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1、实验三、实验四 DNA的定性鉴定 Feulgen反应 及DNA与RNA区分染色法 一、实验目的与原理 目的:1.学习Feulgen反应鉴定细胞内DNA的基本原理和方法; 2.学习DNA和RNA的区分染色法,了解DNA和RNA在细胞核中的存在和分布。 原理:细胞核中的染色质主要由脱氧核糖核酸(DNA)所组成.DNA系核苷酸的多聚体,核苷酸是由碱基、脱氧核糖和磷酸所组成,当细胞经60、1mol/L HCl处理后,破坏核内DNA链上的嘌呤碱基与脱氧核糖之间的糖苷键,嘌呤脱下,在C1位上形成醛基。醛基将无色的Feulgen试剂(主要成分是碱性品红,它在与亚硫酸作用时由醌型变为苯型成为无色的N-5磺酸亚
2、酸碱性品红,即Feulgen 试剂的主要成分)恢复为醌型结构,出现紫红色,所以,凡是有DNA存在的部位就呈现紫红色的阳性反应。 染色质主要由DNA组成,而核仁主要成分是RNA。由于DNA和RNA在组成及结构上存在一定差别,因此,它们对不同的染料则具有不同的显色反应。Unna试剂(甲基绿-焦宁染色液)能分别与DNA和RNA结合而呈现不同颜色,即Brachet反应。甲基绿使DNA染成绿色,焦宁把核仁和细胞质中的RNA染成不同程度的红色。这样,从细胞不同的染色结果来证明和鉴定DNA和RNA的存在和分布。,二、实验材料与试剂 1.材料:洋葱鳞茎内表皮、蚕豆根尖 2.试剂: Schiff试剂、 Unna
3、试剂、1mol/L HCl、 SO2溶液 三、实验内容与操作 1.DNA鉴定:取蚕豆根尖,放入小烧杯中,加入1mol/L HCl溶液浸没,置60中水解10min,弃溶液后,加入Schiff 试剂浸没,置暗处染色15min ,SO2溶液浸洗3min,水 洗3min,取一小块置于载玻片上,加盖玻片后显微观察。(设一对照组) 2. DNA与RNA区分染色:撕取洋葱鳞茎内表皮一小块置于载玻片上加1滴Unna试剂染液,染色20min 流水冲洗后,吸水纸吸去水分加盖玻片,显微观察。 四、实验报告 1. 绘图示洋葱鳞茎内表皮细胞经Schiff试剂染色后,细胞中DNA存在的部位; 2. 绘图示洋葱鳞茎内表皮细胞经Unna试剂染色后,细胞中DNA和RNA的分布。,