植物叶片DNA提取步骤.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流植物叶片DNA提取步骤.精品文档.植物叶片DNA提取方案CTAB 法基本步骤如下：取鲜样02 g 左右置研钵中，加2不溶性PVP、液氮研磨至粉末状，转入2 mL 离心管；加入07 mL 65预热的CTAB 提取液，混匀，65水浴30 min； 加入等体积酚 氯仿 异戊醇（25241），混匀，室温10 000 rmin离心10 min；取上清液，重复步骤12 次；取上清液，加12 体积的5 molL NaCl，加23体积的异丙醇，置20冰箱2 h，沉淀DNA；4、10 000 r min 离心10min；弃上清，用70乙醇溶液洗沉淀2 次，风干

2、，用50 L TE溶解； 加入无DNase 的RNase 至终浓度为10 gL，37保温30 min，20保存备用。(8)加入终浓度5099ml的RNase，37保温1h；(9)用等体积的氯仿异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；(10)上清液中加入O1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中-20放置05h，12000rpm，离心10min，去上清液；(11)用70的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；）2%CTAB提取液：100 mmolL TrisHCl（pH8.0），1.4 molL NaCl，20 gL CTAB，20 mmolL EDTA，1巯基乙醇（用前加）。