血清碱性磷酸酶ALP测定.doc

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1、血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2 实验原理 本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。 ALP 对-硝基苯磷酸盐 + H2O - 对硝基酚 + 磷酸 在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。 3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。3.4 标本存放：23天内的活性

2、损失：1525保存：10%；标本稳定性：48保存稳定7天；-20保存至少可稳定2个月标本。如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）： 乙酸镁 3.0mmol/L 硫酸锌 1.5mmol/L HEDTA3.0mmol/L AMP缓冲液 420mmol/L试剂2（R2）： 对-硝基苯磷酸盐81.

3、5mmol/L AMP缓冲液 420mmol/L HEDTA 5.0mmol/L 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：在28避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。 试剂启用后，在210避光的条件下可稳定14天。4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的ALP校准品对自动分析仪进行校准。4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

4、5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程

5、。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法 以ALP复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。9 参考值范围 成年人 男性 2050岁 53128U/L 男性 60岁以上 56119U/L 女性 2050岁 42 98U/L 女性 60岁以上 53141U/L 儿童 男性 女性 130天 75319U/L 48406U/L 1个月1岁 82383U/L 124341U/L 1岁3岁 104345U/L 108317U/L 4岁6岁 93

6、309U/L 96297U/L 7岁9岁 86315U/L 69325U/L 10岁12岁 42362U/L 51332U/L 13岁15岁 74390U/L 50162U/L 16岁18岁 52171U/L 47119U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。我室参考值 35-125 U/L10 临床意义 碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP生理性活性增高

7、，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力增高。11 操作性能11.1 试剂空白：a) 试剂空白吸光度应不大于0.800。b）试剂空白吸光度变化率（A/min）：应不大于0.0015。 11.2 分析灵敏度：10U/L样本的吸光度变化率（A/min）应不小于0.003。 11.3 线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖101000U/L。a) 线性相关系数（r）应不

8、小于0.990；b) 50U/L 范围内的线性偏差应不超过6.0U/L，50U/L 范围内的线性偏差应不超过10。 11.4 准确度：相对偏差（B）应不大于10%。 11.5 精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。 11.6 稳定性：试剂（盒）在28避光、密封的环境中贮存至12个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。12 超出范围结果处理 本试剂的线性范围为101000U/L。当样本中碱性磷酸酶活性高于1000U/L时当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定

9、，结果乘以10。13 病危报警值的处理 无警告/危急值14 方法局限性14.1 测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。 14.2 样本中血红蛋白的浓度500mg/dL、胆红素浓度340mol/L、甘油三酯浓度4mmo1/L对测定无干扰。 14.3 有关可能干扰本测定的药物或物质，请参阅参考文献16.3。 14.4 若试剂混浊或以水为空白在波长405nm处的吸光度值大于0.8时，则不能使用。15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献16.1 叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2 钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版16.3 府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4 试剂说明书