色谱定性定量分析方法ppt课件.ppt

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1、China Pharmaceutical University 色谱定性定量分析方法色谱定性定量分析方法我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物色谱分析方法验证色谱分析方法验证色谱定量分析方法色谱定量分析方法联用技术定性方法联用技术定性方法色谱定性分析方法色谱定性分析方法我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物一、色谱定性分析方法一、色谱定性分析方法 保留时间保留时间 tr相对保留时间相对保留时间 RRT

2、，t/tr相对保留值相对保留值 , (t-t0)/(tr -t0）保留指数保留指数 I 我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 色色 谱谱 高分离能力，但高分离能力，但鉴别结构的能力较弱。鉴别结构的能力较弱。 光光 谱谱 能提供丰富的能提供丰富的结构信息，但是对分结构信息，但是对分析物纯度较高。析物纯度较高。二、色谱二、色谱-光谱联用技术定性光谱联用技术定性广泛用于药物中的杂质、体内外代谢产物的结构鉴定广泛用于药物中的杂质、体内外代谢产物的结构鉴定我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它

3、放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物气相色谱气相色谱-质谱联用质谱联用多用于分离易挥多用于分离易挥发、热稳定、极发、热稳定、极性小的化合物性小的化合物GC-MS：采用：采用EI离子源。离子源。EI：获得分子离子峰及：获得分子离子峰及丰富的分子结构信息；丰富的分子结构信息；我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物分离对象较广分离对象较广LC-MS：采用采用API 离子源离子源;一级质谱获得分子量信息；一级质谱获得分子量信息；高裂解电压（高裂解电压（CI

4、D）或二级）或二级质谱（质谱（MS/MS）获得分子结）获得分子结构信息。构信息。液相色谱液相色谱-质谱联用质谱联用我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物例：盐酸乙哌立松片主要降解产物的定性鉴别例：盐酸乙哌立松片主要降解产物的定性鉴别 CH3CH2COCHCH2CH3N.HCl我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物鉴定要点：鉴定要点：1、利用、利用LC-UV选择最佳选择最佳LC分离条件，并确定主分离条件

5、，并确定主峰与降解产物的峰位；峰与降解产物的峰位；供试品溶液的供试品溶液的LC-UV图图 我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物2、选择合适的离子源，利用、选择合适的离子源，利用LC-MS获得杂质的获得杂质的准准分子离子峰分子离子峰。 LC-ESI-MS的的 总离子流色谱图总离子流色谱图 LC-APCI-MS的的 总离子流色谱图总离子流色谱图 我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物3. 获得降解产物准

6、分子离子峰的获得降解产物准分子离子峰的裂解信息裂解信息。方式一：在方式一：在APCI条件下采用条件下采用较高的较高的CID电压或二电压或二级质谱级质谱裂解裂解m/z 175.3，获得碎片信息；，获得碎片信息；方式二：在方式二：在GC-MS(EI)质谱获得分子离子峰及其质谱获得分子离子峰及其裂解途径；裂解途径；我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物4、利用原药的质谱裂解途径确定降解产物的可能、利用原药的质谱裂解途径确定降解产物的可能结构；结构；CH3CH2COCCH3CH2杂质杂质YJ的结构的结构我

7、吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物APCIEI我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物联用技术定性鉴定规律联用技术定性鉴定规律1、分析物质结构，确定色谱分离模式；、分析物质结构，确定色谱分离模式；2、以常用检测器（、以常用检测器（GC:FID/LC:UV）为手段，）为手段，优化色谱分离条件，确定待鉴定组份峰位；优化色谱分离条件，确定待鉴定组份峰位；我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在

8、这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物3、根据化合物结构，选用合适的光谱技术鉴定；、根据化合物结构，选用合适的光谱技术鉴定；4、依据光谱信息进行结构鉴定：、依据光谱信息进行结构鉴定： 根据质谱提供的根据质谱提供的分子量和分子碎片信息分子量和分子碎片信息，结合原，结合原药的光谱信息初步推断未知物结构；药的光谱信息初步推断未知物结构；我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物三、色谱定量分析方法三、色谱定量分析方法1、色谱信号的测量、色谱信号的测量: 色谱峰峰高

9、色谱峰峰高与与峰面积峰面积反映反映检测器对样品的响应值检测器对样品的响应值，定量分析中峰面积更为常用；定量分析中峰面积更为常用；2、定量分析的方法、定量分析的方法 面积归一化法；面积归一化法；外标法；内标法；标准曲线法外标法；内标法；标准曲线法 我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物三、不同检测器的三、不同检测器的色谱信号与物质浓度关系色谱信号与物质浓度关系 FID、ECD、UV检测器的响应（峰面积）与样检测器的响应（峰面积）与样品的浓度呈品的浓度呈线性关系线性关系； ELSD响应的响应的自然对数

10、自然对数与样品的浓度或质量呈与样品的浓度或质量呈线线性关系性关系； 质谱（质谱（MS-ESI）检测器高浓度时的响应与样品）检测器高浓度时的响应与样品的质量可能呈的质量可能呈二次或更复杂的方式二次或更复杂的方式。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物四、色谱分析方法验证四、色谱分析方法验证 目的：目的： 证明所采用的色谱分析方法适合于证明所采用的色谱分析方法适合于相应的检验相应的检验要求要求，判断能否用于药品分析。，判断能否用于药品分析。 效能指标效能指标：评价分析方法的尺度评价分析方法的尺度效能指

11、标包括效能指标包括: : 精密度、准确度、专属性、检测限、定量限、精密度、准确度、专属性、检测限、定量限、线性与范围、耐用性、稳定性、系统适用性等线性与范围、耐用性、稳定性、系统适用性等我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物p 药品质量标准药品质量标准分析方法验证分析方法验证p 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则指导原则p 药物稳定性试验药物稳定性试验指导原则指导原则p 缓释、控释制剂缓释、控释制剂指导原则指导原则不同分析测定方法的要求不同分析测定

12、方法的要求我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 专属性（专属性（specificityspecificity）: : 意义：指有其他成分可能存在情况下，采用的方法指有其他成分可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。能准确测定出被测物的特性。 内容：内容： 药物制剂含量测定时的专属性考察内容：药物制剂含量测定时的专属性考察内容：A、杂质中间体杂质中间体与与主成份主成份的分离情况；的分离情况；B、破坏性试验产生的、破坏性试验产生的降解产物降解产物与主成份的分离情况：与主成份的分离情况：酸

13、、碱、热、氧化、光破坏酸、碱、热、氧化、光破坏C、辅料辅料是否干扰测定。是否干扰测定。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物准确度（准确度（accuracyaccuracy）：）： 意义：测量值与真实值接近的程度。测量值与真实值接近的程度。 药物制剂的含量测定以药物制剂的含量测定以回收率回收率表示。表示。 内容：内容：即通过在空白基质中加入已知量不同浓度的对照即通过在空白基质中加入已知量不同浓度的对照品，比较测定值和加入值确定。品，比较测定值和加入值确定。 一般在期望浓度的一般在期望浓度的80%、

14、100%、120%三个三个水平量，各测定三次，水平量，各测定三次，回收率均值在回收率均值在98-102%。 我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物线性范围（线性范围（linearity range）：）： 意义： 待测物浓度与响应值成待测物浓度与响应值成线性关系线性关系的浓度范围；的浓度范围； 内容：内容：用不同浓度对照品溶液分析测定（至少用不同浓度对照品溶液分析测定（至少5种），以种），以峰面积与浓度进行线性回归。峰面积与浓度进行线性回归。 制剂分析时方法要求制剂分析时方法要求r不小于不小于0.

15、999；生物样品分析要求；生物样品分析要求r不小于不小于0.99，与准确度的要求有关系。与准确度的要求有关系。 注意：注意：与定量方法中标准曲线法的异同。与定量方法中标准曲线法的异同。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物精密度（精密度（precision）：）：意义：同一样品多次测量值之间相互接近的程度。同一样品多次测量值之间相互接近的程度。内容：内容：重复性重复性: 同一实验室同一实验室,同一人多次测定的精密度同一人多次测定的精密度中间精密度中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密

16、度同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度不同实验室，不同人测定的精密度 制剂分析时精密度制剂分析时精密度RSD应不小于应不小于2%。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物检测限和定量限（检测限和定量限（LOD and LOQ）：）：意义： LOD是能检测到的最低量，是能检测到的最低量，S:N=3:1。 LOQ是能定量测定的最低量，是能定量测定的最低量，S:N=10:1。内容：内容： 生物样品分析时定量下限即为标准曲线最低浓度点，生物样品分析时定量下

17、限即为标准曲线最低浓度点，定量上限即位标准曲线最高浓度点。定量上限即位标准曲线最高浓度点。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物稳定性（稳定性（stability）：）：意义： 考察分析样品与试剂在一定时间内稳定性。考察分析样品与试剂在一定时间内稳定性。内容：内容： 根据样品与试剂测定时实际可能所处的环根据样品与试剂测定时实际可能所处的环境进行考察。境进行考察。 我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物

18、耐用性（耐用性（ robustness ）：）：意义：意义： 考察测定条件发生小变动时测定结果的变化。考察测定条件发生小变动时测定结果的变化。内容：内容： 流动相的组成和流动相的组成和pH、商品柱的品牌尺寸、商品柱的品牌尺寸、柱温等柱温等我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物系统适用性（系统适用性（ system suitability test ）：）：意义： 保证分析系统适用于定量分析。保证分析系统适用于定量分析。内容：内容： 条件优化时考察，包括理论塔板数、分离条件优化时考察，包括理论塔板数、分离度、拖尾因子，考察进样精密度。度、拖尾因子，考察进样精密度。