柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝(1页).doc

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1、-柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝 主讲教师：王双燕色谱法又称为层析法，是目前广泛被运用分离纯化化合物的常用方法，按操作方式可以分为柱色谱、薄层色谱等。柱色谱是将分离材料放入玻璃柱中，以适当的洗脱剂进行洗脱而使不同成分得以分离的方法。常用的装柱方法有干法装柱和湿法装柱两种方法，我们本次试验使用湿法装柱分离两种染料。操作步骤分为装上样洗脱与收集后处理。实验器材：铁架、铁夹、玻璃柱、玻璃棒、敲振棒、脱脂棉、烧杯、滴管、试管、试管架、硅胶、洗脱剂。实验操作：（1）装柱：用烧杯称取6.0g硅胶，加入洗脱剂中，搅拌至无气泡，玻璃柱用铁夹固定在铁架台上，在管柱下方放一锥形瓶，承接洗脱液，玻璃柱内塞入一小团棉花防

2、止固定相流出，用洗脱剂将棉花润湿，以赶走气泡，将搅拌好的固定相迅速倒入管柱中，用少量洗脱剂将粘附于管壁上的固定相冲洗至管柱中，沉降过程中可用敲振棒轻敲管壁赶出气泡，让固定相平整紧实，若不紧实会影响分离效果，若洗脱液流动较慢，可用干净的滴管将之从管中上方吸出，减少等待时间。（2） 上样：当洗脱液面和硅胶面平行时，将样品沿管壁靠近硅胶面顺着管壁环形小心加入，当被分离的甲基橙和甲基蓝混合试液下移至被固定相平面是，可沿管壁加入洗脱剂。（3） 洗脱与收集：加入洗脱剂至柱顶端，洗脱过程需要注意随时补充洗脱剂，切勿使洗脱剂流干，这会使管中填充材料内有空气，影响分离。收集洗脱液，每3ml收集一支试管，注意收集先后顺序，也可以在试管壁上贴上标签，在收集过程中注意观察记录颜色变化，直至所有颜色被洗脱出来。（4） 后处理：实验结束后得到多只不同颜色的试管，试管内的收集液必须必须进一步用薄层色谱法分析以判定分离效果。洗净试管，收拾好台面即可以离开。-第 1 页-