Feulgen反应和Brachet反应.ppt

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1、镜头编号镜头编号ABCDEF标本明暗标本明暗背景明暗背景明暗图象清晰否图象清晰否镜头类型镜头类型（明反差、暗反差（明反差、暗反差和普通物镜三种）和普通物镜三种）4020NH20 1040NH40PL 负相差物镜（负相差物镜（Negativecontrast）用缩写字母）用缩写字母“N”表示，正相差物镜表示，正相差物镜（Positivecontrast）用缩写字母）用缩写字母“P”表示，由于吸收膜对通过它的光线表示，由于吸收膜对通过它的光线的透过率不同，可分为高、中、低及低低，如的透过率不同，可分为高、中、低及低低，如Olympus光的透过率分为：光的透过率分为：7%、15%、20%、40%四个

2、等级，因此分为高（四个等级，因此分为高（High略写为略写为H），中），中（Medium略写为略写为M），低（），低（Low略写为略写为L）及低低（）及低低（LowLow略写成略写成LL）四类，构成了负高（四类，构成了负高（NH）、负中（）、负中（NM）、正低（）、正低（PL）和正低低（）和正低低（PLL）四）四种类型相差物镜，这些字母符号都写在相差物镜的外壳上。可根据被检物体种类型相差物镜，这些字母符号都写在相差物镜的外壳上。可根据被检物体的特性来选择使用不同类型的相差物镜。的特性来选择使用不同类型的相差物镜。 实验二实验二 细胞化学细胞化学 n多糖的显示多糖的显示PAS反应反应n核酸核酸(

3、DNA及及RNA)的显示法的显示法细胞化学是利用特殊的试剂与细胞的特定成分其化学变化引起颜色反应，并用显微镜鉴别所示物质成分的性质和位置的方法。一、多糖的显示一、多糖的显示PAS反应反应（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理 （三）实验操作（三）实验操作（四）作业（四）作业（二）实验原理（二）实验原理n用具有氧化作用的过碘酸处理使多糖产生游离的醛基， 醛基与Schiff试剂结合可形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位形成紫红色的化合物。（三）实验操作（三）实验操作1、取马铃薯块茎切成薄片，浸入过碘酸溶液10分钟；2、用70的酒精冲洗1次；3、将薄片放入Schiffer试剂中2

4、025分钟；4、取出放入还原液1分钟；5、70的酒精冲洗1次；6、将薄片放在载玻片上吸去酒精，加上盖玻片，镜下观察。n实验结果：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色实验结果：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色淀粉颗粒。淀粉颗粒。 （四）作业（四）作业n1、写出PAS反应的试验原理，绘制实验结果，并描述。n2、对于PAS反应的对照实验，你认为应该怎样设计，请写出完整的实验步骤。二、核酸二、核酸(DNA及及RNA)的显示法的显示法（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理 （三）实验操作（三）实验操作（四）作业（四）作业（二）实验原理（二）实验原理1、Feulgen反应的原理反应的原理

5、n根据DNA经弱酸水解后，打开了嘌呤碱基和脱氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈现为紫红色。2、Brachet反应的原理反应的原理 n利用核酸分子上的磷酸根和碱性染料形成盐键而在原位沉淀显色的原理，根据DNA和RNA对碱性染料的亲合力有差别，用Unna试剂进行选择性染色是显示核酸的方法之一。在Unna试剂中甲基绿与空间构型完整的DNA亲和力高，并且甲基绿分子中的两个含N基团带正电荷正好与DNA分子的负电基团相结合，这样DNA被Unna试剂中的甲基绿染成绿色或蓝绿色。而RNA则被Unna试剂中的派咯

6、宁（Pyronin G ）染成红色。 甲基绿甲基绿派洛宁派洛宁（三）实验操作（三）实验操作取小麦根尖、蚕豆根尖和洋葱内表皮于浸入预热至取小麦根尖、蚕豆根尖和洋葱内表皮于浸入预热至6060的的1N Hcl1N Hcl中水解，时间分别为中水解，时间分别为8 8分钟、分钟、2 2分钟、分钟、10 min10 min。转入转入SchiffSchiff液中染液中染2025 min2025 min，待根尖变为深红色；，待根尖变为深红色；在新配亚硫酸水中洗两次，每次在新配亚硫酸水中洗两次，每次 1 min1 min；水洗水洗 2 min2 min，在载玻片上切下深红色根尖备用；，在载玻片上切下深红色根尖备用

7、；加一滴加一滴4545HAcHAc于载片上，将根尖放入，加上盖玻片压片，于载片上，将根尖放入，加上盖玻片压片，轻轻敲打，镜下观察。轻轻敲打，镜下观察。1、Feu1gen反应反应2、 Brachet反应反应n撕取洋葱鳞茎内表皮一块置载玻片上；n加一滴Unna试剂，染30min；n用自来水冲洗1次，加上盖玻片，用滤纸吸干水分，镜下观察。n在显微镜下可观察到DNA所在的核和染色体染成绿色或蓝绿色，含有大量RNA的核仁呈鲜红色，含有RNA的细胞质呈淡红色。（四）作业（四）作业n分别写出Feulgen反应和Brachet反应的原理，并分别绘图描述所观察到的试验结果。n比较洋葱表皮细胞经Feulgen反应

8、和Brachet反应后显色的差异，说明产生差异的原因。蚕豆根尖细胞蚕豆根尖细胞Feulgen反应反应细胞核（紫红色）细胞核（紫红色）核仁（无色）核仁（无色）小麦根尖细胞小麦根尖细胞Feulgen反应反应细胞核（紫红色）细胞核（紫红色）核仁（无色）核仁（无色）洋葱鳞茎内表皮洋葱鳞茎内表皮Brachet反应反应细胞核（蓝绿色）细胞核（蓝绿色）核仁（鲜红色）核仁（鲜红色）PAS反应反应淀粉颗粒淀粉颗粒小麦根尖细胞小麦根尖细胞Feulgen反应反应蚕豆根尖细胞蚕豆根尖细胞Feulgen反应反应细胞核（紫红色）细胞核（紫红色）核仁（无色）核仁（无色）细胞核细胞核（紫红色）（紫红色）核仁（无核仁（无色）色

9、）小麦根尖细胞小麦根尖细胞Feulgen反应反应细胞核（蓝细胞核（蓝绿色）绿色）核仁（鲜红核仁（鲜红色）色）洋葱鳞茎内表皮洋葱鳞茎内表皮Brachet反应反应PAS反应反应淀淀粉粉颗颗粒粒进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停

10、，嘴里叨叨着少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”，于是三，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑强子，别跑了，快来我给你扇扇了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的

11、样子，边扇边训，“你你看热的，跑什么？看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅道，袅