蜂花粉提取物抗氧化作用研究报告 .docx

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1、精品名师归纳总结蜂花粉提取物抗氧化作用的讨论厉 阗，曹 炜，宋纪蓉西北高校化工学院，陕西西安， 710069）摘要 ： 为进一步开发利用蜂花粉资源，讨论5 种蜂花粉活性成分的抗氧化性。采纳超声法，以甲醇为溶剂提取 5 种蜂花粉活性成分。测定提取的5 种蜂花粉活性成分对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率和脂质过氧化的抑制率。结果说明： 5 种蜂花粉均具有较强的抗氧化作用，其中荞麦花粉甲醇提取物对超氧阴离子的清除作用和脂质过氧化的抑制才能最强。油菜花粉甲醇提取物对羟基自由基和二苯代苦味酰 0089-06生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。现代医学讨论证明，衰老、癌症及炎症

2、等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系1 。自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应，造成相关细胞结构与功能的破坏，其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损耗，使人体发生病变。在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情形下，假如不准时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化才能，人体就会加速衰老、易患疾病。自然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用，同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。因此，对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的自然抗氧化剂讨论，己得到普遍关注 2 。花粉是植物的雄性生殖细胞，它存在于雄蕊的花药之中。蜂花粉是蜜蜂采集花粉后用自己的唾液和花蜜粘合形成

3、的颗粒，比单一花粉更有养分价值3 。蜂花粉中含有黄酮类、维生素、激素、核酸、酶类和微量元素，具有特有的抗衰老作用，是良好的抗氧化食品。蜂花粉的种类不同，所含成分有很大区分，因此讨论不同种类蜂花粉的抗氧化作用具有重要的价值。本文讨论蜂花粉甲醇提取物对超氧阴离子、羟 基自由基、 DPPH 自由基的清除与脂质过氧化的抑制作用，通过对比不同蜂花粉对氧自由基的清除率和脂质过氧化的抑制作用，为开发利用蜂花粉资源供应依据。1 材料与方法1.1 材 料1.1.1 样品与试剂油菜蜂花粉、荞麦蜂花粉、茶叶蜂花粉、芝麻蜂花粉、益母草蜂花粉由陕西老蜂农蜂业有限责任公司提供。二苯代苦味酰自由基DPPH 为Sigma公司

4、产品，分析纯。甲醇、硫代巴比妥酸 中加入 7.5 L用10mmol/LHCl 配成的 50mmo1/L 邻苯三酚溶液，快速混匀，倒入光径cm的石英比色杯内，在 325nm波长光线下，每隔30s测吸光值 / A自氧化 100%式中： A自氧化 为自氧化对比值， A样品 为样品值。2） 蜂花粉对羟基自由基的清除作用 5， 6 。在 10mL 硬质试管中，依次加入 KH 2PO4- K 2HPO 4PH7.4 缓冲液 0.4 mL ，肯定量的样品液 0.05 mL ，定容为 1.0mL 。然后，将试管置于 37的恒温水浴锅中保持 1h，取出，快速添加 1mL10% TCA 三氯乙酸 及1%TBA1m

5、L, 在100沸水中加热 15min ，取出，冷却，于 532 nm处测吸光值。按下式运算清除率抑制率 = A模型 -ADR -A样品/ A样品 100%式中： A模型为模型管吸光度 不加样品）， ADR为加入清除剂和 DR 后的吸光度， A样品为样品本身的吸光度 / AC 100%4） 蜂花粉对脂质过氧化的抑制作用 8 。取 0.2mL 卵磷脂溶液，加入样品，加入 50 L FeSO4347.5 mg FeSO4 ， 35 mg Vc ，定容至 25 mL 溶液，加 PBS缓冲液 p 7.4定容至 3 mL ， 37育温 40 min，每 5 min 摇匀一次。然后，加入 TCA 和1% 硫

6、代巴比妥酸 1 mL ，摇匀， 100水浴 15 min ，5000 r/min 离心 10min ，于 532 nm处测定吸光度，用蒸馏水做空白。抑制率 = A模型 A样品 / A模型 A空白 100%式中 ：A模型 为模型管的吸光度， A样品 为样品的吸光度， A空白为空白管的吸光度。2 结果与分析2.1 对超氧阴离子自由基的清除作用可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结超氧阴离子自由基是第一个生成的氧自由基，又是全部氧自由基的前身，可以转化为其他氧自由基。因此，对超氧阴离子自由基的清除可以有效的削减氧自由基的生成，具有特别重要的意义。图1为5种 蜂 花 粉 甲 醇 提 取 物

7、对 超 氧 阴 离 子 自 由 基 的 清 除 作 用 。由图 1可知： 5种蜂花粉对超氧阴离子自由基均有肯定的清除才能，且清除率随提取物加入量的增加而增大，清除才能依次为荞麦蜂花粉芝麻蜂花粉油菜蜂花粉茶叶蜂花粉芦丁对比品益母草蜂花粉。加入量 20L时，荞麦蜂花粉的清除率达27.2%，其他 4种蜂花粉的抑制率7.4% 16.9% ，说明此用量下的5种蜂花粉清除率较低。随着加入量进一步增大，5种蜂花粉和芦丁对比品清除率逐步增大，当加入120L时荞麦、芝麻、油菜、茶叶、芦丁、益母草蜂花粉的清除率分别为92.1%、86.5% 、83.2% ，、 76.3%、7 0.2% 、64.3% ，说明此用量下

8、的荞麦、芝麻、油菜蜂花粉、茶叶蜂花粉提取物的清除才能强，而益母草蜂可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结花粉提取物的清除才能相对弱。100可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结8060/%40率除20清0050100150200 荞麦蜂花粉 芝麻蜂花粉 油菜蜂花粉 茶叶蜂花粉 芦丁对比品 益母草蜂花粉可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结加入量 / L图 15 种蜂花粉甲醇提取物对超氧阴离子自由基的清除作用Fig.1Scavenging Effect of Five Kinds of Bee Pollen Extracts on Superoxide Radica

9、l2.2 对羟基离子自由基的清除作用羟基自由基是活性氧中最活泼的自由基，也是毒性最大的自由基，几乎能与活细胞中任何分子发生反应，且反应速度极快。图2为5种蜂花粉甲醇提取物对羟基离子自由基的清除作用。110可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结100/%90率除80清70 荞麦蜂花粉 芝麻蜂花粉 油菜蜂花粉 茶叶蜂花粉 芦丁对比品 益母草蜂花粉可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结600102030加入量 /L可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结图2 5种蜂花粉甲醇提取物对羟基离子自由基的清除作用Fig .2 Scavenging effect on OHof F

10、ive Kinds of Bee pollen extracts从图 2可见： 5种蜂花粉甲醇提取物对羟基离子自由基均有较强的清除才能，且清除率随提取物加入量的增加而增大，清除才能依次为茶叶蜂花粉油菜蜂花粉芦丁对比品荞麦蜂花粉芝麻蜂花粉 益母草蜂花粉。在反应体系中加入茶叶和油菜花粉提取液5L的清除率分别为 86.9% 、83.6% ，清除才能较弱的益母草蜂花粉提取物的清除率为65.3% 。当提取液加入量为 25L时，茶叶、油菜、荞麦、芦丁、芝麻、益母草蜂花粉提取物的清除率分别为99.4%、95.3% 、93.8% 、9 2.1%、89.3% 、86.2%。2.3 对 DPPH 自由基的清除作用

11、DPPH在有机溶剂中是一种稳固的自由基，呈紫色，在515nm处有强吸取，在有自由基清除剂存在时，DPPH 的孤电子被配对，使其颜色变浅，在最大吸取波特长的吸光度变小，且这种颜色的变浅程度与配对电子数成化学计量关系。因此，可通过在此波特长吸光度的测定来评判自由基的清除情形。在0.025mg mLDPPH 自由基的反应体系中，各种花粉溶剂提取物对DPPH自由基的清除才能如图3所示。由图 3可见： 5种蜂花粉甲醇提取物对 DPPH自由基清除才能依次为油菜蜂花粉荞麦蜂花粉芦丁对比品茶叶蜂花粉芝麻蜂花粉益母草蜂花粉。在反应体系中加入10L油菜、荞麦蜂花粉提取液，清除率分别为83.2% 、80.3%，芝麻

12、蜂花粉提取物对DPPH自由基的清除率为 65.2% 。随着花粉提取物加入量的增大，清除率也逐步增大，当加入80L时，荞麦、茶叶、油菜蜂花粉甲醇提取物的清除才能均在95%以上，芝麻蜂花粉清除才能也达93.3% ，益母草蜂花粉的清除才能较弱，为88.2% ，说明 5种蜂花粉对 DPPH 自由基都有很强的清除才能。110100可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结90/%率80除清70 荞麦蜂花粉 芝麻蜂花粉 油菜蜂花粉 茶叶蜂花粉 芦丁对比品 益母草蜂花粉可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结60020406080100加入量 /L图3 5种蜂花粉甲醇提取物对DPPH自由基的清

13、除作用Fig.3 Scavenging effects of five kinds of bee pollen extracts on DDPH2.4 对脂质过氧化的抑制作用可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结脂质过氧化作为动脉粥样硬化的病因之一，可以启动某些引发动脉粥样硬化的反应，而在动脉粥样硬化发生进展的过程又会加重脂质过氧化反应。5种蜂花粉提取物对脂质过氧化体系的抑制作用结果见图4。由图 4可知： 5种蜂花粉提取物对其均有抑制作用，其抑制作用随提取物加入量增大而增强，油菜蜂花粉提取物对脂质过氧化体系的抑制作用最强，反应体系中加入 5L甲醇提取物时，抑制率为 80%，加入 60

14、L时，抑制率达 96.2% 。荞麦蜂花粉对脂质过氧化体系的抑制作用最弱，加入 5L时抑制率仅 31.2% ，加入 60L时抑制率为 65.4% 。对脂质自由基的清除才能依次为油菜蜂花粉益母草蜂花粉芦丁对比品芝麻蜂花粉荞麦蜂花粉。100可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结80/%率60除清40 荞麦蜂花粉 芝麻蜂花粉 油菜蜂花粉 茶叶蜂花粉 芦丁对比品 益 母 草 蜂花粉可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结20020406080加入量 / L可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结3 结 论图4甲醇提取 5种蜂花粉对脂质过氧化体系的抑制作用Fig .4Antiox

15、idative activity of five kinds of bee pollen extracts to Lipid peroxidation可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结1）本文仅对 5种蜂花粉甲醇提取的体外抗氧化活性进行了初步讨论，蜂花粉已被应用于制造保健食品，其在体内的氧化作用有待进一步讨论。2蜂花粉中含有大量的黄酮类化合物和酚性化合物，这些化合物对蜂花粉抗氧化才能的奉献率值得进一步讨论。3 蜂花粉是较强抗氧化性的保健食品，有很大的开发前景。参考文献：1 方允中 , 郑荣梁 .自由基生物学的理论与应用 M . 北京：科学出版社， 2002.2 张燕平 .自然蜂胶

16、对自由基的清除作用J .食品与发酵工业， 2002， 28l ： 48-52.3 王开发 . 花粉养分成分与花粉资源利用M .上海：复旦高校出版社，1993.4 庞战军，周玫，陈瑗 .自由基医学讨论方法 M . 北京：人民卫生出版社，2000.5 HALLIWELL B， GUTTERRIDE J M C ， ARUMOA O I.The deoxyribose method： A simple“ Test Tube” assay for determination of rate constants for reactions of hydroxyl radical J.Analytical

17、 Biochemistry ，1987,165 ： 215-219.6 李小定，荣建华，吴谋成.灰树花多糖 PGF-1题外对羟基的抑制作用J.食品科学， 2003， 247 ： 126- 130.7 7可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结张尊听，杨伯伦，刘谦光，等.野葛根异黄酮成分的超声萃取及抗氧化作用J.食品科学， 2002， 235 ：3 1-33.8 吕晓玲，朱惠丽，姜平平，等. 紫苏提取物抗氧化活性体外试验讨论J. 中国食品添加剂 ,2003 ， 5：22-25.编辑 张银玲）A study on the antioxidantaction of bee pollen me

18、thanol extractsLI Tian， CAO Wei， SONG Ji-rong. Results showed that the extracts of the bee pollen could inhibit lipid peroxidation and scavenge active oxygen free radicals. The bee pollenof rape extracts showed the highest scavenging effects on the hydroxyl radical and DPPH and the bee pollen of buc

19、kwheat extracts showed strongest inhibitoryeffect on the antioxidationof superoxidizedanionic and lipid peroxidantion.Key words: bee pollen。 antioxidant action 。 methanol extracts作 者 简 介厉阗，男，生于 1970 年 10 月，陕西西安人。硕士生。1995 年毕业于郑州工学院化工系有机工艺专业，同年到西安化工学校任教，主要从事精细化工产品化学及应用、有机化学、高等有机化学、分别工程等教案工作，2000 年被评为讲师，。 2002 年到西北高校化工学院攻读硕士学位，开头蜂花粉保健食品的讨论，主要从事花粉的黄酮类物质的提取方法、抗氧化性、成分分析等讨论工作。可编辑资料 - - - 欢迎下载