高效液相色谱法测定芝麻油中木酚素的含量.pdf

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1、高效液相色谱法测定芝麻油中木酚素的含量高效液相色谱法测定芝麻油中木酚素的含量摘要:本文以芝麻油为原料,通过 Kieselgel 60 预处理得到木酚素混合物 ,利用Agilent C18 分离柱,以无水甲醇-水(7030,V/V)为流动相,建立了芝麻油中芝麻酚芝麻素和芝麻林素 3 种木酚素同时定量分析的 HPLC 方法通过样品分析重复性实验和回收率实验,分析结果表明该法用于分离芝麻油中各木酚素分离效果良好,峰形尖锐,基线平稳,可在 10 min 内完成,线性范围 5200 g/mL,方法精密度及回收率均较好,定量结果准确可靠,是一种简便稳定可靠的木酚素检测方法 同时利用所建立的方法对市售20种

2、芝麻油和3种芝麻色拉油中木酚素进行了分析关键词:芝麻油;芝麻酚;芝麻素;芝麻林素;高效液相色谱;测定HPLC Methods of Analysis for Lignans in Sesame OilAbstract: A quantitative HPLC method for sesamol, sesamin and sesamolin insesame oil samples was established in this paper. The sample of sesame oil waspretreated by chromatographic column packed with

3、 Kieselgel 60 and separated in theAgilent C18 column with the mobile phase of CH4O-H2O(70 30, V/V). The HPLCanalysis cost about 10 min, and the linearity range was between 5200 g/mL. Theresults showed that this method was brief, stable, and reliable for its separation shapeacuity and base steadiness

4、. The sesamol of 20 brands of sesame oil samples and 3brands of sesame salad oil samples bought in local market were analyzed by thismethod.Key words: sesame; sesamol; sesamin; sesamolin; HPLC; determination芝麻是几种最古老的油料作物之一,已有 6000 年的利用历史近年来,芝麻或芝麻油中的木酚素引起了世人的极大关注 木酚素是一类脂溶性抗氧化物质 ,在芝麻中的含量很低,约占 0.5%1.0%

5、,主要包括芝麻酚(Sesamol)芝麻素(Sesamin)和芝麻林素(Sesamolin)1,2芝麻油中虽然含有大量不饱和脂肪酸,但其氧化稳定性高于其他植物油,现有研究表明,木酚素的抗氧化活性是保持芝麻油中不饱和脂肪酸稳定性的主要原因此外,该类化合物还具有促进乙醇代谢调节血脂代谢抗癌保护中枢神经系统及调节免疫等功能3-7芝麻油中的木酚素含量不仅是评价芝麻油品质的重要指标 ,也是培育优良芝麻品种的重要判定依据目前,已报道的检测方法主要有显色法8紫外分光光度法9薄层色谱法10气质联用法(GC-MS)11高效液相色谱法 (HPLC)12,13以及液相色谱-核磁共振-质谱联用法(LC-NMR-MS)1

6、4等HPLC 法可定性和定量分析木酚素,其分析时间短,重现性好,准确可靠,是目前的常用分析方法,但现有方法多为芝麻酚芝麻素芝麻林素的单项检测,本文在已有研究的基础上,建立了芝麻酚芝麻素芝麻林素同时定量检测的 HPLC 法,并对市售芝麻油进行鉴定1 材料和方法1.1 材料与试剂20 种芝麻油和 3 种芝麻色拉油(购于南京家乐福);无水甲醇正己烷乙酸乙酯(分析纯)购于上海国药化学试剂有限公司 ;99%芝麻酚(南京泽朗医药科技有限公司);芝麻素和芝麻林素的标准品为实验室自制,化合物为白色结晶芝麻素UV(MeOH)(max nm):236,287EI-MS m/z 377M+Na+经 HPLC 检测,

7、纯度为99%芝麻林素 UV(MeOH)(max nm):236,289EI-MS m/z 393M+Na+经 HPLC检测,纯度为 99%1.2 仪器与设备AY-120电子精密天平;BL-220H 分析天平(日本 Shimadzu);HH-4 数显恒温水浴锅(江苏 国华 电器 有限公司 );Agilent 1100 高效液 相色 谱仪 (美国安捷 伦公司);Heidolph Laborota 4000 真空旋转蒸发仪(德国 Heidolph);玻璃层析柱 1.630cm;Kieselgel 60(0.0630.200 mm)购于 MARK 公司(德国 Darmstadt)1.3 实验方法1.3

8、.1 芝麻油样品的预处理准确称取 1 g芝麻油,溶解于乙酸乙酯,上 Kieselgel 60硅胶柱,以梯度浓度的甲醇和正己烷洗脱,浓度梯度从9010到3070(V/V),每次洗脱液中正己烷的含量增加 10%,取 1 mL 收集到的洗脱液旋转蒸发除去溶剂,再添加5 mL甲醇震荡静置,取上清液于290 nm下测定其吸光度,合并吸光度较大的的洗脱液,旋转蒸发后,获得木酚素粗提物1.3.2 木酚素的分析条件色谱柱:Agilent(C18, 4.6 mm150 mm,填料粒度 5 m);检测器:Agilent 1100 紫外检测器;流动相:甲醇水=7030(V/V);流速:1.0 mL/min;检测波长

9、:290 nm;柱温:35;进样量:20 L2 结果与分析2.1 标准曲线及检出限配制不同浓度的芝麻酚芝麻素和芝麻林素标准溶液,以HPLC法测定各组分的峰面积芝麻酚浓度和峰面积的线性关系为:y=33.91x-26.17,相关系数 r=0.999 9;芝麻素浓度和峰面积的线性关系为:y=27.978x+28.106,相关系数 r=0.999 9;芝麻林素浓度和峰面积的线性关系为:y=25.554x-8.080 8,相关系数r=1结果表明芝麻酚芝麻素和芝麻林素在 5200 g/mL 范围内线性很好2.2 芝麻油中芝麻素芝麻林素芝麻酚同时检测可行性实验按照 1.3.1 所述的方法对样品进行预处理后进

10、样分析,结果如图 1从图 1 可知样品处理液有 3 个峰,其分离度高,峰形尖锐,基线平稳,且检测可在10 min 之内完成对比标准样品 HPLC 图谱,可知芝麻酚芝麻素和芝麻林素的保留时间分别为 2.281 min6.397 min 和 8.158 minKamal-Eldin 等人报道的正己烷-氯仿(21,V/V)溶解的方法检测芝麻油中木酚素类物质 ,存在分离度过小的问题,导致实验数据不够准确15本文以甲醇溶解样品,利用 Agilent C18 做为分离柱,可以较好解决分离度不足的问题,可实现 3 种成分的同时定量分析2.3 重现性实验取某一种芝麻油,按照 1.3.1 进行样品预处理,并在该

11、色谱条件下进行检测分析(平行试验,n=5),并计算精密度 RSD由公式 RSD=S/X 计算得:芝麻酚的 RSD 为1.97%,芝麻素的 RSD 为 1.73%,芝麻林素的 RSD 为 1.60%,证明本文所使用检测方法准确有效结果如表 1 所示2.4 回收率实验取已知标准物质含量的芝麻油样品,分别加入已知量的木酚素,进行回收率实验(n=3)按公式(回收率=100%)进行计算,芝麻酚芝麻素和芝麻林素的回收率分别为100.4%,100.1%和 100.3%,回收率结果令人满意2.5 国产芝麻油芝麻色拉油中木酚素的含量对 20 种国产芝麻油和 3 种芝麻色拉油进行检测,并与日本16台湾17芝麻油的

12、报道结果比较,结果如表 2 和表 3 所示芝麻酚芝麻素和芝麻林素在芝麻油中的含量以及三者含量的比例随样本的不同在一定范围内出现波动,本文对国内的20种芝麻油的检测表明国产芝麻油中芝麻酚含量范围为 0.621.12 mg/g,芝麻素含量范围为 3.488.09 mg/g,芝麻林素含量范围为 1.703.97 mg/g,木酚素总含量平均值为 10.001.53 mg/g,根据 Hemalatha和 Ghafoorunissa 的分类属于木酚素含量为中等的芝麻油(1020 mg/g)2由表 1 可知,大部分市售芝麻油中芝麻素和芝麻林素的含量都较高,芝麻素占木酚素总量的 61%,芝麻林素占木酚素总量的

13、 29%,两者的含量与木酚素总量成显著正相关(r=0.961,P0.001;r=0.837,P0.001)三者木酚素中芝麻酚含量最低 ,与芝麻林素成显著负相关(r=-0.570,P=0.009),这与在芝麻油焙煎过程中芝麻林素转变为芝麻酚的加工工艺相符16与日本16台湾17芝麻油相比,我国芝麻油的芝麻林素含量 (3.05 mg/g)与日本(3 mg/g)相当,比台湾(1.74 mg/g)高,而芝麻酚含量是日本的 25 倍,台湾的 2.6 倍数,这可能是因为日本芝麻油生产工艺中芝麻种子在榨油之前没有焙煎,减少了芝麻酚的转化18同时对检测样品的观察发现 610 和 13 号样品颜色深并且芝麻酚的含

14、量也高芝麻油的色度与芝麻酚含量的关系有待进一步研究 ,推断可能芝麻油的颜色反映了芝麻酚的含量,但从本文检测结果分析芝麻油的颜色与木酚素的总含量无关芝麻色拉油也是市场常见的商品,通常是在芝麻油中加入了其它植物油调和而成本文测定了 3 种市购芝麻色拉油中的木酚素,结果显示其中的木酚素约为是国产芝麻油的五分之一3 结论本文利用 Agilent C18 分离柱,以甲醇-水(7030,V/V)为流动相,建立了芝麻油中芝麻酚芝麻素和芝麻林素的同时检测的 HPLC 方法该法可在 10 min 之内完成,线性范围为 5200 g/mL,各组分标准曲线相关系数大于 0.999 9,芝麻酚芝麻素和芝麻林素的平均回

15、收率(n=3)分别为 100.4%,100.1%和100.3%,重现性(n=5)分别为芝麻酚 RSD=1.97%芝麻素 RSD=1.73%和芝麻林素 RSD=1.60%,是一种简便重现性好结果准确的的木酚素检测方法利用该法分析 20 种市售国产芝麻油和 3 种芝麻色拉油中的木酚素,结果表明我国国产芝麻油中木酚素含量为中等水平,芝麻素占木酚素总量的 61%,芝麻林素占木酚素总量的 29%,并且这两者的含量与木酚素总量成显著正相关,芝麻酚含量较低且与芝麻林素成显著负相关芝麻色拉油木酚素含量大约是国产芝麻油的五分之一参考文献:1 张秀荣,李培武,汪雪芳,等.芝麻种子木质素组分粗脂肪粗蛋白含量及相关性

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