药理学实验指导(临床).doc

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1、药理学实验指导一、药理学实验课的目的和要求药理学实验课是药理学教学的重要组成部分，它的目的在于通过实验，不仅仅是验证药理学中的重要基本理论，牢固地掌握药理学的基本概念，更重要的是培养智能，即了解获得药理学知识的科学途径，使学生掌握进行药理学实验的基本方法和技能，初步具备客观地对事物进行观察、比较、分析、综合和解决实际问题的能力。同时，通过实验培养学生对科学工作的严肃态度、严格的要求、严密的工作方法和实事求是的作风。为了达到上述目的，要求做到下列事项：实验前：1. 仔细预习药理学实验指导，了解实验目的、要求、方法和操作步骤，领会其设计原理。2. 结合实验内容，复习有关药理学、生理学、生化学等方面

2、的知识，3。预测实验中各步骤可能出现的情况，注意实验中可能发生的问题。实验时：1. 实验分小组进行，每次实验前做好明确分工，同时要密切配合，使实验时能各尽其责，有条不紊地完成实验。2. 先检查仪器、药品、动物是否与实验讲义相符合，将实验器材妥善安排、正确装置。3. 严格按实验讲义上的步骤进行操作，准确计算给药量，注意爱护动物和标本，节约实验材料和药品。4. 保持实验室肃静和实验台面清洁与整齐，注意遵守实验室规则，当仪器损坏时，应立即报告老师，按规章处理。5. 细致的观察和思考实验过程中出现的现象，随时记录药物反应的出现时间、表现及最后结果。实验后：1. 明确实验目的、要求，精通实验内容及各项实

3、验在整个实验课中所处的地位。2. 指导实验课要认真、耐心，指导学生实验技术和操作，培养学生独立分析问题和解决问题的能力和科学作风。3仔细阅读实验报告，加强对学生的实验成绩考核工作。4指导教师带实验课前必须参加预实验，是正式实验前的关键步骤，根据预试所得结果或实验，对原实验设计作必要的修正，是指导药理实验课不可缺少的步骤，通过预试验可以解决，修正实验动物种类和例数，检查观察指标是否客观、灵敏、可靠，改进实验方法，和掌握熟悉实验技术，摸索药物剂量、浓度与反应关系，以便确定最适剂量，并拟出实验记录格式，并进行修正，确保正式实验有条理、按秩序进行。以上从学与教两方面提出要求，师生双方共同努力，才能达到

4、实验课的教学目的。二、实验结果的整理和实验报告的写作整理实验结果和撰写实验报告是做完每项实验后的总结工作，通过总结，使我们把在实验过程中获得的感性认识提高到理性认识，肯定实验取得的成果，明确存在的问题。实验报告是向他人提供研究经验及供自己日后参考的重要资料，写实验报告可培养学生的文字表达能力和概括综合分析能力，也是一次科研论文撰写的练习。1、实验结果的整理 药理实验结果有测量资料如血压值、心率、体温变化、瞳孔大小、睡眠时间、生化测定数据等。计数资料如阳性反应数或阴性反应数，动物死亡与存活数等。凡测量资料和计数资料，均应以正确的单位和数值作定量表示，必要时应做统计处理，以保证结论有较大的可靠性，

5、尽可能将有关数据组成表格或统计图，使主要结果有重点的表达出来，以便阅读和分析、比较。作表格时，一般将观察项目列在表内左侧，由上而下逐项填写，而将实验中出现的变化，按照时间顺序，由左而右逐项填写。绘图时，应在纵轴和横轴上列出数值刻度，标明单位。一般以纵轴表示反映程度，横轴表示时间或药量，而在图的下方注明实验条件。如不是连续性变化，也可以用柱型图表示。凡有曲线记录的实验，应及时在曲线图上标注说明，包括实验项目，实验动物的种类、性别、体重、给药量或其它实验条件等。对较长的曲线记录，可选取出现典型变化的段落，剪下后粘贴保存。这里需注意的是必须以客观的态度进行裁剪工作，不论预期内的或预期外的结果，均应留

6、样参考。2、实验报告的写作实验报告要求结构完整，条理分明、文字简练、书写工整、措词注意科学性和逻辑性，尽量采用科学术语。一般应包括下列内容：实验题目实验目的实验方法 当完全按照实验指导上的步骤进行时，可不必再重述。如果实验方法临时有所变动，或者由于操作技术方面的原因，影响观察的可靠性，应做简要说明。实验结果 是实验报告中最重要的部分，实验报告上一般只列经过归纳、表现的结果。但原始记录应保存备查，原始记录一般包括：实验动物条件：种类、体重、性别、标记、编号、种系等；实验药品来源、批号、剂型、浓度、剂量、给药途径等；实验时环境如日期、室温等；实验进程、步骤方法详细记录；观测各种指标数据和原始描记曲

7、线，图纸和统计学处理分析资料等。实验结果需要绝对真实性，切不可只选用主观愿望的资料，任意删去不同意的结果。要正确图表，表应有标题，说明表的内容，表的结构要简单明了，如实验报告中有表又有图时，图与表不要重复用同一数据，表中数据要注意有效数字，文字只提示图表说明什么问题，而不把图表中数据重复记录，文字能简单写明的数据不必用图表。讨论 应针对实验中所观察到的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识进行分析和讨论，切不可离开实验结果去空谈理论，应抓住重点，不要面面俱到，避免外展过多，要判断结果是否为预期的，如果属于非预期的，则应分析其可能的原因。切忌文过饰非，应提出实验中不足和存在的问题。结论 实验结论是从

8、实验结果归纳而得的概括性判断，也就是对本实验所能说明的问题、验证的概念或理论的简要总结。不必再在结论中重述具体结果。未获证据的理论分析，不能写入结论中。总之，一篇好的实验报告应具备五性：创造性、准确性、客观性、确证性、可读性。创造性：实验中能发现新问题，探索创新准确性：目的明确，数据准确、方法可靠客观性：实验结果要真实，实事求是确证性：作结论要根据实验结果，资料可信可读性：文字简明扼要、重点突出、层次清楚、文字通俗易懂，但不能用口语，有逻辑性。3、实验报告示例 实验 给药途径对药物作用的影响【目的】 观察不同给药途径对MgSO4作用的影响。【方法】取家兔2只，称体重，观察正常活动情况，然后给甲

9、兔耳静脉缓慢注射2% MgSO4175mg/kg体重，观察其反应；乙兔用以2% MgSO4溶液800mg/kg灌胃（剂量为静注剂量的4.6倍）。【结果】兔号药物剂量给药途径 反应甲2%MgSO4175mg/kg静脉注射随着注射量的增加，兔出现不能站立，瘫倒，最后呼吸停止、死亡。乙2%MgSO4800mg/kg灌胃观察2小时以上未出现类似家兔的上述反应。【讨论】 甲兔耳静脉注射MgSO4很快出现肌肉松弛，瘫痪及呼吸抑制现象，最后死亡。而乙兔所用的MgSO4剂量比甲兔大4.6倍，但系灌胃法给药，结果经2小时以上未出现上述反应。说明给药途径不同，药物的作用不同，这可能因MgSO4口服不易吸收之故。【

10、结论】给药途径不同可影响药物的作用。MgSO4静脉注射，可致家兔肌肉松弛，呼吸抑制而灌胃给药则否。 不正确的实验报告示例【目的】【方法】 均参见上述实验【结果】【讨论】 因为给药途径不同可影响药物的作用。所以乙兔虽然以比甲兔大4.6倍的MgSO4溶液灌胃也不出现类似甲兔在静注MgSO4后的肌肉麻痹和呼吸抑制等反应【结论】给药途径不同可影响药物的作用。MgSO4静注可致家兔瘫痪。呼吸中枢抑制而死亡。MgSO4灌胃则否。思考题：为什么说上例的【讨论】项和【结论】项均写得不正确：错在何处？试与实验报告示例相对照加以思考？三、药理学实验设计基本知识药理学实验的基本程序大体分为选题、设计、实验、资料整理

11、与总结五步。实验设计是中心环节，是制定实践选题目标，它关系到能否按选题愿望取得预期的结果。（一）实验设计的基本原则1. 对照没有对照就没有比较和鉴别，也就会影响科学性。对照的原则即“齐同对比”的原则。即除了要观察研究的因素外，实验组与对照组一切条件应尽量相同，有完全的可比性，才能排除影响因素，作出科学结论，常用的对照形式有：(1) 阴性对照：即用等量的无效制剂，如生理盐水或药物基质对照(2) 阳性对照：用已知有确切疗效的典型药物对照。一般选用药典或部颁与省颁标准的药物。(3) 空白对照：即不加任何处理的对照(4) 配对对照：包括同源配对和异体配对，前者是指同一个前后不同时间比较对照的结果与实验

12、结果的差异，或同一个左右两部分作对照处理和实验处理的差异，由于是在同一个体进行实验，可以最大限度地减少抽样误差，异体对照可包括一卵双胎或同窝动物，这可最大限度减少遗传变异的影响。(5) 组间对照：是用不同个体分组，比较两组或几组间的差异。药理研究中除设“阴性对照”外，要求同时设立“阳性对照”组以证明实验方法是否确实可靠。2. 随机随机是按机遇原则进行分配，如动物分组、操作程序等，一切影响实验结果的非实验因素和条件均要注意随机化，其目的是在于将一切干扰因素分配到各组时，不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响，使其均得到随机化的安排，3. 重复要使样本能代表总体，除用随机抽样方法缩小抽样误差外，重

13、复实验是保证结果可靠的另一基本方法。重复有两个含义：一是实验样本必须够大，二是如果一批试验结果可靠，应经得起重复实验。重复实验是检验科研结果可靠性的唯一方法。(二) 实验设计程序中应考虑的四个问题1. 明确实验目的在充分的调查研究（包括文献资料的查阅、现场情况考察，前人与外域有关经验的借鉴等）基础上确定研究课题、进行实验设计时，首先必须考虑的是明确研究目的，然后围绕这一目的实验。做到有的放矢，目标不可定的太多，否则主次不分，结果一个也弄不清楚。2. 确定实验方法与观察指标常常要根据既定目的，掌握国内外该领域研究动态，结合本单位条件，确定切实可行的实验方法。尽可能采用先进技术与仪器，特别注重将有

14、关现代科学技术成果如免测定技术、电子计算机等用于药理学实验，指标的选择首先要能反映要研究问题的本质，具专一可靠性。如抗高血压药的药理指标为血压，而肾炎病人虽然血压升高亦为常见症状，但更为特异性指标应为肾功能及尿常规等指标3. 选择适当的实验动物基础药理实验对象包括正常动物、麻醉动物及病理模型。既有整体动物，也有离体器官、组织和细胞等。主要根据实验目的、方法、动物的生理特点及指标的要求而定。为了避免动物在实验过程中出现无效反应或反应异常，应根据实验内容选择与人反应近似的动物。如过敏实验宜选豚鼠；平喘实验宜选豚鼠；血压实验可选狗、猫、大白鼠、亦可选家兔；心脏实验可选青蛙、蟾蜍、家兔、豚鼠等，但不宜

15、选大白鼠；呕吐实验选狗、猫、鸽、不可选无呕吐中枢的啮齿类，神经系统实验选猫、狗；离体、在体子宫实验，选大白鼠，亦可选用家兔，肠管实验可选豚鼠、大白鼠、家兔；致畸实验选猴；依赖性实验选猴、狗、大鼠；致癌与抗癌实验选大白鼠、小白鼠、狗；LD50测定，所需数量大，宜选小白鼠；长期毒性实验，多选大白鼠，可选家兔、狗等；热原检查与解热药实验选用家兔。除特殊要求外，动物大小一般选用接近成熟的动物，性别大致雌雄各半，而且一个实验一般要用两种以上的动物，尽量注意啮齿类与非啮齿类均要兼有。4. 重视预备实验预备实验是正式实验前的重要步骤，也是实验设计的实践探索。根据预试情况，还可对原始实验设计作必需的修正，是完

16、善实验设计的一个不可缺少的步骤。预备实验一般解决以下问题： 修正实验样本种类与数量。 检查实验的观测指标是否客观、灵敏与可靠 改进实验方法与熟练实验技术 探索药物剂量大小与反应关系，确定用药剂量 发现值得进一步研究的线索四、实验动物的捉拿法1、小白鼠用右手轻轻抓住尾，放在粗糙面上，轻向后拉，以左手拇指和食指夹住其两耳及头部皮肤，用无名指和小指压住鼠尾将小白鼠完全固定于手中。2、大白鼠以右手或持镊子抓住尾部，左手戴手套防护（有经验者也可不戴），抓紧两耳和头颈部的皮肤，并将鼠固定在左中，右手即可进行操作。3、豚鼠先用手掌以稳准的手法迅速扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，将手张开，用手指握住颈部，或握住

17、身体的四周，再拿起来。怀孕或体重较大的豚鼠，应以另手托其臀部。4、家兔用左手抓住颈背部皮肤（抓的面积越大其吃重点越分散）。将兔提起，以左手托住其臀部，使兔呈座位。5、猫温顺猫可用一只手捉住猫的颈部皮肤，另一只托起四肢部抱起。对凶暴猫，将手慢慢伸入笼内，轻抚猫的背、头、颈部。一只手抓住猫的颈部，取出笼外，另一只手捉住从背到腰部的皮肤捉拿。当猫不许手接触它的皮肤时，可用皮手套或网捉拿。6、狗用一捕狗夹住狗颈，另一人用一粗棉带绑住嘴巴，使其不能咬人。如系驯顺狗，可突然捉住两耳，将前足提高，然后绑嘴巴。绑嘴的方法是将扁带绕上下颌，再作一结，最后将带牵引至头后颈背上打第三结，在此结上须再打一活结以固定之

18、。7、蟾蜍一般由左手握蛙，将蛙的双下肢固定于无名指和小指之间，一上肢固定于食指和中指之间，另一上肢夹于虎口。五、实验动物的给药及取血法1、蟾蜍蛙皮下有数个淋巴囊，注药易吸收，常用腹淋巴囊（见图1），注药时，将蛙四肢固定，使腹部向上，注射针头从蛙大腿上部刺入，经大腿肌层入腹壁肌层，再浅出至腹壁皮下，即是腹淋巴囊。此法可避免药液外漏。注药量0。251。0ml/只。2、小白鼠（1）灌胃（po）：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃针头自口角进入口腔，紧贴上腭插入食道（如图2），如遇阻力，将灌胃针头抽回重插，以防损伤。灌胃量0.10.2ml/10g.（2）皮下注射（sc）：可用腹部、背部、腹股沟皮下，皮肤

19、比较松弛，也可由助手协助。注药量0。10。2ml/10g.（3）肌肉注射（im）：一人抓住小鼠头部皮肤和尾巴，另一人持连4号针头的注射器，将针头刺入后腿外侧肌肉（如图3）。注射量不超过0。1ml.（4）静脉注射（iv）：将小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部，以使血管扩张，自尾部末段刺入，刺入血管后抽针芯可见回血。注射量0.10.2ml/10g。（5）腹腔注射（ip）：将小鼠固定后，从下腹部外侧进针，深度较皮下注射深。注射量0.10.2ml/10g。（6）取血 尾尖取血：使尾部充血后剪去尾尖即可。适小量血样采血。尾静脉取血：用刀切割尾静脉，可取血0.30.5ml。3、大鼠（1）给药：大鼠灌胃、腹腔注射

20、、皮下注射及尾静脉注射与小鼠相似。注药量为小鼠的23倍。静脉注射也可在麻醉下行舌下静脉注射。（2）取血：同小鼠。4、家兔（1）灌胃：一人将兔身固定于腋下，一手固定兔头，另一手将开口器放入兔口。另一人将导尿管从开口器孔插入口内，再慢慢插入食道和胃。为慎重起见，可将胃管外端放入水中，如无气泡，则可证实导尿管在胃内。灌胃量10ml/kg。如用兔寄存定盒，中由一个操作。（2）耳静脉注射：一人固定兔身和兔头，另一人在使兔耳边缘血管扩张后，从静脉末端刺入血管，左手拇指和食指固定针头和兔耳，右手注药（如图4）。注药量2ml/kg，等渗液可达10ml/kg。（3）皮下、肌肉、腹腔注射与鼠相似。注药量分别为0.

21、5、1.0、5.0ml/kg.（4）取血：耳静脉取血，先使兔耳血管扩张，以粗针头刺破或用刀切割血管，使血液流入容器中。心脏取敌国，将兔仰位固定，剪去心前区毛，用碘酒、酒精消毒皮肤。触摸胸骨左缘3、4肋间隙，取心跳最明显处作为穿刺点，然后将针头刺入胸腔，当感受到心脏跳动时，再将针头刺入心脏，即可抽出血液。2公斤兔每次抽血2025ml，饲养二周后可再抽血。5、豚鼠豚鼠腹腔、皮下注射法同鼠为。小量取血可从耳背静脉切开或刺破静脉。需较多血时，在麻醉下暴露一侧颈外静脉取血。心脏取血时，助手固定豚鼠四肢，腹部向上，用5号针头于心尖跳动最明显处刺入。取血量：500g豚鼠每次可取6ml。6、犬（1）腹腔注射：

22、犬被夹住后，用力将犬的颈、头压在地上，提起一侧后肢，将药注入腹腔。（2）静脉注射：可从后肢外侧小隐静脉或前肢皮下头静脉注射。（3）取血：前肢皮下头静脉取血：在前肢脚爪上方背侧剪毛，一人抓紧腿并压迫血管上端，注射者固定静脉后即可刺入血管。后肢小隐静脉取血，该血管从后肢外踝后侧走向外上侧，取血法同前肢皮下头静脉取法。小量取血时可从耳缘血管。六、药理实验中药物的浓度及剂量的换算（一）药量单位药量的基本重量单位是克（g），有时亦用到毫克（mg）、微克（g）、毫微克（ng）及微微克（pg）。换算关系是：g=103 mg=106g药量的基本容量单位是毫升（ml），有时亦用到升（l）及微升（l）。换算关系是

23、：l=103ml=106l。（二）给药容量注射用药前应首先考虑该种动物在特定注射途径所能允许的最大容量（ml），只有确定容量之后才能决定溶液配成多大浓度合适。通常，动物血容量约占体重的1/3左右，静脉注射药液容量过大，可影响到循环系统正常功能，故静脉注射容量最好在体重的1/100以下，静脉外注射（皮下、肌肉及腹腔）容量最好在体重的1/40以下。如一只20克体重的小白鼠，尾静脉注射不宜超过0.2 ml；肌肉、皮下、腹腔等部位注射不宜超过0.5 ml。（三）药物浓度药物浓度是指定量液体或固体制剂中所含药物的分量，常用的液体制剂有下列几种表示方法：1、百分浓度以每一百份溶液中所含药物的份数来表示，简

24、写成%。（1）重量/容量（W/V）法：表示每100ml溶液中含有药物的克数，如5%葡萄糖，是指100ml溶液中含有5克葡萄糖，不加特别说明时的药物%浓度即指这种方法。（2）容量/容量（V/V法）：适用于液体药物的配制，表示100ml溶液中含有药物的ml数，如75%乙醇即100ml中含无水乙醇75ml，换言之，用75ml无水乙醇加蒸馏水至100ml即可制得75%乙醇。2、比例浓度用来表示稀溶液的浓度，如1：10000肾上腺素溶液即指0.01%肾上腺素（1ml中含0.1mg肾上腺素。3、摩尔/升（mol/l）浓度是指一升溶液中所含溶质的克分子数，称为该溶液的摩尔/升浓度，如0.1mol/l NaC

25、l表示1升溶液中含有0.1克分子即5.844gNaCl（NaCl分子量为58.44）。4、剂量换算动物实验所用的药物剂量，一般是按mg/kg（有时也用g/kg）计算，给药时需从已知药物浓度换算成相当于每kg体重（为方便起见，大鼠、豚鼠也可按每100g，小鼠、蟾蜍可按每10g体重）应该注射的药液量（ml）。有时则需根据药物剂量和给药容量计算出合适的药物浓度；有时还须进行浓度之间换算（如百分浓度和克分子浓度间）以便进行分析和计算。（1）由药物剂量mg/kg以及药液百分浓度换算成每kg体重注射药量（ml），进而计算出每只动物应该注射多少ml。例：小白鼠体重22g，腹腔注射盐酸吗啡10mg/kg，药物

26、浓度 0.1%，应该注射多少ml？计算方法：0.1%的盐酸吗啡溶液每ml含药物 1mg， 10mg/kg相当于 10ml/kg，动物22g体重换算成 0.022kg，10mg/kg0.022kg =0.22ml。为计算方便，上述10ml/kg首先换算成0.1ml/10g，小白鼠体重改写成 2.210g ，0.1ml/10g2.210g=0.22ml。（2）由药物剂量mg/kg和设定的药液容量ml/kg，计算应该配制的药物浓度。例：家兔静脉注射盐酸吗啡10mg/kg，注射容量1ml/kg，应该配制的药液浓度是多少？计算方法：10mg/kg相当于1ml/kg，1ml药液应该含10mg盐酸吗啡，1：

27、10=100：X，X=100（mg）=1g，故配成的浓度100ml含1g，即1%的盐酸吗啡。3、习题：（1）给体重2.2kg的兔注射30mg/kg的尼可刹米，注射浓度为10%，应注射多少毫升？（2）大白鼠口服双氢氯塞嗪剂量为5mg/kg，规定灌胃药液量为2.5ml/100g，应配制的浓度是多少？（3）硫喷妥钠注射剂每支0.5g兔体重1.8kg，静脉注射硫喷妥钠剂量为10mg/kg，容量为1ml/kg，该药0.5g应配成多少毫升？注射药量是多少毫升？实验一 给药途径不同对药物作用的影响【目的】 观察以不同的给药途径给予同剂量尼可刹米时，所引起药理作用的差异。【材料】 小白鼠2只 鼠笼 天平 注射

28、器 小鼠灌胃针头 注射针头 2%尼可刹米溶液【方法】取性别相同，体重相近的小白鼠2只，以甲、乙编号，分别称重，观察各鼠的一般情况，依次给药。甲鼠以灌胃法给予尼可刹米4mg/10g（2%溶液0.2ml/10g)。乙鼠以腹腔注射给予尼可刹米4mg/10g（2%溶液0.2ml/10g)。每次给药后立即记下当时时间。密切观察小白鼠的反应。动物首次出现惊厥时，也应立即记下时间。从给药到首次出现惊厥的一般时间为药物作用的潜伏期。比较2只小白鼠结果之差别。【报告要点】鼠号性别体重尼可刹米剂量给药途径作用潜伏期最后结果 注：最后结果栏记载是否发生死亡及给药到死亡相隔时间等。【讨论题】不同给药途径在哪些情况下可

29、使药物的作用产生量的差异？在哪些情况下又可使药物产生质的不同？实验二 肝功能对药物作用的影响【目的】 观察小白鼠肝功能损伤对硫喷妥钠作用的影响。【材料】 器材：天平 1ml注射器 鼠笼 药品：0.4%硫喷妥钠溶液,10%四氯化碳,苦味酸溶液 动物:小白鼠【方法】 1、试验前24小时用四氯化碳损伤小鼠肝功能，即以10%四氯化碳0.2ml/10g皮下注射(由教研室预先注射好)。 2、取体重相近的正常小白鼠及肝功能已损伤的小白鼠各一只，称体重，以苦味酸溶液作好标记。并试其翻正反射是否存在。 （将小白鼠仰卧试验台上，若能恢复正常体位，为翻正反射存在，否则为翻正反射消失）。 3、分别由腹腔注射硫喷妥钠溶

30、液40mg/kg（0.4溶液0.1ml/10g）,记录并比较小白鼠麻醉作用维持时间有何差别?麻醉作用以翻正反射消失为指标.麻醉作用维持时间由麻醉醒转时间减去麻醉开始时间而得。 4、将小白鼠处死（用颈椎脱臼法），剖视肝脏观察形态上改变，并注意肝脏形态改变与麻醉作用维持时间的关系。【注意事项】 如果已下课，小白鼠仍未从麻醉状态中醒转，其麻醉作用维持时间则记作大于多少分钟？【报告要点】组别麻醉开始时间（分）麻醉维持时间（分）正常组肝损组实验三 普鲁卡因半数致死量（LD50）的测定和计算【目的】通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程。【材料】 1、器材：鼠笼，天平，1ml注射器。 2、药品

31、：2%盐酸普鲁卡因溶液，苦味酸溶液。 3、动物：小鼠（体重1725克，雌雄均可，应注明性别）。【方法和步骤】 1、探索剂量范围：取小鼠8-10只，以2只为一组，选择剂量间距较大的一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在105150mg/kg范围内）。本步骤可由教研室预先进行。 2、正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1：0.7或1：0.8），各剂量组动物数为10只，分别用苦味酸标记。动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物

32、分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。 实验以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组（10只小鼠），或每组各作每一剂量组的2只小鼠，务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，避免非药物所致的死亡，得到较理想的结果。 3、观察试验结果：给药后即观察小鼠活动改变情况和死亡数，存活者一般都在15-20分钟内恢复常态，故观察30分钟内的死亡率。 4、计算LD50及其95%可信限： LD50计算方法有多种，这里介绍最常用的加权

33、直线回归法（Bliss法）。此法虽计算步骤稍繁，但结果较精确，实际应用时可借助于计算机。 首先，用较大的剂量间距确定致死剂量的范围，进而在此范围内设定若干剂量组，剂量按等比方式设计，相邻两个剂量间距比例在0.65-0.85之间，给药后观察7-14天内动物一般情况和死亡数，根据死亡率计算LD50。请注意：若死亡率为100%和0%的数据，其机率单位为+和-，数据可列于表格中，但不能用于计算。现用下述例子具体说明计算方法。 例：将某批中药厚朴注射液腹腔注射于小鼠，三天内的死亡率如下： 剂量（g/kg）： 4.255.316.648.30 死亡率（死亡数/试验动物数）：1/103/105/109/10

34、 求LD50及其95%可信限，计算步骤如下： （1）列计算用表 将各项数据填入表16-1，机率单位和权重系数分别查附表A和附表B。 （2）计算LD50logD与机率单位之间有线性关系，因此将logD作为X，机率单位作为Y，用计算器作直线回归。 LD50的对数值与机率单位5相对应，故输入5（Y值），连续按“SHIFT”和“)”键后显示的X值，即为LD50的对数（称为m ），取其反对数，就是LD50。在此例，结果为：m=logLD50=0.7891LD50=log-1m=6.1532g/kg小鼠腹腔注射厚朴注射液LD50计算表剂量DlogDXX2n死亡率%机率单位Y权重系数权重*WWXWX24.2

35、50.62840.394910103.720.3433.432.15541.35455.310.72510.525810304.480.5765.764.17663.02846.460.82220.676010505.000.6376.375.23744.30628.300.91910.844710906.280.3433.433.15252.8975WWXWX218.9914.721911.5866* 权重权重系数各组动物数(n)(3)计算LD50的95%可信限由于实验求得的LD50存在抽样误差,因此须按统计学方法确定LD50值95%可能出现的范围(95%可信限)。在此例，由于n数相等。计算

36、方法如下：m1.96Sm(Sm为m的标准误)m=logLD50=0.7891(见上述计算步骤)Sm2=1/b2(m-X)2/W(X-X )2+1/W其中W(X-X)2=WX2-(WX)2/W=0.1735b=8.4605(从直线回归计算中得出)X=WX/W=0.7752固而Sm2=0.01397(0.7891-0.7752)2/0.1735+0.05266=0.0007512Sm=Sm2=0.0007512=0.02741m1.96Sm=0.78910.05372=0.73538-0.84282分别取反对数,取LD50的95%可信限:5.4373-6.9634g/kg(4) LD50及其95%

37、可信限:6.1532g/kg(5.4373-6.9634 g/kg)要求：1、报告实验日期，药品批号，生产厂名，小鼠的性别和体重范围，给药途径，给药后的中毒症状；并将剂量（单位体重所用药量，mg/kg），死亡率等LD50的计算数据归纳简明的表格（参照表1），报告LD50及其95%可信限主要计算过程和计算结果。2、如实验失败或结果不理想，可按同样要求对下述练习题中的一个进行计算和和报告。练习题1、将某种中药制剂给小白鼠灌胃后，48小时内各剂量组的死亡数如下，求该药的LD50及其95%可信限。灌胃剂量（g/kg）： 5.126.408.0010.012.5死亡数/实验动物数:1/102/104/1

38、07/109/102、小鼠皮下注射有机磷制剂对硫磷(1605)1.8mg/kg,立即腹腔注射不同剂量的氯磷定进行抢救,观察生存率(即氯磷定的有效率)如下:氯磷定剂量（mg/kg）： 12.816.020.0生存数/实验动物数: 1/106/109/10 求氯磷定的ED50及其95%可信限:如果氯磷定的LD50为173.6 mg/kg,那么它的治疗指数(TI)为多少?附表A 分率与机率单位对照表百分率01234567890-2.672.953.123.253.363.453.523.593.66103.723.773.833.873.923.964.014.054.084.12204.164.1

39、94.234.264.294.334.364.394.424.45304.484.504.534.564.594.614.644.674.694.72404.754.774.804.824.854.874.904.924.954.97505.005.035.055.085.105.135.155.185.205.23605.255.285.315.335.365.395.415.445.475.50705.525.555.585.615.645.675.715.745.775.81805.845.885.925.955.996.046.086.136.186.23906.286.346.416

40、.486.556.646.756.887.057.33附表B 机率单位与权重系数对照表机率单位权重系数机率单位权重系数机率单位权重系数机率单位权重系数1.10.000823.10.154365.10.634317.10.110261.20.001183.20.179945.20.627427.20.091791.30.001673.30.207745.30.616097.30.075641.40.002353.40.237535.40.600527.40.061681.50.003273.50.269075.50.580997.50.049791.60.004513.60.301995.60.

41、557887.60.039771.70.006143.70.335895.70.531597.70.031431.80.008283.80.370315.80.502607.80.024581.90.011053.90.404745.90.471447.90.019032.00.014574.00.438636.00.438638.00.014572.10.019034.10.471446.10.404748.10.011042.20.024584.20.502606.20.370318.20.008282.30.031434.30.531596.30.335898.30.006142.40.

42、039774.40.557886.40.301998.40.004512.50.049794.50.580996.50.269078.50.003272.60.061684.60.600526.60.237538.60.002352.70.075644.70.616096.70.207748.70.001672.80.091794.80.627426.80.179948.80.001182.90.110264.90.634316.90.154368.90.000823.00.131125.00.636627.00.131129.00.00056实验四 阿托品对平滑肌的抑制作用【目的】观察阿托品

43、对小白鼠平滑肌蠕动的抑制作用【材料】 器材：剪刀、镊子、天平、蛙板、棉花 药品：0.05%硫酸阿托品溶液、生理盐水、墨汁 动物：小白鼠2只【方法】 1、取已饥饿12-24小时体重相近的小白鼠2只，甲鼠以0.05%硫酸阿托品溶液0.1ml/10g灌胃，乙鼠以0.2ml生理盐水灌胃。15分钟后，甲、乙两鼠各给予0.2ml墨汁灌胃。 2、经15分钟后，分别将两鼠以颈椎脱臼法处死。立即剖腹。将胃幽门为起点，量出墨汁流动的距离，以及小肠的总长度。然后求出二鼠墨汁在小肠内移动距离占小肠总长度的百分比，比较两鼠有何不同，此结果说明什么问题？墨汁流动距离小肠总长度 100%=【注意】 1、黑汁必须准确； 2、

44、灌墨法和处死的间隔时间必须正确； 3、本实验中墨汁也可改用1%卡红溶液。实验五 传出神经药对瞳孔的影响【目的】 1、观察抗胆碱药及拟肾上腺素药对瞳孔的作用并分析其作用机制。 2、练习家兔的捉拿、滴眼及量瞳方法。【材料】 器材：剪刀、测瞳器、注射器（1ml）、兔固定箱 药品：0.5%硫酸阿托品溶液、1%新福林溶液 动物：家兔1只，体重2kg3kg【方法】(1)取健康家兔1只,标记后放入兔固定箱内，剪去眼睫毛，在自然光线下测量并记录两侧正常瞳孔直径（mm）及对光反射，然后按下列顺序给药：左眼0.5%硫酸阿托品右眼1%新福林滴药时将下眼睑拉成杯状，并用手指按住鼻泪管，使其在眼睑内保留1min，然后将手轻轻放开，任其自然溢出。（2）滴药15min后，在同样强度的光线下，再分别测量并记录各眼瞳孔大小和对光反射。【报告要点】将实验结果整理记入表内。眼药物瞳孔直径（mm）对光反射给药前给药后给药前给药后左硫酸阿托品右