物的疗效和不产生毒性的情况下，药物中可允许的咋质量。即药物中允许杂质存在的最大量。杂质限

5、量检查：不要求测定杂质的含量，只需检查杂质是否超过限量。 方法：对照法：去一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品在相同条件下处理后，比较反应结果。特点：注意平行操作，不需知道杂质的准确含量杂质限量=（杂质最大允许量/供试品量）*100%=【（标准溶液的浓度*标准溶液的体积）/供试品量】*100%灵敏度控制法，在供试品溶液中键入试剂，一定条件下反应后，观察有无正反应出现。 以不出现正反应为合格。特点：不需对照品。比较法：取供试品一定量依法检查，测定特定待检杂质的参数（如吸光度）与规定的限量进行比较，不得更大一般杂质的检查方法， 化物检查法原理方法1、反应试剂：AGNO3试液，2、标准溶液：标准N

6、ACL溶液，每1ml相当于10ug的cl-适宜比浊浓度：50-80ugcl-/ml原理氯化物AGNO3硫酸盐Bacl2铁盐SCN-重金属硫代硫酸钠砷盐古蔡式法zn+hcl产生H2,+AsSO33-生成ASH3炽浊残渣硫酸灰分残留溶剂加入过硫酸钠的作用，将fe2+氧化成fe3+,防止光纤将硫氰酸铁离子还原或分解第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析方法：一、 容量分析法 二、光谱分析法三、色谱分析法一、容量分析法 1.关键：准确地确定等当点 （滴定液与被测药物完全作用，反应达到化学计量点即等当点） 2.滴定误差：滴定终点与等当点之间的误差3.特点 简便，快速，精密、准确 专属性、灵敏度差

7、 常用于化学原料药的含测滴定度T：每ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量（mg) aA + bB cC T = m (a/b) M （mg/ml）百分含量计算直接滴定：含量% = 生成物滴定法： 剩余滴定（做空白实验）： 先加入定量过量的滴定液A, 当与被测药物反应完全后, 再用另一滴定液B 回滴剩余的滴定液A 含量% = ：空白试验消耗滴定液 B 的体积 ：样品测定消耗滴定液 B 的体积二、光谱分析法（一）UV-Vis分光光度法1. Lambert-Beer 定律 A = CL ：百分吸收系数 2.特点：较灵敏、较准确；专属性差 3仪器校正和检定 n 波长校正：仪器使用前校正n 杂散光

8、的检查n 吸收度准确度的检定： 用重铬酸钾的硫酸溶液检定n 对溶剂的要求：截止波长，纯度 溶剂在所选波长附近的吸收度应不超过一定值。空气为空白4测定n 核对检测波长: 供试品的实际吸收峰波长是否与药典给出的波长一致(2nm) 如果不一致，可能与试样的真伪、纯度及仪器波长的准确度有关.n 以配制供试品溶液的同批溶剂为空白 n 供试品溶液：吸收度 ；溶质没有离解、聚合等 n 选择合适的定量方法测定 对照品比较法 比色法 吸收系数法 计算分光光度法 （二）荧光分析法1特点: 灵敏度高于UV; 荧光淬灭； 干扰多n 应在低浓度溶液中进行 高浓度：产生内滤光效应和自吸收现象 线性偏离 内滤光效应：溶液中

9、存在能吸收激发光和荧光的物质，使荧光强度减少。n 空白试验排除干扰 溶剂纯度，溶液中的微粒、溶氧、pH、温度、光照等n 校正仪器灵敏度：供试品对激发光稳定： 用待测物的对照品溶液校正供试品对激发光不稳定：采用激发、发射光谱与供试品近似且稳定的物质校正 蓝色荧光-硫酸奎宁的稀硫酸溶液 黄绿色荧光-荧光素钠水溶液 红色荧光-罗丹明 B 水溶液2含量测定 对照法：荧光强度与药物浓度线性关系良好时用 Cx = Cr 标准曲线法：荧光强度与浓度明显偏离线性时用三、色谱分析法特点：高效，快速，高灵敏度，高专属性 1HPLC法 n 最常用固定相： octadecylsilane-bonded silica

10、gel 十八烷基硅烷键合硅胶（ODS或C18） n 流动相及其pH：RP-HPLC首选甲醇-水，乙腈-水 pH 2-8 (以硅胶为基质的键合固定相） n 柱温、检测器：室温、紫外检测器 固定相种类、流动相组分和检测器类型不得任意改变外系统适用性试验色谱柱的理论塔板数 色谱峰的分离度 色谱系统的重复性 色谱峰的拖尾因子 n 药物分析中常用的 HPLC 定量方法： 内标法： 内标校正曲线法 内标一点法：对照法 内标校正因子法 外标法： 标准曲线法 外标一点法：对照法气相色谱法 药品标准中规定的色谱条件除 固定液品种、检测器类型及特殊指定的色谱柱材料不得任意改变外药物分析方法的验证：根据分析项目的要

11、求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所建立的分析方法是否科学、合理。保证分析结果的准确、可靠。 药品质量标准中需验证的分析项目： 鉴别试验 杂质限度或定量检查 原料药或制剂中有效成分的含量测定 制剂中其它成分的含量测定 含量均匀度、溶出度、释放度测定方法验证内容：准确度 精密度专属性 检测限定量限 线 性范 围 耐用性一、 准确度 accuracy 含义：测定结果与真实值的接近程度 表示：回收率 试验样品： 原料的含测：药物的对照品 制剂的含测：处方量的空白辅料 + 药物的对照品 已经测得含量的制剂 + 药物的对照品 杂质定量：已经测得杂质含量的原料药或制剂 +杂质对照品 溶

12、出度测定：空白溶出介质 + 药物的对照品二精密度 precision 含义：指在规定的测试条件下，对同一个均匀供试品，经多次 取样测定，所得结果之间的接近程度。 表示：标准偏差 SD 相对标准偏差 relative standard deviation RSD试验样品：供试品试验内容：重复性、中间精密度、重现性三专属性 specificity （选择性 selectivity）含义：有其他成分（如杂质、辅料等）存在时，分析方法能准确测定 出被测物的特性，即分析方法排除各种干扰的能力。 表示： 对鉴别试验：不含被测物的供试品，应呈负反应 对杂质检查和含量测定：被测物应能与其它成分分离 给出代表性

13、图谱，说明专属性四检测限 limit of detection, LOD 含义：指供试品中被测物能被测定出的最低浓度或量。 反映分析方是否具有灵敏的检测能力，没有定量意义。试验样品：处方量的空白辅料 + 药物的对照品（对药物制剂） 药物的对照品 （对原料药） 测定方法：（1）目视法，标准偏差法（2）信噪比法：适用于能显示信号和基线噪音强度的仪器分析方法 LOD为 S/N=3 时的对应浓度或注入仪器的量 检测限验证：浓度等于检测限的实际样品，进行分析，测试图谱五定量限 limit of quantitation, LOQ 含义：指供试品中被测物能被定量测定的最低浓度或量 测定结果应有一定准确度和

14、精密度 反映了分析方法定量测定的灵敏度试验样品：处方量的空白辅料 + 药物的对照品（对药物制剂） 药物的对照品 （对原料药）信噪比法测定：S/N = 10时，被测物浓度或注入仪器的量 定量限验证：测试图谱，测试结果的准确度、精密度 六线性 linearity 含义： 在设计的“范围”内，测试结果与样品中待测物浓度或量直 接呈正比关系的程度。 试验样品：被测物的对照品数据要求：回归方程、相关系数和线性图 ,至少 5 个点，相关系数大于0.999 七.范围 range 含义： 达到一定精密度、准确度和线性，分析方法适用的高、低限浓度或量的区间。常见规定范围： 原料和制剂的含测： 测试浓度的 80%

15、 120% 制剂含量均匀度测定：测试浓度的 70% 130% 溶出度或释放度测定：限度值的20% 杂质的含测： 规定限度的20%试验样品：供试品八耐用性 robustness 含义：当测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 试验样品：供试品 常见变动条件： 供试品溶液的稳定性 样品制备方法 HPLC中流动相组成的比例，pH，流速 色谱柱的厂牌、批号，柱温等 GC：色谱柱的厂牌、批号，固定液和载体的类型，柱温等。第五章体内药物分析概述体内药物分析的特点体内样品的特点 待测物浓度低、游离/结合物；干扰物多；样品数多、量小。 体内药物分析的特点 体内样品需要分离、浓集； 分析方法需专属、

16、灵敏；分析工作量大、复杂 1血样 常用稳定剂： 酶抑制剂（NaF、三氯醋酸） 抗氧剂2尿样测定尿药浓度的目的： 药物剂量回收，药物清除率，药物代谢和生物利用度 尿样特点：药物浓度较大但易变，体积大采样：常用时间尿保存：立即测定； 4保存； 放置较长时间需冷冻； 加入防腐剂：甲苯，氯仿，醋酸等（二） 常用预处理方法1、体内样品中蛋白质的去除（1）目的：l 去除蛋白质，释放结合型药物或代谢物，便于测定总浓度；l 预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成；l 保护仪器性能。（2）方法：u 蛋白质沉淀法 与水相混溶的有机溶剂：乙腈，甲醇，丙酮，THF 中性盐：饱和硫酸铵，硫酸钠，磷酸钠，NaCl，枸橼

17、酸盐 强酸：10%三氯醋酸，6%高氯酸 热凝固法：可将热变性蛋白质除去 u 酶解法 适用于与蛋白质结合牢固及遇酸或遇热不稳定的药物 常用蛋白水解酶中的枯草菌溶素（细菌性碱性蛋白分解酶） 2、体内样品中缀合物的水解缀合物（conjugate)： 药物或代谢物与内源性物质（葡萄 糖醛酸，硫酸等）结合生成的产物; 极性大.（1）目的：使缀合物中的药物或代谢物游离，便于用有机溶剂提取测定尿液中药物的总量3、体内样品中药物或代谢物的分离 定量分析方法的建立与验证 分析方法的选择：首选色谱法 色谱条件选择及优化 量方法的选择：首选内标法建立体内药物分析方法的基本步骤1色谱条件的初步选择 2. 空白生物基质

18、试验 方法特异性 3模拟体内样品试验 方法效能指标4实际体内样品测试 方法特异性 体内定量分析方法的验证：专属性准确度 精密度定量限 （定量下限）标准曲线及线性范围 提取回收率 样品稳定性 质量标准：是用以检测药品质量是否达到用药要求所作的技术规定。药品质量标准的分类：国家药品标准1中华人民共和国药典（疗效确切 生产成熟 产品稳定 ） 2局（部）颁标准 3进口药品注册标准 4临床试验用药品标准 5监测期药品标准 企业药品标准3. 鉴别药典常用的鉴别方法： （1）化学法 优点：操作简便、快速、成本低，应用广，缺点：专属性差 （2）仪器分析法 UV、IR、TLC、HPLC、GC、PC （3）理化常

19、数测定法 4、检查常用测定方法及其特点： (1)重量分析法 原料 准确度高、精密度好 灵敏度和专属性差 ，操作复杂 分析法 原料 准确度高、精密度好 灵敏度和专属性差 (3) 分光光度法：原料、单方制剂的含测；含量均匀度、溶出度 UV法 荧光法：灵敏度、专属性优于UV (4) 色谱法 原料、制剂 HPLC ：准确度、精密度、灵敏度均较好，专属性强 常选色谱柱：ODS，硅胶，氨基键合硅胶柱 首选检测器：Vis-UV GC： 常选固定液：SE-30、OV-17、OV-101、SE-54、 PEG-20M 首选检测器：FID 6贮藏药品稳定性试验的分类及目的： （1） 影响因素试验 （2） 除去包装

20、 ，高温、高湿度、强光照射、其他破坏等试验 主要目的：研究药物的固有稳定性及其影响因素，为贮藏条件提供依据。(2)加速试验： 40 oC，75%相对湿度v 上市药品包装目的：未进行室温或一般条件下长期稳定性试验前，预测药物的稳定性，保证临床研究或试生产期间的药品质量；为制剂设计、包装、贮藏等提供必要资料。(3)长期试验： 25 oC，60%相对湿度 上市药品包装， 目的：考察药品的有效期 （4）配伍稳定性试验：制剂的稳定性试验有时考察 第七章 药物制剂分析1.药物制剂分析的特点 1）鉴别特点 可采用原料的鉴别方法。 当辅料干扰主药的鉴别时，不能直接采用。先去除辅料或改用具有分离能力的方法。 2

21、）检查特点 杂质检查 项目可能不同。不需重复原 料药的项目，而检查在制剂制备和贮藏过程中可能引入的杂质。 限量要求不同。 剂型常规检查 保证均一性、安全性、有效性 3）含量测定特点 测定方法可能不同 化学原料注重精密度；制剂注重选择性和灵敏度。 结果表示不同 原料多用百分含量，制剂多用标示量。 含量合格要求不同溶出度 dissolution rate: 系指药物从片剂、胶囊剂等制剂在规定条件下溶出的速率和程度溶出度试验 dissolution test: 测定药物制剂溶出度的过程，是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中崩解和溶出的体外试验方法。Noyes-Whitney方程影响药物溶出的主要因素 1

22、药物粒子大小 药物的理化性质 溶解度、水合状态、晶型等 制剂处方和工艺 3.药物制剂的含量均匀度检查含量均匀度： 系指小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂的每片（个）含量符合标示量的程度。检查目的：控制小剂量或单剂量制剂中药物含量的均匀程度，保证给药剂量的准确性。片剂分析 常规检查：重量差异 崩解时限糖类的干扰及其排除 （排除：过滤、改用弱氧化剂硫酸亚铁片剂：铈量法； 原料：高锰酸钾法） 硬脂酸镁的干扰及其排除 （掩蔽法： 酒石酸、草酸等掩蔽。 提取分离法：有机溶剂提取药物UV法： 硬脂酸镁无UV吸收） 注射剂分析 常规检查：装量 渗透摩尔浓度 装量差异 可见异物 不溶性微粒

23、无菌 热原或细菌内毒素 u 抗氧剂的干扰及其排除 避开Vit C的最大吸收波长，可排除其对药物UV测定法的干扰。 加掩蔽剂 丙酮或甲醛 加酸使抗氧剂分解 加弱氧化剂氧化 溶u 剂油的干扰及其排除 有机溶剂稀释法 有机溶剂提取法 柱色谱法第八章 羧酸及其酯类药物的分析结构与性质羧基-酸性 -OH、-OCOCH3：邻位致活基团 酸性增强 邻位-OH: 分子内氢键 酸性增强酸性大小 水杨酸阿司匹林苯甲酸 HAc H2CO3 苯酚 酯基-水解性 酸性介质: 不可能全部水解 过量碱(氢氧化钠和碳酸钠)存在，可水解完全 3）官能团反应特性 含酚羟基、潜在酚羟基的水杨酸类 与三氯化铁试液反应，显色u 含芳伯

24、氨基、潜在芳伯氨基 重氮化反应、重氮化-偶合反应u 含硫的丙磺舒 分解生成硫化物阿司匹林鉴定 水解反应与三氯化铁反应含酚羟基或潜在酚羟基的药物, 在中性或弱酸性条件下, 可与FeCl3试液反应, 生成类似紫色 (紫色, 紫堇色,紫红色) 的配位化合物.丙磺舒钠盐在水溶液中与三氯化铁试液反应，生成米黄色沉淀重氮化-偶合反应分解反应 丙磺舒特殊杂质：乙酸苯酯 水杨酸苯酯 乙酰水杨酸苯酯 ,一定量阿司匹林在碳酸钠试液中溶解应澄清。 游离水杨酸 水杨酸可直接与高铁盐反应呈色 HPLC法阿司匹林含量测定 酸碱滴定法 UV法 HPLC法 氯贝丁酯的鉴别 异羟肟酸铁反应 KOH Fe3+ 紫色卡托普利的鉴别

25、 酰化反应 HNO2 红色酮洛芬的鉴别 缩合反应 酮洛芬 + 二硝基苯肼 偶氮化合物 (橙色）第九章 巴比妥类药物的分析环状丙二酰脲母核：共性部分 与其它类药物区别取代基：特性部分 区别各巴比妥类药物巴比妥 苯巴比妥u 理化性质u 1.弱酸性2.与重金属离子的反应3.紫外吸收光谱特征4.官能团反应特性 u 1.弱酸性 酰亚胺基上的氢受邻位羰基的影响，可以发生 1,3-质子迁移，由酮式变为稀醇式。pH10的碱性溶液： 5，5-二取代和1，5，5-三取代药物均发生一级电离pH13的强碱性溶液）：5，5-二取代药物发生二级电离，共轭结构延长，最大吸收峰在255nm;鉴别试验一）丙二酰脲类鉴别反应 一

26、般鉴别反应 ,银盐反应的方法, 铜盐反应的方法u 利用不饱和取代基的鉴别试验 - 司可巴比妥钠 与碘或溴试液的加成反应： 碘试液或溴试液褪色, 与KMnO4的氧化还原反应： 碱性溶液中，巴比妥类药物将紫色的 KMnO4,还原成棕色的MnO2u 利用芳环取代基的鉴别试验 -苯巴比妥 硝化反应 含芳香取代基的巴比妥类 + KNO3 + H2SO4 黄色硝基化合物 与硫酸-亚硝酸钠的反应 苯巴比妥 + 硫酸-亚硝酸钠，橙黄色产物，随即变为橙红色。 与甲醛-硫酸的反应 苯巴比妥 + 甲醛-硫酸 玫瑰红色产物含量测定 银量法原理 巴比妥类药物与硝酸银定量反应生成溶于水的一银盐。反应比为1：1 稍过量的银

27、离子与药物形成难溶性的二银盐沉淀，溶液变混浊，指示滴定终点。 以银-玻璃电极电位法指示终点，准确。溴量法定量反应 +Br2 剩余滴定+KI 置换滴定+硫代硫酸钠+淀粉第十章 芳胺类药物的分析u 对氨基苯甲酸酯类药物 基本结构:芳酰胺类药物基本结构共性：芳酰氨基理化性质：芳伯氨基特性、水解后显芳伯氨基特 ，重氮化-偶合反应，与芳醛缩合形成Schiff碱的反应 Schiff碱：伯胺和醛、酮反应生成的化合物 ArCHO + H2N-R ArCH=NR + H2O 氧化变色三鉴别试验（一）重氮化-偶合反应 盐酸丁卡因 酸性溶液中，与亚硝酸钠反应N-亚硝基化合物的乳白色沉淀盐酸普鲁卡因 重金属离子1 与

28、铜和钴离子的反应 ，Na2CO3试液中：（ChP) 盐酸利多卡因 + CuSO4 蓝紫色配位化合物 转入氯仿中呈黄色 盐酸酸性溶液中：（USP) ，盐酸利多卡因 + CoCl2 亮绿色钴盐三氯化铁反应亚硝酸钠滴定法1. 原理 Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O (定量） 2. 测定条件 1）加入适量KBr，加快反应速度 2）酸的种类和用量HCL 3）反应温度 室温 4）滴定速度 滴定终点：常用指示剂：KI-淀粉糊剂或指示液缺点： 易混淆终点：未达终点时，KI在滴定液的强酸性条件下被空气中的氧氧化析出碘，与淀粉显蓝色，多次外试损失样品第十一

29、章 苯乙胺类药物的分析（一）基本结构l 酚羟基特性： 与Fe3+等重金属离子配合呈色，易氧化呈色 l 芳环侧连的氨基醇结构：双缩脲反应 在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物的反应 脂肪伯氨基：与亚硝基铁氰化钠反应 含酚羟基的本类药物，易被氧化剂氧化 氧化剂： 碘 过氧化氢 铁氰化钾三特殊杂质检查酮体在310nm波长处有最大吸收第十二章 甾体激素类药物的分析基本结构 均含环戊烷并多氢菲母核u 甾体化合物取代基构型的确定 甾体分子的 4 个环处于同一均等平面 若将18-，19-位的角甲基置于平面之上，则： 伸在平面之上的氢原子或取代基为构型（实线表示） 处于平面之下的氢原子或取代基为构

30、型（虚线表示） 第二节 鉴别试验 （一）官能团反应1C17-醇酮基的呈色反应n 鉴别肾上腺皮质激素 ：-醇酮基：强还原性，能与氧化剂反应 碱性酒石酸酮试液 ： 深蓝色的溶液（Cu2+） Cu2O(红色) 氨制硝酸银试液：产生Ag四氮唑试液：产生有色的甲替2酚羟基的呈色反应 鉴别雌激素类 ：与重氮苯磺酸反应 生成红色染料3炔基的沉淀反应 鉴别含乙炔基的甾体激素 和硝酸银试液反应，生成白色炔银沉淀。4. 甲基酮的呈色反应 鉴别孕激素类 含CH3CO-的甾体激素类可与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚和芳香醛反应呈色。 黄体酮 + Na2Fe (CN)5(NO) 蓝紫色产物（灵敏、专属）5酮基的呈色反应 与

31、羰基试剂反应，形成黄色的腙 2，4-二硝基苯肼 硫酸苯肼 异烟肼6.有机卤素三比色法含量测定方法 四氮唑比色法 肾上腺皮质激素类的含测 2反应原理 在强碱性溶液中，含C17-醇酮基的肾上腺皮质激素将四氮唑盐定量还原为有色甲替 Kober反应比色法n 雌激素的含测n 雌激素与硫酸-乙醇反应呈色，在520 nm 附近有最大吸收 异烟肼比色法 n 原理 酸性条件下，酮基与异烟肼缩合，形成黄色的异烟腙，一定波长处具有最大吸收。 n 反应的专属性 对含4-3-酮基的甾体激素类有一定专属性第13章维生素类药物的分析鉴别试验三氯化锑反应(Carr-Price 反应)1、原理u 维生素A在饱和无水SbCl3的

32、无醇三氯甲烷溶液中，显蓝色 维生素A和SbCl3中存在的亲电试剂氯化高锑（5价）作用，形成不稳定的蓝色碳正离子u 维生素A的无水乙醇-盐酸溶液： 326nm处有单一吸收峰含量测定（一）UV法 (三点校正法) u 维生素A： 在325-328nm范围内具有最大吸收u 维生素A原料中混有的杂质： 在310-340nm内，有吸收2三点校正法 u 在3个波长处测定吸收度后，在规定条件下以校正公式校正吸收度，再进行含量计算。u 消除杂质等无关吸收的影响，求得维生素A的真实含量。u 求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量u 标示量 % = u A：A328或 A328(校正) D：供试品稀释倍数u W：供试品

33、取用量 ：胶丸的平均内容物重u 标示量：每粒胶丸含Vit A醋酸酯的国际单位数u 维生素A醇维生素B（一）硫色素反应-维生素B1的专属反应u 碱性溶液中，噻唑环 开环，再与嘧啶环上的NH2 环合，经铁氰化钾等氧化剂 氧化，生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或异丁醇），显蓝色荧光。加酸使成酸性，荧光消失，再加碱使成碱性，荧光又重现。维生素C一结构与性质 （一）结构l 二烯醇l 内酯环l 2个手性碳原子鉴别试验与硝酸银（二）与2，6-二氯靛酚反应由玫瑰红色生成红色 ，含量测定1。碘量法2，6-二氯靛酚法，滴定终点显红色维生素Eu 硝酸酸性条件下，水解成生育酚，生育酚被硝酸氧化成生育红（橙红色）u 三氯

34、化铁碱性条件下，水解成生育酚 ，生育酚与FeCl3发生氧化还原反应， 生育酚 对-生育醌 Fe3+ Fe2+u Fe2+与联吡啶，生成红色的配位离子第十四章 杂环类药物的分析第一节 莨菪烷类药物主要理化性质u 水解性 具有酯结构，易水解u 碱性，脂环上的叔胺氮原子：碱性较强，易与酸成盐 u 旋光性 氢溴酸东莨菪碱：含手性碳原子，左旋体 硫酸阿托品：含手性碳原子，但容易外消旋化 消旋体，无旋光性 u 鉴别试验：托烷生物碱的一般鉴别试验 Vitaili反应：水解产物莨菪酸的反应 氧化还原反应第二节 吩噻嗪类药物鉴别试验：氧化剂氧化显色反应 与钯离子配合显色反应：不受氧化产物的干扰第三节 苯并二氮杂

35、卓类药物主要理化性质u 弱碱性： 苯并二氮杂卓上的N： 弱碱性，在非水溶液中可用酸液滴定 u 水解性，二苯甲酮衍生物 u 水解后显芳伯胺反应 适于N1位上未取代的该类药物第四节 喹啉类药物（一）绿奎宁反应 6位含氧的喹啉衍生物：显此反应 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁 生成绿色产物 碱性条件下，呈绿色 中性条件下，呈蓝色 酸性条件下，呈紫红色第六节、二氢吡啶类化学鉴别法（二氢吡啶类药物）l 利用硝基的氧化性鉴别l 与亚铁盐反应： Fe(OH)2 Fe(OH)3 (红棕色)l 重氮化-偶合反应 l 利用氨基质子的解离性鉴别 与NaOH试液反应，显橙红色 含量测定：非水溶液滴定法l 有机碱盐的滴定： 置换滴

36、定，即强酸滴定液置换出与有机弱碱相结合的弱酸。（二）一般方法 样品滴定；空白试验 （三）问题讨论1适用范围 主要用于有机弱碱（Kb10-8）及其盐 有机碱盐： 有机酸盐 磷酸盐 氢卤酸盐 硫酸盐 硝酸盐 有机酸的碱金属盐5终点指示方法 电位法，指示剂法 高氯酸为滴定剂：结晶紫应用实例：1游离碱性药物的测定 非水法直接测定2 氢卤酸盐类碱性药物的测定先加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，再滴定 ，加乙酸酐的高氯酸电位滴定法 ，以醇类为溶剂的氢氧化钠电位滴定法 3硫酸盐类碱性药物的测定非水介质中，硫酸只供给一个H+，解离为HSO4- 直接用高氯酸滴定液滴定，但只能滴定至硫氢酸盐硫酸阿托品测定： 1mol

37、硫酸阿托品 1mol 高氯酸硫酸奎宁测定： 1mol 硫酸奎宁 3mol高氯酸 (C20H24N2O2.H+)2SO4 + 3HClO4 (C20H24N2O2.2H+) .2ClO4- + (C20H24N2O2.2H+) .HSO4- . ClO4- 脂环氮：碱性强，与硫酸成盐 喹啉环中的氮和脂环氮：都可与高氯酸成盐 碱化提取的目的：除去附加剂的干扰（一）酸性染料比色法 （1）水相中反应 （2）有机溶剂提取: 消除剩余染料的影响，剩余的酸性染料留于水相 定量分离出有机提取液，脱水后，碱化，则水相呈色，测定水相中In-的吸收度，间接求出有机碱的含量酸性染料的选择 要求：能与有机碱药物定量结合

38、；有机溶剂中不溶或少溶；生成的离子对易溶于有机溶剂，有较高的吸收度常用： 溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、甲基橙等 水相的最适 pH 值 如果水相pH值过小，酸性染料几乎仍以分子状态存在； 如果水相 pH 值过大，则生物碱几乎全部以游离碱的形式存在。有机溶剂的选择：常用 CHCl3、CH2Cl2水分的影响 ：严防水分混入有机层第十五章抗生素 内酰胺类抗生素（一）呈色反应u 羟肟酸铁反应 （二）庆大霉素C组分测定1. 测定方法 HPLC-衍生UV法 ( USP) 蒸发光散射检测（Ch.P) 衍生电化学检测（BP) 2.UV衍生法 3. 定量方法：外标法，峰面积归一化 Rf: 某组分的峰面积； Rs: 所有组分峰面积之和蒸发光散射检测器工作原理 检测三步曲 雾化-蒸发-检测 流动相要求： 必须是挥发性的，不能含有缓冲盐 样品要求：挥发性低于流动相