血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法作业指导书.doc

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1、血清葡萄糖血清葡萄糖 GLUGLU 己糖激酶己糖激酶 HKHK 法测定法作业指导书法测定法作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 己糖激酶紫外比色测定法。 HK 葡萄糖 + ATP -G-6-P+ ADP Mg2+ G6PDH G-6-P + NAD+ -6-磷酸葡萄糖 +NADH + H+ 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 12 小时禁食。 2.2 类型：血清或血浆（ EDTA，肝素或氟化钠），标 本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖 酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。 3 3. . 标标本本存存放放： 血清、血浆应在血液采集1 小时内， 尽早分离。加入糖分解抑制

2、剂（NaF，KF）后的稳定 性：1525保存可稳定 1 天,48保存可稳定 7 天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加 的防腐剂，在 25下可稳定 8 个小时，在 4下可稳 定 72 小时。尿样应保存在28下并尽快进行分析。 脑脊髓液如果避免蒸发可在28下稳定至少 5 天， 5 天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20的 条件下。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染、超时送检的的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能血糖测定试剂盒（ 141 2517170 1 试剂 1 664ml试剂 2

3、616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1： Tris 缓冲液 pH7.8 80mmol/L Mg2+ 4mmol/L ATP 1.7mmol/L NAD 1.7mmol/L 试剂 2： Mg2+ 4mmol/L 己糖激酶 1500U/L 葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶 1500U/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28，若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞 下有害。保护

4、剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下 水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的 叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪操作规

5、程 .SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品血糖校准值校 准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可 靠的检测结果，以mmol/L 报告。手工测定计算方法为： Au 葡萄糖浓度（ mmol/L） 校准液浓度 As 1 12 2. . 参参考考值值范范

6、围围： （mmol/L） 新生儿 脐带血 3.58.8 1 小时 2.05.5 2 小时 2.24.9 514 小时 1.94.3 1028 小时 2.64.5 4452 小时 2.74.4 儿童（空腹） 16 岁 4.17.0 719 岁 3.95.9 成人（空腹） 3.96.4 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义： 检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖 尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖症、 排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。 血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖

7、）或异常低（低 血糖） 。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊 乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发性低血糖，郎格 罕氏岛细胞癌等。 葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中 很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一 天之中有一个显著的变化。 脑脊髓液（ CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑 膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中 的葡萄糖值通常很低（不到的40%至 50%血清葡萄糖）， 病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎 （肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF 葡萄糖值在 正常值以下。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 0.12

8、8mmol/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV (%) 批间精密 度 n=20 x (mmol/ L) s (mmol/L ) CV (%) 样品 1 5.050.0470.94 样品 1 3.650.0772.11 样品 2 6.500.0590.91 样品 2 6.720.1422.11 样品 3 16.100.1270.79 样品 3 16.540.2961.

9、79 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 76 个样品进行 GLU 检测，将检测结 果作方法学比较，其统计结果如下： y=1.00 x+0.00mmol/L；r=0.998。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.1mmol/L。 14.5 病人结果可报告范围： 0.128mmol/L 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法线性上限为 28mmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用 0.9%氯化钠溶液作 1:10 稀释，重新测定，结果乘以 11。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理：女女性性及及婴婴儿儿的血糖

10、测定值 22.2mmol/L；男男性性的血糖测定值 22.2mmol/L；新新生生儿儿 的血糖测定值 16.6mmol/L 时，在经过复查等确认手段 处理后应及时向临床主管医生汇报。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限为 28mmol/L。如样品测定值超过 上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作 1:10 稀释， 重新测定，结果乘以11。 17.2 干扰物质：使用试剂起始法，当样品中抗坏血酸 浓度1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋 白浓度 5.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有 观察到干扰。 1 18 8. . 补补救救措

11、措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.131-7. 2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. p. 750-808. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。