中文说明书 UNIONHONEST.doc

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1、 SYSTEMS 中文说明书 UNIONHONEST酶联免疫吸附测试 Enzyme linked lmmunosorbent Assay _鸡（鸡（Chicken）白介素）白介素1(IL-1)ELISA检测试剂盒检测试剂盒本试剂仅供研究使用 试验原理试验原理：IL-1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-1浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-1的浓度呈比例关系。试剂盒

2、内容及其配制试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品：200pg/ml1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗IL-1抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自备材料自备材料：1. 蒸馏水。2

3、. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3. 振荡器及磁力搅拌器等。4.样品收集、处理及保存方法样品收集、处理及保存方法：1、 血清操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液1000g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。1000g离心10分钟，取上清液。5、 保存如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用

4、溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作注意事项操作注意事项： 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用

5、手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。安全性安全性：1. 避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2. 实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。试剂的准备试剂的准备：1. 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：200pg/ml（6号标准 品）原倍浓度不用稀释直接 加入50ul100pg/ml（5号标准 品）100ul的原倍标准品加入 100ul的标准品稀释液50p

6、g/ml（4号标准 品）100ul的5号标准品加入 100ul的标准品稀释液25pg/ml（3号标准 品）100ul的4号标准品加入 100ul的标准品稀释液12.5pg/ml（2号标准 品）100ul的3号标准品加入 100ul的标准品稀释液6.25pg/ml（1号标准 品）100ul的2号标准品加入 100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对 照）原倍浓度不用稀释直接 加入50ul2. 洗涤缓冲液（50）的稀释：蒸馏水50倍稀释。试剂盒性能：1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2. 特异性：不与其它细胞因子反应。3.

7、重复性：板内、板间变异系数均小于10%。操作步骤操作步骤：1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37温育 45 分钟。4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 4 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5. 每

8、孔加入 100ul 的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37温育 30 分钟。6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 4 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7. 每孔加入底物 A、B 各 50ul，轻轻振荡混匀，37温育 5 分钟。避免光照。8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。结结 果果 判判 断断 与与 分分 析析：1、 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、 以吸光度OD值为纵坐标（Y） ，相应的IL-1标准品浓度为横坐标（X） ，做得相应的曲线，样品的IL-1含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。3、 检测值范围： 0-200pg/ml4、 敏感度：0.1pg/ml