2022年BG液体培养配方复习进程 .pdf

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1、BG11 液 体 培 养 配 方名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 8 页 - - - - - - - - - BG11 液体培养基就是：Stock1 定容 100mL 柠檬酸 0.3g 柠檬酸铁胺 0.3g EDTANa2 0.05g Stock2 定容 1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4 7H2O 1.5g Stock3 定容 100mL CaCl2 2H2O 1.9g Stock4 定容 100mL Na2CO3 2g

2、 Stock5 定容 1000mLH3BO3 2.86g MnCl2 4H2O 1.81g ZnSO4 7H2O 0.222g Na2MnO4 2H2O 0.391g CuSO4 5H2O 0.079g Co(NO3)2 6H2O 0.049g Stock1 取用 2mL Stock2 取用 20mL Stock3 取用 2mL Stock4 取用 1mL Stock5 取用 1mL 总定容 1000mL 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 8 页 - - -

3、 - - - - - - D1 (Diatom medium)Component Amount Stock Solution (1) NaNO3 1 mL/L 12 g/100ml dH2O (2) K2HPO4 1 mL/L 4 g/100 mL dH2O (3) MgSO4 7H2O 1 mL/L 7g/100 mL dH2O (4 ) CaCl2 2H2O 1 mL/L 2 g/100 mL dH2O (5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O (6 ) Na2SiO3.9H2O 1 mL/L 10g/100ml dH2O(7) MnSO4 0.1mL/L 0.

4、2g/100ml dH2O(8) 柠檬酸铁 1 mL/L 0.5g/100ml dH2O(9) A5 （Trace mental solution） 1ml/L H3BO3 2.86g/L dH2O MnCl24H2O 1.86g/L dH2O ZnSO47H2O 0.22g/L dH2O Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O CuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2O Co(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - -

5、 - 第 3 页，共 8 页 - - - - - - - - - (10) 土壤提取液 20 mL/L土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g 置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000 毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热3 小时，冷却，沉淀24 小时，此过程连续进行3 次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4冰箱中保存备用。f/2 mediumComponent Amount (1) NaNO3 75 mg/L(2) NaH2PO4 2H2O 0.6 mg/L(3) Vitamin B12 0.5 g/L (4) Biotin 0.5 g/L (5) Thiamine HCl

6、100g/L (6) Na2SiO3 9H2O 10 mg/L (7) f/2 metals 1 mL/L Na2EDTA 2H2O 4.4g FeCl3 6H2O 3.16 g CoSO4 7H2O 0.012g ZnSO4 7H2O 0.021g MnCl2 4H2O 0.18 g CuSO4 5H2O 0.007g Na2MoO4 2H2O 0.007g Distilled water 1000 mL(8) Seawater 1000 mL BG-11 是培养蓝藻使用最广泛的培养基，微量元素溶液 A5 是 BG-11培养基微量元素的重要组成部分。试剂名称g/L备注NaNO31.5g K2

7、HPO40.04g MgSO4.7H2O0.075gCaCl2.7H2O0.036g Na2CO30.02g 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 8 页 - - - - - - - - - Citric acid( 柠檬酸 )0.006g Ammonium ferric citrategreen(柠檬酸铁铵 )0.006g或柠檬酸铁 0.004gEDTA0.001 g微量元素溶液A5 1ml 氨苄青霉素 (终浓度 )50g/ml蒸馏水919ml * 微量元素溶

8、液 A5 A5 溶液 1mlH3BO32.86g MnCl2.4H2O1.81g ZnSO4.7H2O0.222gNa2MoO40.39g CuSO4.5H2O0.079g Co(NO3)2.6H2O0.049g参考：中科院水生生物研究所淡水藻种库一、目的要求了解培养基的配制原理。了解培养基常规配制程序。了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础，由于微生物种类及代谢类型的因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌

9、，斜面与平板的制作以的无菌检查等基本环节大致相向。三、实验材科(一)药品待配各种培养的组成成分，琼脂，1mol/L NaOH 溶液， 1mol/L (升，统一用大写 )HCl 溶液。(二)仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。(三)玻璃器皿名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页，共 8 页 - - - - - - - - - 移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。(四)其他物品药匙、称量纸、 pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。四

10、、实验内容(一)玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸馏水冲洗，洗刷干器皿置于烘箱中烘干后备用。 2灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的包装培养皿由一盖 底组成一套。可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 (2)移液管的包装在移液管的上端塞入 小段棉花 (勿用脱脂棉 )。它的作用是避免外界及口中杂内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。棉花自身

11、长度约1-15cm。可用一外圈拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑先将报纸裁成宽约 5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。(二)液体及固体培养基的配制过程 1液体培养基配制 (1)称量一般可用 1/100 粗天平称量配制培养基所需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用进行准确称量。 (2)溶化 将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻加热溶解。 (3)定容

12、待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。 (4)调 pH 一般用 pH 试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH 试纸，然后用镊子夹取此段在培养基中蘸一下，观看其pH 范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/l NaOH 或 1mol/l HCl 溶液进行调pH 时，应逐滴加入 NaOH 或 HCl 溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用试，直至达名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - -

13、 - - - - - 第 6 页，共 8 页 - - - - - - - - - 到所需 pH 为止。 (5)过滤 用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。 2固体培养基的配制配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(15-2)加入，并断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。(三) 培养基的分装根据不同需要，可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培将脱脂棉弃去。 1试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏

14、斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指夹，中指及无名指夹住玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15 150 mm时，液体培养基可管高度 14 左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用面的固体培养基的分装量为管高15(约 34m1)；半固体培养基分装量为管高的13 为宜。 2锥形瓶的分装用于振荡培养微生物用时，可在250 m1锥形瓶中加入 50 ml 的液体培养基，若用于制作平板培可在250 m1锥形瓶

15、中加入 150ml 培养基，然后再加入3g 琼脂粉 (按 2计算 )，灭菌时瓶中琼脂粉同时被(四)棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或锥形预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及锥形瓶口加上棉花塞等。 1试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右棉花从中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入。棉塞不宜过紧或过松，塞好后塞，试管不下落为准。棉塞的23 在试管内， 13

16、在试管外 (图 514)。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 7 页，共 8 页 - - - - - - - - - 目前也有采用金属或塑料试管帽代替棉塞。直接盖在试管口上。灭菌待用。将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管拥成一捆，外面包上一层牛皮纸。用铅笔注明培养基制日期，灭菌待用。 2锥形瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用替棉塞包在瓶口上。目前也有采用无菌培养容器封口膜直接盖在瓶口，既保证良好通气，过滤除菌又便

17、，故极受欢迎。在装好培养基并塞好棉塞或包上八层纱布或盖好培养容器封口膜的锥形瓶口上，再包上一层牛皮绳捆好，灭菌待用。(五)培养基的灭菌培养基经分装包扎之后，应立即进行高压蒸汽灭菌，100Pa灭菌 20min（灭菌条件根据培养基不异，含糖培养基 105，30min）。如因特殊情况不能及时灭菌，则应暂存于冰箱中。(六)斜面和平板的制作 1斜面的制作将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面(图 51长度不超过试管长度 12 为宜。如制作半固体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至冷凝。 2平板的制作将装在锥形瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50左右倾入无

18、菌培养皿中。温度盖上的冷凝水太多，温度低于50，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应采用无菌操作，左手拿培养皿，右手拿锥形瓶的底部或试管，左于同时用小指和手打开，灼烧瓶口，月左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10-12m1的培养基，迅盖，置于桌上，轻轻旋转平皿、使培养基均匀分布于整个平皿中、冷凝后即成平板。(七)培养基的无菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好从中取出1-2 管（瓶），置于 37恒温箱中培养确定无菌后方可使用。(八)无菌水的制备在每个 250 mL 的锥形瓶内装 99mL 的蒸馏水并塞上棉塞。在每支试管内装4.5m1蒸馏水。塞上上塑料试管盖。再在棉塞上包上一张牛皮纸。高压蒸汽灭菌，100 Pa灭菌 20 分钟。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 8 页，共 8 页 - - - - - - - - -