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1、专题一 课题1 果酒和果醋的制作【补充知识】发酵1、概念：利用微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体及各种不同代谢产物的过程.2、类型：（1）根据是否需要氧气分为：需氧发酵和厌氧发酵。（2）根据产生的产物可分为：酒精发酵、乳酸发酵、醋酸发酵等。一、基础知识（一）果酒制作的原理酶酶1菌种是酵母菌，属于真核生物，新陈代谢类型异养兼性厌氧型，有氧时，进行有氧呼吸，大量繁殖（以出芽生殖为主），反应式为：C6H12O6+6H2O+6O2 6CO2+12H2O+能量；无氧时，能进行酒精发酵，反应式为：C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量。2酵母菌繁殖的最适温度20左右，酒精发酵一般控

2、制在1825。3自然发酵过程中，起作用的主要是附着于葡萄皮上的野生型酵母菌。（二）果醋制作的原理1菌种是醋酸菌，属于原核生物，新陈代谢类型为异养需氧型。只有在氧气充足时，才能进行旺盛的生命活动。变酸的酒表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖形成的，其繁殖方式为分裂生殖。酶2当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，反应简式为C2H5OH+O2 CH3COOH+H2O。3醋酸菌的最适生长温度为3035。4菌种来源：到生产食醋的工厂或菌种保藏中心购买，或从食醋中分离醋酸菌。二、实验流程图挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒精发酵 果酒（醋酸发

3、酵果醋）三、操作提示（一）材料的选择与处理选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗（冲洗的目是洗去灰尘，且不要太干净，以防止洗去野生型酵母菌），然后再除去枝梗。（二）防止发酵液被污染1、榨汁机要清洗干净，并晾干。2、发酵瓶要清洗干净，用体积分数70%的酒精消毒。3、装入葡萄汁后，封闭充气口。（三）控制好发酵条件1、葡萄汁装入发酵瓶时，要留出大约1/3的空间（目的是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，耗尽O2后再进行酒精发酵；同时可防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出）。2、制作葡萄酒过程中，将温度严格控制在1825，时间控制在1012d左右，可通过出料口对发酵的情况进行及时的监测。3、制作葡萄醋

4、的过程中，将温度严格控制在3035，时间控制在78d左右，并注意适时通过充气口充气。四、课题延伸（一）如何判断果酒的制作是否成功？1、发酵后取样，通过嗅味或品尝进行初步鉴定；2、显微镜观察酵母菌数量变化进行鉴定；3、，用重铬酸钾来检验是否有酒精产生。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。检测时，先在试管中加入发酵液2mL，再滴入物质的量的浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴。（二）如何判断果醋的制作是否成功？1、通过嗅味或品尝进行初步鉴定；2、显微镜观察醋酸菌数量变化进行鉴定；3、检测发酵前后的PH作进一步鉴定。【教材答案】（一）旁栏思考题

5、1.你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？答：应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。 2.你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？提示：葡萄应先冲洗、再去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净；每次排气时只需拧松瓶盖、不要完全揭开瓶盖等。 3.制葡萄酒时，为什么要将温度控制在1825 ？制葡萄醋时，为什么要将温度控制在3035 ？答：温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20 左右最适合酵母菌繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为3035 ，因此要将温度控制在3035 。 4.制葡萄醋时，为什么要适时通过充气口充气？答：

6、醋酸菌是好氧菌，在将酒精变为醋酸时需要氧的参与，因此要适时向发酵液中充气。（二）资料发酵装置的设计讨论题请分析此装置中的充气口、排气口和出料口分别有哪些作用。为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接？结合果酒、果醋的制作原理，你认为应该如何使用这个发酵装置？答：充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出CO2的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，其目的是防止空气中微生物的污染。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接气泵，输入氧气。课题2腐乳的制作（一）腐乳的制作原理1.腐乳制作过程中发挥作用的微生物主要是 毛霉

7、，其属于真核生物，其同化作用类型是异养性。毛霉等微生物产生的蛋白酶等能将豆腐中蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；产生的脂肪酶能将豆腐中脂肪水解为甘油和脂肪酸。思考1在日常生活中，人们通常将鱼和肉腌制起来长时间保存，其原因是在高浓度盐水溶液中细菌脱水死亡。2. 让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制（1）毛霉的生长：毛霉生长的适宜条件：温度1518，保持一定的湿度。思考2自然条件下豆腐块上的毛霉来自空气中的毛霉孢子；在工厂化生产腐乳过程中毛霉来自严格无菌条件下的直接接种优良毛霉菌种。思考3腐乳表面的“皮”主要是由毛霉的菌丝构成的。(2)加盐腌制：在长满毛霉的豆腐块上加盐的目的是析出豆腐中的水分

8、使之变硬和抑制微生物的生长避免腐败变质思考4瓶口处多加盐的原因是瓶口处容易被杂菌污染。（3）配制卤汤：卤汤的作用是调节腐乳的色、香、味，并可以抑制微生物的生长。思考5卤汤中的哪些成分具有防腐杀菌作用？酒精和香辛料（二）发酵操作31控制好材料的用量一是控制好盐 的用量：过多影响口味，过少容易腐败变质。二是控制卤汤中酒精含量在12左右：过高会延长腐乳的成熟，过低可能导致豆腐变质。2防止杂菌感染防止杂菌感染的措施有：玻璃瓶用沸水消毒；装瓶过程中操作要迅速小心；装瓶后用胶带密封；封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。思考6在整个制作过程中，还有哪些防止杂菌感染的措施？ 加盐腌制、卤汤中的

9、酒精和香辛料等。思考制作腐乳的配方有红方、槽方和青方等。红色腐乳是由于制作中利用了红曲而使腐乳呈现红色。4结果分析与评价41用盐量对腐乳制作有哪些影响？调节口味、杀菌、脱水等。42发酵温度对腐乳制作有什么影响？温度过低或过高会影响毛霉的生长和酶的作用，从而影响发酵的进程和发酵质量。43发酵时间对腐乳制作有什么影响？时间过短，发酵不充分；时间过程，豆腐会软化不易成型，从而影响腐乳的口味。疑难解析：1王致和为什么要撒许多盐，将长毛的豆腐腌起来？盐在该过程中起什么作用？盐能防止杂菌污染，避免豆腐腐败。盐能抑制多种微生物的生长。2.卤汤酒精含量控制在12左右的原因酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短

10、有很大关系。酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。课题3制作泡菜（一）泡菜的制作原理：制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，将糖分解为乳酸。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌 生产酸奶的是乳酸杆菌反应式为：C6H12O62C3H6O3能量（二）测定亚硝酸盐含量的原理：亚硝酸盐在食品生产中常用作添加剂。国家规定肉制品中不超过30/，酱腌菜中不超过20/，婴儿奶粉中不超过2/。亚硝酸盐被吸收后随 尿排出体外，但在适宜PH、温度和一定的微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。向坛

11、盖边沿的水槽中注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。（三）腌制的条件在泡菜的腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。为什么泡菜坛内有时会长一层白膜？你认为这层白膜是怎么形成的？形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富，其表面氧气含量也很丰富，适合酵母菌繁殖。专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养1、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。培养基按照物理性质可分为液体培养基（主要用于工业生产）、半固体培养基（观察细菌运动、鉴

12、别菌种）和固体培养基（主要用于菌种的分离、计数、鉴别）。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。菌落是菌种鉴定的重要依据。按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴别培养基。培养基的化学成分包括：水 、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）等。 无机碳源不能为微生物提供能量； 含碳有机物是异养型微生物的碳源和能源； 无机氮源NH3既是硝化细菌的氮源，也是其能源；N2是固氮菌（如根瘤菌）的氮源。2、无菌技术：获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培

13、养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。3、消毒与灭菌的区别消毒：指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒常用煮沸消毒法、巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）、化学药剂消毒、紫外线消毒。灭菌：则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无菌水等使用高

14、压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。 （4）消毒与灭菌的共同点：都需借助理化性质营造微生物难以生存的不良环境； 其作用原理都是通过使蛋白质变性来抑制微生物的生命活动或杀死微生物。4、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 称量：牛肉膏黏稠，用称量纸称取；牛肉膏、蛋白胨易吸潮，称取要快、加盖。 溶化：牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解取纸蛋白胨、NaCl琼脂补水定容调pH。 思考：溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热? 答：可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,减少误差 倒平板：待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。【教材答案】 1.无菌技术

15、除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：还能有效避免操作者自身被微生物感染。 2.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 3.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 4.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 5.在倒平板的过程中，如果

16、不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。5、 纯化大肠杆菌 微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体（菌落）。 稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的

17、目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。 平板划线法操作步骤：详见教材 平板划线操作的讨论：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 稀释涂

18、布平板法中涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液，滴加到培养基表面。 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810s。 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。（8）平板划线法与稀释涂布平板法各自的优缺点是什么？共同点：都能使细菌纯化；不同点：平板划线法不易分离出单个菌落，不能计数；稀释涂布平板法能使单菌落分离，便于计数。优缺点： 稀释涂布平板法统计样品中的数目往往比实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板观察到的只是一个菌落。6、 菌种培养 将接种后的培养基和一个未接种的培养基（起对照作用）一起放入37恒温箱中培养，分别观察并记录结果。7、菌种

19、的保存对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。（于4的冰箱中保藏。缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。） 对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。（菌液与甘油充分混匀后放在-20的冷冻箱中保存。）课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与技术（一）基础知识1. 11尿素是一种重要的氮肥，农作物_不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨，这是因为细菌能合成脲酶。12科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉70-80的高温条件淘汰了绝大多数微生物，使耐热Taq细菌脱颖而出，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的

20、条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。思考1在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖和尿素，提供氮源的的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。思考2该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是允许以尿素作为唯一氮源的微生物生长，抑制其他微生物生长。13在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。除此之外显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法公式：观察到的红细胞平均数观察到的细菌平均数红细胞含量细菌含量14

21、采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数。思考3利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。15统计的菌落数比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数来表示。16设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。17对照实验是指除被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。思考

22、4请设计本实验的对照实验组：方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。2实验设计思考5为什么分离不同微生物要采用不同的稀释度？因为微生物在土壤中的含量不同。在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，PH升高。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂变红，我们就初步鉴定该种细菌能够分解尿素。课题3分解纤维素的微生物的分离一、纤维素与纤维素酶1纤维素的化学组成： C、H、O三种元素，是一种 多 糖。2纤维素的分布：棉花 是自然界中纤维素含量最高的天然产物，此外，木材、作物秸秆等

23、也富含纤维素。3纤维素酶的作用：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 C1酶、 CX酶、 葡萄糖苷 酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖 ，第三种酶将纤维二糖分解成 葡萄糖 。二、纤维素分解菌的筛选 1筛选方法： 刚果红染色法 染色法。2筛选原理：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成 红色复合物 ，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌 为中心的透明圈，我们可以通过 是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 三、试验设计土壤中纤维素分解菌的分离的实验方案 ： 分解纤维素的微生物的分离的试验流程土壤取样 、 选择培

24、养 、梯度稀释 、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养上 、挑选产生透明圈的菌落 1土壤取样：采集土样时，应选择富含 纤维素丰富的环境 的环境。 2选择培养： 阅读资料二“选择培养基”，回答以下三个问题：思考1纤维素分解菌选择培养基属于 液体 培养基，原因是什么？。没加琼脂思考2培养基选择作用机制是什么？以纤维素粉为唯一碳源，只有纤维素分解菌才能生存。思考3若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是什么？将纤维素粉改为葡萄糖 目的：增加纤维素分解菌的 浓度 ，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 刚果红染色法：挑选产生 透明圈 的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。思考4本实验流程与尿

25、素分解菌的分离实验流程有哪些异同？尿素分解菌的分离实验流程是将土样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上；本课题通过选择培养使细菌增殖后，再涂布在鉴别培养基上。其它操作基本基本共同。3刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种即 先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应和在倒平板时就加入刚果红 阅读资料三“刚果红染色法”，填表比较两种染色法的各自的优缺点：染色法优点缺点方法一颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐刚果红会使菌落之间发生混杂方法二操作简便不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈思考5为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？在选择培养的

26、条件下，可以使那些能适应这种营养条件的微生物迅速增殖，而那些不适应这种营养的微生物的繁殖被抑制四：结果分析与评价1为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行 发酵产纤维素酶的实验 实验，纤维素酶的实验。发酵方法有液体发酵和固体发酵。2纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的 葡萄糖 含量进行定量测定。专题3植物组织培养技术课题1 菊花的组织培养一、植物组织培养的相关概念和基本过程1、(1)细胞全能性：_已分化_的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。(2)细胞分化：在植物的个体发育_过程中，细胞在_形态_、_结构_和_生理功能上都会出现_稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化

27、。(3)植物组织培养的基本过程离体的植物器官、组织或细胞(又叫_外植体_)愈伤组织胚状体、丛芽等生长新个体愈伤组织的特点：细胞_排列疏松无规则_，是一群高度液泡化_的呈无定型状态_的薄壁细胞。脱分化(去分化)：由_高度分化_的植物组织或细胞产生_愈伤组织_的过程。再分化：由_愈伤组织_重新分化成根或芽等器官的过程。离体的植物组织或细胞叫做外植体。2影响植物组织培养的因素(1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度_差别较大_。对于同一种植物材料，材料的_年龄_、保存时间的长短_等也会影响实验结果。因此菊花的组织培养，一般选择_未开化植株_的茎_上_部_新萌生_的侧枝。(2)营养物质的影

28、响：常用的_MS_培养基，主要成分包括_大量元素_、_微量元素_、有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。其中_大量元素和_微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；_有机物_提供碳源，维持细胞渗透压。(3)植物激素的影响：MS培养基常需添加植物激素。其中_生长素_和细胞分裂素_是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的_浓度、使用顺序_、_用量的比例等，都会影响实验结果。(4)环境因素的影响：_pH_、_温度_、光照_等条件也能影响植物组织培养。3、填表：激素使用的先后顺序及其用量比例对细胞分裂和分化的影响。生长素细胞分裂素比值与结果比值高时促根分化，抑芽形成比值低时促芽分化，抑

29、根形成比值适中促进愈伤组织生长使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素用量/细胞分裂素用量，比值高有利于_的分化、抑制_的形二、实验操作过程：1.制备实验室一般使用4保存的配制好的培养基母液来制备（1）配制各种母液。配制母液时，大量元素浓缩_10倍_，微量元素浓缩_100倍_。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。（2）配制培养基。配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加

30、入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。_调节_pH ，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装_50ml或100ml_。（3）灭菌。高压蒸汽灭菌2外植体选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝_。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_药剂的消毒效果_；另一方面还要考虑植物材料的_耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。2外植体消毒过程：流水冲洗软刷刷洗流水冲洗过程流水冲洗软刷刷洗流水冲洗_20min_无菌吸水纸吸干外植体表面体积分数为_70%_的酒精中摇动23次，持续6-7s无菌水清洗无菌吸水纸吸干外植体表面质量分数为0.1

31、的_氯化汞_溶液中12min无菌水中至少清洗3次3、接种接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌4、培养接种后的锥形瓶最好放在_无菌箱中培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22，并且每天用日光灯光照12h5、移栽6、栽培附：一般来说，容易进行_无性繁殖_的植物，也容易进行组织培养课题2 月季的花药培养一被子植物花粉发育过程1被子植物的花粉是在 花粉囊 中由 花粉母细胞 经过 减数 分裂形成的。所以，花粉是 单倍体 的生殖细胞。2结合教材内容填下列示意图：小孢子母细胞（2n）小孢子母细胞时期（n）单核

32、居中 期（n）双核期生殖 细胞核（n）花粉管细胞核（n）生殖 细胞（n）营养细胞（n）（ 2 ）个精子(n)（ 有丝 ）分裂（减数 分裂单核 靠边 期（n）有丝 分裂思考1被子植物的花粉的发育要经历 四分体 时期，单核 期和 双核期等阶段。思考2正常情况下，一个小孢子母细胞可产生 8 个精子；一枚花药中可产生 很多 个花粉。二产生花粉植株的两条途径1产生花粉植株（即单倍体植株）的两种途径：一是花粉通过胚状体 阶段发育为植株，二是通过愈伤组织 阶段发育为植株。这两种途径的区别主要取决于培养基中 激素 的种类及其 浓度的配比。2填写培育花粉植株的途径图解：脱分化 花药中的花粉分化再分化（ 胚状体

33、）（ 愈伤组织 ）诱导丛芽生根移栽3胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把胚状体到从芽的过程称为 分化 ，而把从愈伤组织到从芽的过程称为 再分化 。4.植物体细胞发育而来的胚状体又叫 体细胞胚 ，花粉发育而来的胚状体叫 花粉胚 ，可发育为 单倍体 植物，要使其成为纯合的正常植株，可用 秋水仙素 处理发育中的幼苗。三影响花药培养的因素1影响花粉植株成功与否和成功率的主要因素： 材料的选择 和 培养基的组成 等。2材料的选择：从花药来看，应当选择（初花期、盛花期、晚花期）的花药；从花粉来看，应当选择（四分体期、单核期、双核期、萌发期）的花粉，因为单核期以前的花药 质地幼嫩，极易破碎 ，选择单核

34、期以后的花药接种，花瓣松动，给材料消毒带来困难 从花蕾来看，应当选择（完全未开放、略微开放、完全盛开）的花蕾。四实验设计1.材料的选择选择花药时一般通过 镜检 确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色，最常用的染色剂是 醋酸洋红法 和 焙花青-铬矾法 ，它们分别可以将细胞核染成 红 色和 蓝黑色。2.材料的消毒花蕾70%的酒精（无菌水）清洗（无菌吸水纸）吸干水分0.1%氯化汞溶液（无菌水）冲洗3.接种和培养（1）剥取花药：消毒后的花蕾，要在 无菌 条件下除去花萼、花瓣。在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则 接种后容易从受伤部位产生愈伤组织 还要彻底除去花丝，因为 与花丝相连的花药不利于愈

35、伤组织或胚状体的形成 。（2）接种花药：剥取的花药要立刻接种到培养基上。每个培养瓶接种 7-10 个花药。（3）培养：花药培养利用的培养基是 MS 培养基，pH为 5.8 ，温度为 25 ，幼苗形成之前（需要、不需要）光照。（4）培养2030d后，花药开裂，长出 愈伤组织 或形成 胚状体 。前者还要转移到 分化培养基上进行分化培养成再生植株；后者要尽快 将幼小植株分开并转移到新的培养基上。（5）通过愈伤组织形成的植株，常常会出现 染色体组数发生 变化，因而需要鉴定和筛选。专题6 植物有效成分的提取课题1 植物芳香油的提取1、芳香油的性质：挥发性很强，成分复杂，以萜类化合物及其衍生物为主。2、植

36、物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨、萃取。具体要采用哪种方法要根据植物原料的特点来决定。3、水蒸气蒸馏法：原理：水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物，冷却后水油分层。方法：水中蒸馏、水上蒸馏、水气蒸馏不足：有些原料不适宜于水中蒸馏，如柑橘、柠檬等，这是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题。4、萃取法：原理：芳香油易溶于有机溶剂，有机溶剂挥发后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。方法：原料（要求粉碎和干燥）浸泡在溶剂中得到浸泡液有机溶剂挥发芳香油不足：有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质5、玫瑰精油的提取（1）由于玫瑰精油化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏

37、，通常采用水蒸气蒸馏法中的水中蒸馏法。（2）提取玫瑰精油的实验流程：鲜玫瑰花+清水水蒸气蒸馏油水混合物加NaCl分离油层加无水Na2SO4除水过滤得玫瑰油（3）氯化钠溶液作用：分离油层无水硫酸钠作用：吸水。注意事项：蒸馏时间延长，温度不宜太高。6、橘皮精油的提取（1）橘皮精油的主要成分：柠檬烯，主要分布在橘皮中。（2）实验流程：石灰水浸泡漂洗压榨过滤静置橘皮油（3）浸泡之前要将橘皮干燥去水；橘皮要浸透，这样压榨时防止滑脱，提高出油率，并且压榨液的粘稠度降低，过滤时不会堵塞筛眼。（4）小苏打、硫酸钠：促进橘皮油易于与水分离（用量分别为0.25%的NaHCO3和5%的Na2SO4）。（5）离心的目

38、的：除去质量较小的残留固体物。静置处理目的：使杂质沉淀课题2 胡萝卜素的提取一、 基础知识1、 胡萝卜素性质： 橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。2、 胡萝卜素分类： 依据碳碳双键的数目划分为、 三类，其中最主要的组成成分为-胡萝卜素。3、 胡萝卜素作用： 治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病；食品色素；使癌变细胞恢复成正常细胞。4、提取胡萝卜素的方法： 从植物中提取 从大面积养殖的岩藻中获得 利用微生物的发酵生产二、实验设计（一）萃取剂的选择1、有机溶剂分为水溶性有机溶剂和水不溶性有机溶剂两种；水溶性有机溶剂包括：乙醇、丙酮；水不溶性有机溶剂包

39、括：石油醚、乙酸乙酯、 乙醚、苯、四氯化碳等。2、萃取胡萝卜素的有机溶剂选择： 具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。、影响萃取的因素主要因素：萃取剂的性质和使用量次要因素：原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。萃取前，要将胡萝卜进行粉碎和干燥、胡萝卜素提取装置的设计：萃取过程应该避免明火加热，采用水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。在浓缩之前，还要进行

40、过滤，除去萃取液中的不溶物。过滤：除去萃取液中的不溶物浓缩：蒸发出有机溶剂鉴定：纸层析法滤纸：1830基线：滤纸下端距底边2处做一基线，在基线上取A、B、C、D四点。点样：用最细的实验步骤粉碎：使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。干燥：脱水温度太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。萃取注射器针头（毛细吸管）吸取样品进行点样。点样应该快速细致，在基线上形成直径左右的圆点，每次点样后，可用吹风机将溶剂吹干，注意保持滤纸干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，至于装有深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后，观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带。乙醇和丙酮能够用于胡萝卜

41、素的萃取吗？为什么？答：胡萝卜素可溶于乙醇和丙酮，但它们是水溶性有机溶剂，因萃取中能与水混溶而影响萃取效果，所以不用它们作萃取剂。2.在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳这几种有机溶剂中，哪种最适宜用来提取胡萝卜素？答：在这五种有机溶剂中，石油醚的沸点最高，在加热萃取时不易挥发，所以石油醚最适宜用作萃取剂。提取方法实验原理方法步骤适用范围水蒸气蒸馏 利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来1.水蒸气蒸馏2.分离油层3.除水过滤 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油压榨法 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油1.石灰水浸泡、漂洗2.压榨、过滤、静置3.再次过滤 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取有机溶剂萃取 使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可获得芳香油1.粉碎、干燥2.萃取、过滤3.浓缩 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中