CTAB法抽提真菌DNA(2页).doc

《CTAB法抽提真菌DNA(2页).doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CTAB法抽提真菌DNA(2页).doc（2页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、-CTAB法抽提真菌DNA-第 2 页提取液：1M Tris.HCl pH8.0 10ml EDTA pH8.0 4mlCTAB 2gNaCl 巯基乙醇 2ml（使用时加入）加70ml ddH2O溶解定容至98ml步骤：1. 在液氮中研磨菌丝体，直到菌丝体研磨成解决白色细粉2. 将菌丝体装入1.5ml离心管中，加入600lCTAB提取液，于62-65水浴中加热1h，间或振荡数次3. 加入600lTris饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟4. 取上清至新的离心管中，然后加入1/10体积的3M/L NaA

2、c，1倍体积的异丙醇，轻柔混匀，在-20下静置30-60分钟，在12000rpm下离心5分钟5. 离心后去上清，沉淀用70乙醇润洗2次6. 加入适量的TE缓冲液溶解沉淀，7. 加入1l RNase（10mg/ml）37水浴1小时8. 加入1倍体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管9. 加入1倍体积的氯仿，温和振荡几次，在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管中10. 加入2倍体积无水乙醇，-20静置30分钟以上，8000rpm离心12分钟11. 去除上清，沉淀用70乙醇润洗2次，加入100l TE缓冲液溶解沉淀，放入-20存放，待电泳检测