人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中lgG各组份测定.doc

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1、人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中 lgGlgG 各组份测各组份测定（高压液相凝胶柱色谱法）定（高压液相凝胶柱色谱法）1 1 仪器仪器1.1 高压液相泵1.2 高压液相色谱柱：TSKG3000SW(直径 7.5mm,长 60cm)。TSk Guard Column SW（直径 7.5mm，长 7.5cm）。2 2 试剂试剂2.1 贮存液 A：0.5mol /L NaH2PO4,pH4.8称 39g NaH2PQ42H2O，用超纯水溶解，并稀释至500ml。2.2 贮存液 B：0.5mol /L Na2HPO4称 179.1g Na2HPO412H2O，

2、用超纯水溶解，并稀释至1000ml。2.3 工作液 C：0.2mol /L 磷酸盐缓冲液，Ph7.0（含 1%异丙醇）准确量取 200ml 贮存液 A、420ml 贮存液 B、914.5ml 超纯水、15.5ml 异丙醇，混匀，用 0.45m 水溶性膜过滤并超声脱气。3 3 样品处理样品处理用生理盐水将样品稀释至 4mg/ml，然后用 0.45m 水溶性膜过滤。4 4 操作操作用工作液 C 以 0.6ml/分钟流速平衡高压液相系统至基线平稳。取处理过的样品 25l 上柱，用工作液 C 以 0.6ml/分钟流速洗脱，同时在紫外检测器 280nm 波长下记录色谱图及有关数据。记录数据的时间为 60

3、 分钟。5 5 计算计算5.1 人血白蛋白多聚体含量计算用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出多聚体相对面积百分含量。再根据转化公式换算成相对重量百分含量。转化公式*X（%）=Y1.6504/1.6359其中 X 为凯氏定氮结果，Y 为高压液相结果（如 Y 值小于1.6504，结果不用转化成重量百分含量，但在试验报告中需注明为相对面积百分含量）。5.2 人血丙种球蛋白中 IgG 各组份相对含量计算。5.2.1IgG 各组份峰的划界。图谱中各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。5.2.2IgG 各组份相对含量计算。用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出各组份相对百分含量。*应根据各单位使用的 HPLC 仪器及层析柱型号，经试验后得出转化公式。