高效液相色谱法测定青霉素钠的含量分析平.pdf

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1、高效液相色谱法测定青霉素钠的含量分析平高效液相色谱法测定青霉素钠的含量分析平摘要】目的：通过高效液相色谱法测定青霉素钠的含量。方法：使用醋酸钠溶液(PH4.0)-甲醇(1:1)流动相，并在 C18 上进行分析。结果：检测波长为 235 纳米，外标法;回收率 99.92%，在 0.41.4 毫克每毫升范围内良好，r=0.999。结论：通过高效液相色谱法测定青霉素钠的含量与硝酸汞电位滴定测定结果没有太大差异，但其具方法简单、测定快速、并结果准确的特点。【关键词】高效液相色谱法；青霉素；钠含量青霉素是一种良好的抗菌药物，在医学界也被广泛的使用，其主要对革兰氏阳性菌如链球菌、葡萄球菌、肺炎球菌等具有良

2、好抵抗作用，所以由以上病菌所引发的患者全身感染或局部受到重度感染时，会应用到青霉素制药进行治疗。青霉素中纳含量的测定方法有很多，而根据我国的中国药典进行测定青霉素中钠含量的方法为硝酸汞电位滴定法，这种方法要求较为严格，但受到的影响因素也较多，例如，时间因素、温度因素等，在一定程度上也会对环境造成污染。此外，时间因素影响较大，一般需要耗费较长时间才能测定完成，因此并不适合工业进行生产。本文通过高效液相色谱法测定青霉素钠的含量，并对 5 批青霉素进行分别测定，结果证明通过高效液相色谱法测定青霉素钠的含量不仅结果较为标准，而操作方法也较为简捷。 1.高效液相色谱法基本原理高效液相色谱(HPLC)法是

3、以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占 20%，而 80%则需用高效液相色谱来分析。高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。 1.1 高效液相色谱分析原理: 1.1.1 高效液相色谱分析的流程:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，径流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据

4、处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离(极性范围比较宽)还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而 HPLC 改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。 1.1.2 高效液相色谱的分离过程:同其他色谱过程一样，HPLC 也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使得不同溶质得以分离。 2.高效液相色谱法测定青霉素钠的含量 2.1 测定试验需要的仪器及试剂必要的硬件设备：某公司生产的高效液相色谱仪、MOD-EL SD-20

5、0 型号输液泵、UV-C 型号检测器，SP4400 积分仪器、手动进样器、BP-40 半自动青霉素电位滴定分析仪。液体及样品：无水甲醇、醋酸钠、冰醋酸、硝酸汞均为滴定分析纯，青霉素钾（青霉素钾是由中国药品生物制品检定中心提供，其纯度为 99.9%），青霉素钠。 2.2 方法与结果 2.2.1 色谱条件根据色谱柱的标注采用 C18（5um，5mm*250mm） 型号的流动相醋酸钠溶液（其 ph 值为 4.0，液体中醋酸含量为 6.8g，并进行添加 100 毫升的冰醋酸，再用清水稀释到 1000 毫升）-甲醇（1:1），在使用该液体前应进行过滤、脱气处理；另外要求其检测波的长度为 235 纳米，其

6、流速为 1 毫升每分钟，同时进样量为20ul。 2.2.2 回归方程的确立首先进行精密称取青霉素钾对照品 5 份，其次用醋酸钠缓冲液制度量度分别为 0.4 毫克每毫升、0.8 毫克每毫升、1.0 毫克每毫升、1.2 毫克每毫升、1.4 毫克每毫升的溶液，并对进样量进行分别采取，一般为 20ul。通过对进样量的测定，记录其色谱图。结果显示：当青霉素波度在 0.4 毫克每毫升到 1.4 毫克每毫升时，峰面积与浓度形成良好的线性关系。最终确立其回归方程式为A=2.3230*105+5.5704*106C，r=0.99. 2.3 样品含量测定 2.3.1 高效液相色谱法取青霉素 钠样品(约 100mg

7、),精密称定,置 100m 1 容量瓶中,用醋酸钠缓冲溶液(pH6.0)溶解并稀释至刻度，摇匀,用微孔滤膜(0.2m)滤过,精密吸取 20l,注入液相色谱仪，记录峰面积。取青霉素钾对照品同法测定，以外标法计算,即得。 2.3.2 硝酸汞电位滴定法精密称取青霉素钠适量,照硝酸汞电位滴定法进行测定。 2.4 结果比较取 5 批样品，分别用高效液相色谱法、硝酸汞电位滴定法进行测定，结果见表 1。 2.5 回收率的测定精密称定已知含量的青霉素钠适量(约 50mg),分别添加不同浓度水平的青霉素钠对照品,用高效液相色谱法进行测定，结果见表2。平均回收率为 99. 92%,RSD= 0.77% n= 5。

8、 3.讨论首先，通过高效液相色谱法测定青霉素钠的含量与其它青霉素钠的含量测量方法对比，其具有操作简单、测定速度快、受到外界干扰小、并结果准确的特点，所以适合应用到工业生产当中。其次，通过高效液相色谱法测定青霉素钠的含量的方法，在使用流动相醋酸钠溶液(PH4.0)-甲醇(1:1)的过程中应注意酸醋钠的结晶现象，结晶的产生往往容易形成进样器的堵塞，并影响测定的进度。所以在测定过程中应及时对进样器进行清洗，清洗的过程一般以冲洗为主。第三，在测定过程中流动相甲醇的用量对青梅素中纳含量的保留时间具有较大的影响，所以在高效液相色谱法测定青霉素钠的含量的方法中应注意甲醇的含量，适当的减少甲醇含量可以延长青霉

9、素中钠的保存时间。第四，长时间的放置的青霉素钠溶液会有降解物产生的可能，如果将带有降解物额溶液进行测定会对测定结果造成一定的影响，所以在测定过程中应尽量避免该现象的产生，并应尽量在6 小时之内完成高效液相色谱法测定青霉素钠的含量的测定过程。参考文献 1陈国良, 李美玉, 陈仙明, et al. 正相高效液相色谱法测定4-AA 对映异构体含量J. 亚太传统医药, 2014, 10(3):31-32. 2黄柳霞, 叶日金, 黄永连, et al. 超高效液相色谱法食品中展青霉素的方法研究J. 食品与发酵科技, 2018, v.54；No.204(02):120-123. 3张博, 杨黎彬, 李金娟, et al. 高效液相色谱法测定拟青霉中活性成分腺苷的含量J. 今日药学, 2011, 21(1):25-26. 4邹洪, 赵红帅, 夏敏, et al. 高效液相色谱法测定功能性红曲米粉中的青霉素G 钠J. 分析试验室, 2006, 25(6):78-80.