HE染色步骤.doc

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1、常规HE染色步骤（1）二甲苯（） 5-10 min(2) 二甲苯（） 5-10 min(3) 95%乙醇（） 1-3 min（4）95%乙醇（） 1-3 min（5）80%乙醇 1 min（6）蒸馏水 1 min（7）苏木精液染色 5-15 min(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s(10) 稍水洗 10-30 s(11)促蓝液返蓝 10-30 s(12) 流水冲洗 10-15 min（13）蒸馏水过洗 1-2 s(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s(17) 95%乙醇（） 3-5m

2、in(18) 95%乙醇（） 3-5 min(19) 无水乙醇 5-10 min(20) 无水乙醇 5-10 min(21) 二甲苯（） 3-5 min(22) 二甲苯（） 2-5 min(23) 二甲苯（） 3-5 min(24) 中性树胶封固结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。转：常规HE染色步骤（1）二甲苯（） 5-10 min(2) 二甲苯（） 5-10 min(3) 95%乙醇（） 1-3 min（4）95%乙醇（） 1-3 min（5）80%乙醇 1 min（6）蒸馏水 1 min（7）苏木精液染色 5-15 min(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s(9) 1%盐酸乙醇 1-3

3、s(12) 流水冲洗 20-30min（13）蒸馏水过洗 1-2 s(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s(17) 95%乙醇（） 2-3 s(18) 95%乙醇（） 3-5 s(19) 无水乙醇 5-10 min(20) 石炭酸二甲苯 无水乙醇 5-10 min(21) 二甲苯（） 2 min(22) 二甲苯（） 2 min(23) 二甲苯（） 2 min(24) 中性树胶封固注：第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。1取材组织块，经

4、固定后，常规石蜡包埋，4m切片。2切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min二甲苯（）5min100乙醇2min95的乙醇1min80乙醇1min75乙醇1min蒸馏水洗2min。（各两次，然后把水吸干）3苏木素染色5min，自来水冲洗。（吸干水）4盐酸乙醇分化30s（提插数下）。5自来水浸泡15min或温水（约50）5min。（吸干水）6置伊红液2min。7常规脱水，透明，封片：95乙醇（I）min95乙醇（）1min100乙醇（I）1min100乙醇（）1min二甲苯石碳酸（3：1）1min（省略）二甲苯（I）1min二甲苯（）1min中性树脂封固。HE染色步骤一、HE染

5、液的配制：1、 Harris苏木素： 称取 苏木素精 1g一氧化汞 0.5g硫酸铝钾 20g量取 无水乙醇 10ml蒸馏水 200ml苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。2、0.5%伊红(水溶性)： 称取 伊红 0.5g量取 95%乙醇 25ml蒸馏水 75ml先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。3、1%盐酸水溶液：盐酸 3m

6、l蒸馏水 297ml混匀，白色试剂瓶保存。4、中性树胶封片剂：往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稠度即可。试剂 二甲苯 1瓶 Harris苏木素染液无水乙醇 2瓶 1%盐酸水溶液95%乙醇 2瓶 0.5%伊红(水溶性)染液中性树胶封片剂二、染色步骤1、 电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、 入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；3、 入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；4、 入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、 入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；6、 入95%乙醇3分钟；7、 入流水2分钟，用吸水纸

7、吸干水分；8、 Harris苏木素 染色 48分钟；9、 自来水稍洗；10、1%盐酸水溶液分化510秒（切片由蓝变红）；11、自来水洗返蓝1530分钟；12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒1分13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；14、95%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；16、入100%乙醇（II）2分钟，用吸水纸吸干液体；17、入二甲苯（I）中透明2-3分钟，用吸水纸吸干液体；18、入二甲苯（II）中透明5分钟；19、中性树胶封片。20、镜下观察结果：细胞核深蓝色，胞浆及纤维组织呈深浅不等的红色。三、注意事项1、苏木

8、素染色时间应根据染液的新鲜或陈旧、及着色力决定。2、盐酸分化要恰当，分化不足，会核、浆共染，分化过度会造成核染色过浅。3、水洗蓝化时间应充分，以防褪色。4、封片后，玻片应及时贴上标签并写上编号。5步 号编并贴应玻色褪分应化洗浅过成造化染核会分，要定定及陈鲜染据色染事意注色红浅深纤及蓝深果察镜片片性钟 透 苯二体液纸， 透（二体干水用分 醇0 体体水， ）% 体液水， 乙 体干水，钟）（ 秒色性(%0钟0 蓝洗自）红由秒化溶酸洗稍钟 染木 分干纸，分流钟分% 体体水，分 乙0体干纸，分（乙0体液水，）（钟 ）（二体体水，分中）二蜡溶片片电步色片封染性(%0 瓶醇溶酸% 染素 苯甲可可定一适适入，

9、性入滴 剂片胶存存试 液液%存存剂磨色 乙入醇入，溶，蒸加再碎伊棒用入水 0 ：溶( ） 冰 %入用保瓶口磨滤夜静冷快移，深变，玻汞入加离合混馏于明乙无溶 0 0 醇无0 0 精 ： ：染步色固脂中 苯甲 ）甲（ （石甲 醇乙 乙0 （ （ ，规常。 红伊 干（ ）约温苯 泡）自 ）提0 酸 吸（ 冲 染木 吸 后次（ 蒸 醇 乙的 0 苯 （：水各，甲用切。切，石，定，组醇水用苯二用果0 -0延时）（省）（0 封胶 ）甲 ）苯 二 -无 炭) 水 - ）醇 - ）醇乙 稍0) 洗馏 液曙.) - 洗蒸 00洗流 - 醇% - 液洗流 液木 馏 醇% 乙 （醇 -苯 0 ）（二步染规色紫细色细封树 甲二 甲) - 二 - 醇水) - 无 醇 ）乙%) 稍% - 水 液红0 - 蒸 - 洗流 返蓝) 洗 醇盐 液苏稍) 色精苏 水馏 % - ）（ 醇% - ）苯