柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝(1页).doc

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1、-柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝 主讲教师:王双燕色谱法又称为层析法,是目前广泛被运用分离纯化化合物的常用方法,按操作方式可以分为柱色谱、薄层色谱等。柱色谱是将分离材料放入玻璃柱中,以适当的洗脱剂进行洗脱而使不同成分得以分离的方法。常用的装柱方法有干法装柱和湿法装柱两种方法,我们本次试验使用湿法装柱分离两种染料。操作步骤分为装上样洗脱与收集后处理。实验器材:铁架、铁夹、玻璃柱、玻璃棒、敲振棒、脱脂棉、烧杯、滴管、试管、试管架、硅胶、洗脱剂。实验操作:(1)装柱:用烧杯称取6.0g硅胶,加入洗脱剂中,搅拌至无气泡,玻璃柱用铁夹固定在铁架台上,在管柱下方放一锥形瓶,承接洗脱液,玻璃柱内塞入一小团棉花防

2、止固定相流出,用洗脱剂将棉花润湿,以赶走气泡,将搅拌好的固定相迅速倒入管柱中,用少量洗脱剂将粘附于管壁上的固定相冲洗至管柱中,沉降过程中可用敲振棒轻敲管壁赶出气泡,让固定相平整紧实,若不紧实会影响分离效果,若洗脱液流动较慢,可用干净的滴管将之从管中上方吸出,减少等待时间。(2) 上样:当洗脱液面和硅胶面平行时,将样品沿管壁靠近硅胶面顺着管壁环形小心加入,当被分离的甲基橙和甲基蓝混合试液下移至被固定相平面是,可沿管壁加入洗脱剂。(3) 洗脱与收集:加入洗脱剂至柱顶端,洗脱过程需要注意随时补充洗脱剂,切勿使洗脱剂流干,这会使管中填充材料内有空气,影响分离。收集洗脱液,每3ml收集一支试管,注意收集先后顺序,也可以在试管壁上贴上标签,在收集过程中注意观察记录颜色变化,直至所有颜色被洗脱出来。(4) 后处理:实验结束后得到多只不同颜色的试管,试管内的收集液必须必须进一步用薄层色谱法分析以判定分离效果。洗净试管,收拾好台面即可以离开。-第 1 页-

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