蔬菜中亚硝酸盐含量测定.doc

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1、精品文档，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除菠菜叶中亚硝酸盐的测定作者姓名: 董素琴、杨玫、熊晔卿通讯地址： 北京市昌平区朱辛庄北农路7号电子邮件地址: dongsuqinohyeah1 实验思路在肉类制品中为了保持其鲜红的色泽，通常使用发色剂，如硝酸盐或亚硝酸盐。亚硝酸盐在酸性条件下产生的游离亚硝酸，与肉中的肌红蛋白结合，生成亚硝基肌红蛋白，呈现稳定的红色化合物，致使肉呈鲜艳的亮红色，致使食品具有独特风味。然而我们日常生活中所食用的菠菜中也含有亚硝酸盐，但是亚硝酸盐非人体所必需，摄入过多对人体健康产生危害。而且亚硝酸盐又是致癌性氮亚硝基化合物的前体物，研究证明人体内和事物中亚硝酸盐只要与

2、酰胺类同时存在，就可能形成致癌性的亚硝基化合物。因此，严格控制亚硝酸盐的摄入量十分重要。亚硝酸钠的ADI值为每千克体重0 - 0.06 mg。日常食用的菠菜中亚硝酸盐的含量是否在安全范围内呢？本实验我们分别采用标准曲线法和标准加入法来测定。2 实验原理 试样经沉淀蛋白质后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，于波长550 nm处比色，与标准比较定量。3 试剂3.1 亚铁氰化钾溶液：称取l06.0 g亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O，用水溶解，并稀释至l000 mL。3.2 乙酸锌溶液：称取220.0 g乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O，加30

3、 mL冰乙酸溶于水，并稀释至l000 mL。3.3 饱和硼砂溶液：称取5.0 g硼酸钠(Na2B4O710H2O)，溶于l00 mL热水中，冷却后备用。3.4 对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于l00 mL 20盐酸中。置棕色瓶中混匀，避光保存。3.5 盐酸萘乙二胺溶液(2 g/L)：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶解于l00 mL水中，混匀后。置棕色瓶中，避光保存。3.6 亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.1000 g于硅胶干燥器中干燥24 h的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于200 g的亚硝酸钠。3.7 亚硝酸钠标

4、准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 mL置于200 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当干5.0 g亚硝酸钠。3.8 氯化铵缓冲溶液pH 9.6-9.7：1L容量瓶中加入500 mL水，准确加入20.0 mL盐酸溶液，摇匀。准确加入50 mL氨水，用水稀释至刻度。4 仪器4.1 沸水浴4.2 分光光度计4.3 分析天平5 分析步骤5.1 试样处理准确称取10.0000 g菠菜叶，研磨成匀浆，置于50 mL烧杯中，加12.5 mL硼砂饱和液，搅拌均匀，以70左右的水约300 mL将试样洗入500 mL容量瓶中，于沸水浴中加热l5 min，取出后冷却至室温，然后一面转动，一面

5、加入5 mL铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置0.5 h，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL。过滤后在所得滤液中加入少许活性炭进行脱色，得澄清滤液。5.2 标准曲线法 吸取0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、2、4、6、8、10 g亚硝酸钠)，分别置于25 mL带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5 mL缓冲溶液，2 mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)，混匀，静置35 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液(2 g/L)，加水至刻度，混匀，l5 min，以1号管作为参比溶液，调节分光光度

6、计于波长550 nm处测吸光度，绘制标准曲线。同时各取10mL样液于三支比色管中，加入4.5mL缓冲溶液，2mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)，混匀，静置35 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺酸萘乙二胺溶液(2 g/L)，加水至刻度，混匀，l5 min，以1号管作为参比溶液，调节分光光度计于波长550 nm处测吸光度。即样液平行实验三次。5.3标准加入法吸取10 mL上述样液于6支25 mL具塞比色管中，另吸取0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、2、4、6、8、10 g亚硝酸钠)，分别置于25 mL带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5 mL缓冲溶液，2 mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)，混匀，静置35 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺酸萘乙二胺溶液(2 g/L)，加水至刻度，混匀，l5 min，调节分光光度计于波长550 nm处测吸光度，绘制曲线。6 实验曲线绘制7结果计算式中：X一一试样中亚硝酸盐的含量，mg/kg；m一一试样质量，g；A一一测定用样液中亚硝酸盐的质量，g；V1一一试样处理液总体积，mLV2一一测定用样液体积，mL计算结果保留两位有效数字。8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。参考文献食品分析与感官评定【精品文档】第 2 页