土炒白术HPLC指纹图谱研究.pdf

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1、2016 年 11 月山东中医药大学学报第 40 卷第 6 期 白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎，具有健脾益气、燥湿利尿、止汗、 安胎等功效，用于治疗食少便溏、气虚自汗、痰饮、水 肿等症1。 白术始载于神农本草经，有生用、炒焦、 土炒和麸炒等多种饮片规格入药用2。 现在土炒白 术的临床应用越来越广泛，国内外对其展开了较多的 研究。 白术经土炒炮制后，增强了健脾止泻之功3， 但未见关于白术土炒前后化学成分确切变化的研究。 本研究在土炒白术工艺研究的基础上，采用HPLC法 建立了土炒白术的特征图谱，并对所得图谱进行解 析，比较白术炮制前后

2、指纹图谱的不同特点，建立土 炒白术特征图谱的指标参数评判标准，为全面控制 土炒白术的质量提供方法。 1仪器和试药 1.1仪器Waters2695高 效 液 相 色 谱 仪 ，Waters 2998二极管阵列检测器，Empower色谱工作站（美国 沃特世公司）；AB135-S电子天平（十万分之一，瑞士 METTLER TOLEDO）；KQ3200型超声波清洗器（昆 山市超声仪器有限公司）。 1.2试剂与药材所用白术药材经山西中医学院 中药鉴定教研室裴香萍副教授鉴定，为菊科植物白 术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎，产 地及来源见表1。 白术内酯对照品（M

3、UST-130120 05，成都思曼特生物科技有限公司），白术内酯对 照品（MUST-13012006，成都思曼特生物科技有限公 司），白术内酯对照品（MUST-13012007，成都思曼 特生物科技有限公司），甲醇（色谱纯，美国GRACE 公司生产），娃哈哈纯净水。 2溶液的制备 2.1混合对照品溶液的制备取白术内酯对照 品和白术内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制 成每1 mL含白术内酯 0.036 mg和白术内酯 土炒白术 HPLC 指纹图谱研究 李慧峰 1，荆 然 1 ，程艳刚 2，裴妙荣1 （1.山西中医学院，山西 晋中030619；2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040）

4、摘要 目的：建立土炒白术的HPLC指纹图谱，为全面控制土炒白术的质量提供方法。 方法：采用Brava BDS C18（250 mm 4.6 mm，5 m）色谱柱；甲醇（A）-水（B）梯度洗脱；流速：1.0 mLmin- 1；检测波长：220 nm，建立土炒白术的HPLC指纹图谱。 结果： 标定了土炒白术中的14个共有峰，非共有峰面积小于10%；10批药材成分的相似度较高，RSD为0.902% 0.997%。 结论：该方 法简便，重复性好，特征性强，可用于土炒白术药材的鉴别和质量控制。 关键词 土炒白术；HPLC；指纹图谱；5-羟甲基糠醛；质量标准 中图分类号R286.0文献标志码A文章编号10

5、07-659X（2016）06-0570-03 HPLC Fingerprint for Soil-processed Atractylodis Macrocephalae Rhizoma LI Huifeng1，JING Ran1，CHENG Yangang2，PEI Miaorong1 （1.Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Jinzhong 030619，China；2.Heilongjiang University of Chi- nese Medicine，Haerbin 150040，China） AbstractObje

6、ctive：To establish the fingerprints and provide the method for the quality control of soil-pro- cessed Atractylodis macrocephalae Rhizoma by HPLC. Methods：The separation was performed on Brava BDS C18column（250 mm4.6 mm，5 m），with methanol（A）-water（B）as mobile phase by gradient elution，the flow rate

7、was 1.0 mLmin- 1，the detection wavelength was 220 nm. Results：Total 14 common peaks were selected in soil-processed Atractylodis macrocephalae Rhizoma，the non-common peak area was less than 10%，the ten batches of herbs were with very high similarity，RSD was 0.902%0.997%. Conclusion：The method was co

8、nvenient and with high repeatability and characteristic，could be used for the identification and quality control of soil-processed Atractylodis macrocephalae Rhizoma. Key wordssoil-processed Atractylodis macrocephalae Rhizoma；HPLC；fingerprint；5-hydroxymethylfurfural； quality standard 收稿日期2015-12-05

9、基金项目 山西省中药材、中药饮片地方标准研究项目（编号： 2013003B） 作者简介 李慧峰（1985-），男，山西阳泉人，硕士研究生，助教， 研究方向：中药及复方药效物质基础及质量控制研究。Tel：1393451 9529；E-mail：。 通信作者 裴妙荣，博士生导师，教授，研究方向：中药复方化 学物质基础研究。Tel：0351-3179901；E-mai：。 第40卷第6期山东中医药大学学报Vol40，No6 2016年11月JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCMNov.2016 570 DOI:10.16294/ki.1007-659x.2016.

10、06.021 2016 年 11 月第 40 卷第 6 期 表1白术样品来源 编号产地日期批号 1浙江2013- 08- 2720130827 2湖南2013- 04- 2320130423 .3河北2013- 08- 1120130811 4安徽（亳州）2013- 09- 1020130910 5安徽（亳州）2013- 09- 0720130907 6浙江2013- 10- 2020131020 7江苏2013- 10- 1520131015 8浙江2013- 11- 1020131110 9浙江2013- 11- 2020131120 10江苏2013- 12- 1020131210 0.

11、084 mg的溶液，即得。 2.2供试品溶液的制备取本品粉末 （过三号筛） 约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定重量，超声处理（功率240 W，频率45 Hz） 20 min，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 3土炒白术指纹图谱检测方法的选择 色谱柱为Brava BDS C18（250mm4.6mm，5m）； 流动相为甲醇（A）-水（B），梯度洗脱：015 min， 0.0%5.0%A；1530 min，5.0%45.0%A；30 90 min，45.0% 95.0% A；9095 min，95.0% 0.0% A； 100

12、 min，0.0% A；流速：1.0 mLmin- 1；柱温：30 ；检 测波长：220 nm。 4方法学考察 4.1精密度试验精密吸取1号供试品溶液10 L， 重复进样6次，记录指纹图谱，白术内酯为参比 峰，计算指纹图谱中各峰的相对保留时间及相对峰 面积。 结果：各主要色谱峰相对保留时间的RSD为 0.10% 0.51% ，说明仪器精密度良好；各主要色谱峰 的相对峰面积RSD为0.50% 2.84%。 4.2稳定性试验精密吸取1号供试品溶液10 L， 分别于0，200，400，600，800，1 000，1 200 min进样， 记录指纹图谱。 以白术内酯为参比峰，计算指纹 图谱中各峰的相对

13、保留时间及相对峰面积。 结果： 各色谱峰相对保留时间的RSD为0.02% 0.83% ，表 明供试品溶液在1 200 min内稳定；各主要色谱峰相 对峰面积的RSD为0.76% 3.30%。 4.3重复性试验取1号土炒白术6份，按“2.2”项 下制备样品，依次进样，记录指纹图谱。 以白术内酯 为参比峰，计算指纹图谱中各峰的相对保留时间 及相对峰面积。 结果：各色谱峰的相对保留时间RSD 为0.07% 1.31% ，表明该试验方法的重复性较好； 各主要色谱峰相对峰面积的RSD为1.32% 7.77%。 5特征图谱的建立及相似度分析 5.1参照峰的选择在同一色谱条件下对白术内 酯、白术内酯及供试液

14、进样，通过指纹图谱进行 对比，峰5为白术内酯，峰6为白术内酯，见图 1、图2。 5.2特征图谱的建立取10批土炒白术药材样 品，分别精密称取2 g，按照“2.2”项下供试品溶液制 备方法制备样品，分别精密吸取10 L，注入液相色 谱仪，记录色谱图。 分析并比较10批次供试品溶液 的峰数、峰值（积分值）和峰位（相对保留时间）等相 关参数，以白术内酯峰为参照峰（相对保留时间 RSD= 0.13% ，相对峰面积RSD= 0.00%），计算指纹图 谱中各峰的相对保留时间及相对峰面积。 5.3相似度评价用国家药典委员会中药色谱指 纹图谱相似度评价系统2004A版对10批样品的 结果进行自动匹配，匹配结果

15、见图3；以软件生成的 对照指纹图谱（图4）对10批药材指纹图谱的相似 度进行评价。 结果：10批药材中成分的相似度较高， RSD为0.902% 0.997%。 6讨论 实验考察了乙腈-水和甲醇-水两种溶剂系统 梯度洗脱，比较两种条件下的分离效果和出峰数，甲 醇-水溶剂系统分离效果较好，各色谱峰之间基本 达到分离，且运行时间适中，故选择甲醇-水梯度 洗脱作为流动相。 土炒白术所含化学成分在200 400 nm范围有较强的紫外吸收，实验采用二极管阵 列检测器考察了220 nm、254 nm和278 nm处的图 谱特征。 结果表明，220 nm处的图谱特征性强，出峰 数目较多，分离效果较好，故选择2

16、20 nm为土炒白 术药材指纹图谱的检测波长。 对同一批土炒白术与生白术在相同条件下处 理，比较发现土炒白术明显比生白术色图谱多出一 个色谱峰（见图5、图6），与崔小兵4对麸炒白术的 研究结果一致，经对照品比对，确定该峰为5-羟甲 基糠醛（5-HMF）的色谱峰，其在土炒白术中的含量 图2供试品HPLC色谱图 5白术内酯6白术内酯 图1白术内酯HPLC色谱图 李慧峰等：土炒白术HPLC指纹图谱研究 571 2016 年 11 月山东中医药大学学报第 40 卷第 6 期 及药理作用有待进一步研究。 近几年对白术及其炮制品的研究大多集中在白 术内酯、，本课题组研究发现，白术中白术内 酯、的含量很低，

17、经土炒炮制后，其中的白术 内酯类成分并无明显的变化（增加或减少）。 且通过 白术不同批次饮片的观察研究发现，表观较好、质优 的白术饮片中的白术内酯类成分含量不一定高于质 差的白术饮片。 对10批不同产地土炒白术进行分析发现，不同 产地土炒白术色谱图中各色谱峰的相对保留时间 RSD相差不大，但相对峰面积相差较大，其原因可能 是不同产地的气候以及白术的生长年限长短对药材 中化学成分含量造成影响。 本实验通过收集不同产地的土炒白术，改进条 件，建立了土炒白术的指纹图谱，结果表明所建方法 稳定性高、精密度好、专属性强，可以为土炒白术的 质量控制提供参考。 参考文献 1 国家药典委员会.中华人民共和国药典S.一部.北京：中国 医药科技出版社，2010：348. 2 于永明，贾天柱，梁武学，等.白术炮制的历史沿革J.辽宁中 医学院学报，2005（6）：635-636. 3 李庆.白术的不同炮制法对临床作用的影响J.中国医药指 南，2013，19：302-303. 4 崔小兵， 李伟，文红梅，等. UPLC法测定白术不同炮制品中5- 羟甲基糠醛及糠醛的含量J.南京中医药大学学报，2012，28 （5）：477-478. 图4HPLC对照指纹图谱 t/min t/min 图310批土炒白术HPLC指纹图谱 图5生白术HPLC色谱图 t/min 图6土炒白术HPLC色谱图 t/min 572