生物工程技术流程.doc

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1、生物工程流程一、基因工程基因文库DNA连接酶PCR 目的基因.人工合成 同一种限制酶 重组DNA（基因表达载体）导入受体细胞检测.鉴定筛选 运载体 转基因生物： 微生物细胞工程菌检测，鉴定。胚胎移植筛选目的基因 生长发育 重组DNA导入受体细胞 动物受精卵培养早期胚胎受体子宫转基因动物检测，鉴定。受精卵植株检测，鉴定。运载体 再分化脱分化筛选 植物 体细胞含目的基因的细胞愈伤组织幼苗检测，鉴定转基因植物。DNA探针检测目的基因 目的基因DNA探针 出现杂交带：待测DNA中含有目的基因待测DNA扩增产物 未出现杂交带；待测DNA中无目的基因 二、蛋白质工程 预期蛋白质功能设计蛋白质三维结构多肽链

2、氨基酸序列MRNA碱基序列DNA碱基对序列人工合成基因或从供体细胞提取基因后改造。注：基因工程中人工合成目的基因的方法与此的区别是：从生物体内提出蛋白质分析其氨基酸序列mRNA碱基序列DNA碱基对序列人工合成 移栽再分化脱分化三、细胞工程植物组织培养：离体的植物器官、组织、细胞(外植体)愈伤组织胚状体试管苗植株。说明：详细见笔记 生产细胞产品培养到愈伤组织，生产人工种子培养到胚状体 要获取脱毒植株，所用材料为根尖，茎尖，所得试管苗为脱毒苗。秋水仙素处理单倍体育种：父本母本F1F1花药离体培养单倍体幼苗正常纯合体植株。 丨-第一年-丨 丨-第 二 年-丨植物组织培养筛选诱导植物细胞杂交：融合细胞

3、杂种细胞杂交植株去壁A植物细胞 A原生质体 B植物细胞 B原生质体 胰蛋白酶加入培养液动物细胞培养：(贴壁生长接触抑制)分 装动物胚胎或幼龄动物组织器官剪碎，胰蛋白酶处理细胞悬液原代培养传代培养（10代以内10-50代50代以后） 胚胎移植电脉冲等核移植：重组细胞重组胚胎受体子宫生出后代核移植体细胞培养（10代以内）取核 培 养卵母细胞培养到M中期去核 从小鼠腹水中提取单抗体内培养多孔培养板选择培养基诱导单克隆抗体：体外培养融合细胞杂交瘤细胞能产生特定抗体的杂交瘤细胞免疫小鼠B淋巴细胞从培养液中提取单抗专一抗体检验骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞 （重复，以使每个小孔中是单一细胞克隆系）四、胚胎工程

4、试管动物（含试管婴儿。注意与核移植比较） 胚胎移植培 养受精卵 早期胚胎受体子宫生出后代 体外受精精子的采集获 能 (发育培养液)卵子的采集培养(M中期)（获能液或受精液） 说明：若精子是以前采集并冷冻保存的，则获能前应解冻和离心。 若卵子是从输卵管中采集的，则一般已处于M中期，可不培养。 设计试管婴儿在胚胎移植前加一步：取一个早期胚胎细胞，进行遗传学诊断(基因检测)。胚胎移植 (冲卵) (发育至桑椹胚或囊胚阶段)同期发情处理选择供体超数排卵处理配种或人工受精胚胎的收集胚胎质量检查冷冻保存(-196液氮)选择受体发情胚胎移植妊娠检查生出后代说明：这只是胚胎移植的途径之一，胚胎移植所需要的胚胎还可来自体外受精和核移植。 (手术法，非手术法)卵裂胚胎干细胞培养 胚胎干细胞分离培养受精卵全能细胞囊胚 胎儿 生殖腺细胞 内 细 胞 团 细 胞 说明：胚胎干细胞常取自囊胚期内细胞，是因为此时细胞较多，且操作方便。 胚胎工程的基础是受精和早期胚胎发育的规律（理论基础）。 胚胎工程的技术基础是体外受精和胚胎移植。