荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸ppt课件.ppt

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1、 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁跃迁(发光发光)和无辐射跃迁等方式失去能量；和无辐射跃迁等方式失去能量；传递途径传递途径辐射跃迁荧光延迟荧光磷光内转移外转移系间跨越振动弛预无辐射跃迁 激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大；荧光荧光：10-710 -9 s,第一激发单重态单重态的最低振动能级基态；磷光磷光：10-310s；第一激发三重态三重态的最低振动能级基态；S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越内转换振动弛豫能量l l 2l l 1l l 3 外转换l l 2T2内转换

2、振动弛豫 荧光发射荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级基态（ 多为 S1 S0跃迁），发射波长为 l 2的荧光； 10-710 -9 s 。 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长； l 2 l 2 l 1 ； 磷光发射磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级基态（ T1 S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 T1禁阻跃迁） S0 激发振动弛豫内转移系间跨越振动弛豫 T1 发光速度很慢： 10-310 s 。 光照停止后，可持续一段时间。分子产生荧光必须具备的条件分子产生荧光必须具备的条件1）具有合适的结构；2）具有一定的荧光量子产率。 荧光量子产率（）

3、：吸收的光量子数发射的光量子数 荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关，如外转换过程速度快，不出现荧光发射； 测量荧光的仪器主要由测量荧光的仪器主要由四个部分四个部分组成：激发光源、样品组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。池、双单色器系统、检测器。 特殊点特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程如图：基本流程如图：单色器单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器；光源光源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区)检测器检测器：光电倍增管。特点特点1 1）灵敏度高）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高24个数量级；为什么？ 检测下限：

4、0.10.1g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。2 2）选择性强）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；3 3）试样量少）试样量少 缺点缺点：应用范围小。1、ASA和SA贮备溶液的配制（1）ASA贮备液的配制：称取0.4000g乙酰水杨酸溶于1醋酸-氯仿溶液中，用 1醋酸氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用；（2）SA贮备液的配制：称取0.750g水杨酸溶于1醋酸氯仿溶液中，用 1醋酸氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用。2、ASA和SA激发光谱和荧光光谱的绘制将ASA和SA贮备液分别稀释100倍(分二次完成，每次稀释10倍

5、)。用得到的溶液分别扫描ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别确定它们的最大激发波长和最大发射波长。3、标准曲线的制作(1) ASA标准曲线的制作 用移液管分别准确移取浓度为4.00 gmL-1的ASA溶液2、4、6、8、10 mL至5只50mL容量瓶中，用1醋酸氯仿溶液稀至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度.(2) SA标准曲线的制作 用移液管分别准确移取浓度为7.5gmL-1 的SA溶液2、4、6、8、l0mL至5只50mL容量瓶中，用 1醋酸氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度4、阿斯匹林药片中乙酰水杨酸和水杨酸的测定 取5片阿司匹林药片磨成粉末，准确称取0.40mg用1醋酸氯仿溶液溶解，全部转移至100mL容量瓶中，用1醋酸氯仿溶液稀释至刻度。迅速通过定量滤纸干过滤，用该滤液在与标准溶液同样的测定条件下测量SA荧光强度。 将上述滤液稀释1000倍(用三次稀释来完成)，在与标准溶液同样的测定条件下测量ASA荧光强度。数据处理数据处理 1、从绘制的ASA和SA激发光谱和荧光光谱曲线上，确定它们的最大激发波长和最大发射波长。2、分别绘制ASA和SA的标准曲线，从标准曲线上确定试样溶液中ASA和SA的浓度，并计算每片阿斯匹林药片中ASA和SA的含量(mg)，将ASA测定值与说明书上的值比较。