cutoff值-参考区间.doc

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1、区别：参考区间和cutoff值cutoff即临界值，是判断检测结果的标准。检测标本吸光度（OD值）cutoff即判为阳性，cutoff判为阴性。现在一般用s/co，1为阳性，1为阴性。cutoff的设置因试剂厂家不同，方法不同而设置不同，试剂说明书都会有cutoff的设置。厂家cutoff的设置是经过检测大量的标本（包括正常人、病人），通过统计学分析来设置的。由于国产试剂的质量尚需提高，某些实验的阴性对照经常成为定值（因为阴性对照0.05按0.05计算，cutoff0.05某个常数或阴性对照某个常数，如HBsAg的cutoff2.10.05），造成cutoff亦为定值。参考区间： 解释检验结果

2、是正常还是异常的依据区别血清和血浆血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用血清的主要成分：血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、1、2、-

3、球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。主要是：第一:血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难；第二:血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制；第三:不能排除血清中含有易变物质，这被认为是“瓶中恶化”的原

4、因之一。主要作用提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的

5、，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等鉴别方法血清血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各

6、凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。血浆相当于结缔组织的细胞间质。是血液的重要组成分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）。血浆的化学成分中，水分占9092，溶质以血浆蛋白为主血浆是血液的液体成分，血细胞悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆，约占血液总体积的55%。血浆的绝大部分是水（体积的90%），其中溶解的物质主要是血浆蛋白，还包括葡萄糖、无机盐离子、激素以及二氧化碳。血浆的主要

7、功能是运载血细胞，同时也是运输分泌产物的主要媒介。血液成分（加入抗凝剂）将新鲜血液离心，使血细胞沉降，上层淡黄色清液即是血浆。血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。血浆是由抗凝的血液中分离出来的液体，其中含有纤维蛋白原，若向血浆中加入Ca2+ ，血浆会发生再凝固，因此血浆中不含游离的Ca2+。血清是由凝固的血中分离出来的液体，其中已无纤维蛋白原，但含有游离的 Ca2+，若向其中再加入 Ca2+，血清也不会再凝固。此外，血浆与血清的另一个区别是：血清中少了很多的凝血因子，以及多了很多的凝血产物。常见问题保存方法血清应保存在-5至-2。然而，若存放于4时，请勿超过一个月。若您一次无法用

8、完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。如何解冻血清才不会使产品质量受损？将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。避免产生沉淀物1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2至4至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20至37，实验显示非常容易产生沉淀物。2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生3、请勿将血清置于37太久。若在37放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要

9、，可以无须做此步骤。5、若必须做血清的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。何谓热灭活?一般是以56，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。有必要做热灭活吗?实验显示

10、，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 小黑点，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37C环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。购买的时候注意询问厂家是否是已灭活血清。保存注意事项血清的保存应该注意以下几点：(1)需要长期保存的血清必须储存于-20 - 70 低温冰箱中.4冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10

11、%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.(2)热灭活是指56, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20 至 -70 低温冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻

12、轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20进入37解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.(4)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.(5)血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下小黑点:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象小黑点,常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑

13、血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.(6)切勿将血清在37放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量.血清 兽药血清主要成份：蒙古黄芪提取液、抗病毒药、ALR、混感血清。性状：本品为黄棕色澄明液体。功能：本品能诱导机体产生干扰素，调节机体免疫功能，促进抗体形成，刺激巨噬细胞吞噬作用，增强机体对病原微生物的吞噬作用，具有抗炎、抗病毒、抗毒素和提高机体免疫功能等作用。血栓与止血的检测主要用于血小板量与质异常、凝血障碍、血栓前状态和血栓性疾病的临床诊断、鉴别诊断、病情观察、疗效评价和预后判断，也用于抗栓治疗的监测。血栓与止血检查方法繁多，可先选择简单易行的筛选

14、试验，再逐步做确诊试验使用全血和血浆检查，在采集标本时要加入抗凝剂，检查的项目不同，所加的抗凝剂也不同，常用的抗凝剂有：1、草酸盐 常用的有草酸钾、草酸钠和草酸铵,它们溶解后解离的草酸根与标本中的钙离（Ca2+）形成不解离的草酸钙，失去Ca2+的凝血功能而起抗凝作用。常用于临床化学和血液学检查。高浓度钾离子（K+）或钠离子（Na+）易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则可使血细胞膨胀；故测定血细胞比容时用草酸铵和草酸钾或草酸钠两者混合的抗凝剂。若用草酸钾或草酸钠作抗凝剂，与肝素为抗凝剂测定的血细胞比容比较，可降低813，此时的血浆量也相应增加，用它测定血浆中化学成分，结果可低5左右。标本中加入高浓度的

15、草酸盐抗凝剂，可发生溶血和改变血液pH，干扰测定血浆中的钾、钠和氯，还能抑制有些酶的活性。其优点是溶解度好、价廉，2mg草酸盐能抗凝lml血液。2、肝素 是生理性抗凝剂，抗凝机制较为复杂，主要是抑制凝血酶原转变为凝血酶，抑制凝血酶对纤维蛋白原转变为纤维蛋白和稳定血小板的作用。所用制剂多为肝素的钠或钾盐，除有些因肝素能干扰的凝血机制检查项目外，绝大多数的检查都可用肝素作为抗凝剂。20U肝素可抗凝lml血液。3、乙二胺四乙酸(EDTA)盐 常用的是它的钠或钾盐，抗凝作用是与Ca2络合而使 Ca2失去凝血作用。适用范围与草酸盐基本相同。1-2mgEDTA盐可杭凝1ml血液。4、枸橼酸盐 主要为枸橼酸

16、钠；抗凝机制与草酸盐相似。在血中的溶解度低，抗凝力不如前几种抗凝剂。多用于临床血液学检查。5mg枸橼酸盐可抗凝1ml血液。5、氟化钠 与Ca2+结合而起抗凝作用，因其抑制细胞分解葡萄糖，故用于葡萄糖测定。抽血及抗凝原理1.快速血清管：橘红色头盖，采血管内有促凝剂，可激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变为不可溶的纤维蛋白多聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块。快速血清管可在5分钟之内使采集的血液凝固。适用于急诊血清生化试验。2.惰性分离胶促凝管：金黄头盖，采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶能够将血液中的液体成分（血清或者血浆）和固体成分彻底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本

17、在48小时内保持稳定，促凝剂可快速激活凝血机制，加速凝血过程。适用于急诊血清生化试验。3.肝素抗凝管 ：绿色头盖，内添加有肝素，肝素直接有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验，血气分析，红细胞压积试验，血沉及普通生化试验，不适于血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集，不能用于白细胞计数，因其可使血片染色后背景呈淡蓝色，故也不适于白细胞分类。4.血浆分离管:浅绿色头盖，在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂，可达到快速分离血浆的目的，是电解质检测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和ICU等急诊，血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在冷藏状态下保持48小时稳定。5.EDTA抗凝管：紫

18、色头盖，乙二胺四乙酸及其盐是一种氨基多羟基酸，可以有效地螯合血液标本中的钙离子，螯合钙或将钙从反应位点移去将阻滞和中止内源性或者外源性凝血过程，从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验，不适用于凝血试验及血小板功能检查，也不是用于钙离子，钾离子，钠离子，铁离子，碱性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR测定。6.枸橼酸钠凝血试验管：浅蓝头盖，枸橼酸钠主要通过与血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血试验。国家临床试验室标准化委员会推荐的抗凝剂浓度是3.2或3.8（相当于0.109或0.129mol/l）.抗凝剂与血液的比例是1：97.枸橼酸钠血沉试验管：黑色头盖，血沉试验要求的枸橼酸

19、钠浓度是3.2（相当于0.109mol/）抗凝剂与血液的比例是1：48.草酸钾 /氟化钠：灰色头盖，氟化钠是一种弱效抗凝剂。一般常同草酸钙或碘酸钠合并使用，其比例为氟化钠一份，草酸钠3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天内不凝固和抑制糖分解，它是血糖测定的优良保存剂。组织因子是一个由263 个氨基酸残基组成的跨膜单链糖蛋白,分子量约为47 kDa。组织因子是一种脂蛋白复合物，含有大量磷脂。当它进入血浆后。血浆中的钙离子将因子连接于组织因子的磷脂上，形成复合物，后者可使凝血因子X活化为Xa，并与Ca2+、因子V和血小板磷脂相互作用而形成凝血酶原激活物，然后通过与内源性凝血系统后阶段相同的途径

20、，完成凝血的化学反应。正常情况下,组织因子位于血管壁外膜细胞,包绕血管的成纤维细胞, 因此在正常情况下组织因子不存在于循环中或不与循环血液接触,只有当血管壁的完整性遭到破坏时TF 才暴露于循环血液,通过激活凝固级联反应发挥止血作用。8用用用止反凝过过液液循于 坏破破性壁壁有触液与与或或于在因况正正此此胞维的的绕细外外于因,下。反血血完，同后后血源过过通活活酶凝形形作磷磷和因、与 为为 凝可物物复，脂脂织接子子子离浆浆浆进它它量含物物复一因因组 约分蛋单单的的组氨 是是剂保优优糖它它分糖糖固天 合混 ，一化化其用钠酸酸草般。效一化化盖头头：/草：例比比与） 000相（.度酸要要沉盖黑黑：血橼橼

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