抗蛇毒血清效价测定方法小白鼠试验法.doc

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1、抗蛇毒血清效价测定方法小白鼠试验法抗蛇毒血清效价测定方法小白鼠试验法1 1 试剂试剂1.1 标准抗蛇毒血清由中国药品生物制品检定所分发。标准抗蛇毒血清应保存于 28。1.2 蛇毒由检定所分发。试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量（蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇 1 个 L+，五步蛇 2 个 L+）。使用干毒时，须以精确的分析天平称取，每次称取量不得少于 5mg，溶解后应在 3 天内（保存于 28）用完。干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。亦可将干毒制成液体甘油蛇毒，即干毒溶解液与中性甘油（经 11610 分钟灭菌）等量混合，每 ml 至少含 50 个试验量，保存于 28暗处。1.3

2、 稀释液硼酸盐缓冲盐水，灭菌后 pH 应为 7.07.4。配方为：氯化钠 8.5g硼酸 4.5g硼砂 0.5g加蒸馏水至 1000ml，过滤。2 2 用具用具吸管、容量瓶、注射器应经标化。吸管、试管、容量瓶应洁净干燥，其他用具应灭菌。3 3 试验动物试验动物体重 1820g 健康小白鼠。4 4 试验方法试验方法4.1 稀释标准抗蛇毒血清用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每 ml 含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清 5U、或抗五步蛇毒血清 10U，即与 5 个相应蛇毒试验量混合后每 0.4ml 注射量中含 1U 或 2U。4.2 稀释蛇毒用稀释液稀释蛇毒，使其 5 个试验量不超过 0.8ml，在与抗蛇毒

3、血清混合时补加稀释液至 2ml，即每 0.4ml 注射量中含1 个试验量。4.3 稀释待检抗蛇毒血清用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度，使每 ml 抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含 5U 或其上下：抗五步蛇毒血清约含 10U 或其上下。各稀释度间隔 5%10%。4.4 混合4.4.1 待检组定量吸取不同稀释度之待检抗蛇毒血清各 1ml，分别装入小试管中，每管加入 5 个试验量与待检抗蛇毒血清相应的稀释蛇毒液，补加稀释液至 2ml，混合均匀，加塞，置 37结合 45分钟后立即注射小白鼠。4.4.2 对照组按下表定量吸取已稀释之待检抗蛇毒血清相应的标准抗蛇毒血清，分别装入小试管中：对照对照标准抗眼镜蛇毒血清 1ml 1.2ml每管加入 5 个试验量之相应稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置 37结合 45 分钟后立即注射小白鼠。4.5 注射每个稀释度的待检抗蛇毒血清、对照及对照各注射小白习 4 只，每只腹腔注射 0.4ml。应注意勿使注射液流出。4.6 观察试验小白鼠每日观察 1 次，并记录发病及死亡情况，抗银环蛇毒血清及抗五步蛇毒血清之试验小白鼠观察 48 小时，抗腹蛇毒血清及抗眼镜蛇毒血清之试验小白鼠观察 72 小时。4.7 结果判定对照小白鼠死亡 50%以上，对照小白鼠应比对照死亡晚或不死亡。待检抗蛇毒血清之效价应以与对照小白鼠同时死亡之最高稀释度判定。